产蛋白酶和淀粉酶菌株的筛选及其发酵产酶特性研究

利用酪蛋白固体平板分离培养基、淀粉平板分离固体培养基初筛,液体发酵产酶培养基摇瓶复筛相结合,从实验室保藏的真菌茵株中筛选出一株产蛋白酶的真茵菌株和一株产淀粉酶的真茵茵株,对其固态发酵特性进行了研究．结果表明：蛋白酶产酶高峰为24h,酶活力达到3760tJ／g;淀粉酶产酶高峰为32h,酶活力达到0．405u／g．     

产丝氨酸蛋白酶芽胞杆菌的鉴定及其生防作用

为筛选丝氨酸蛋白酶产生菌用于生物防治,利用丝氨酸蛋白酶的特殊底物BApNA和特异性抑制剂PMSF确定产丝氨酸蛋白酶菌株,依据形态特征、生理生化特性和16SrDNA比对分析对菌株进行鉴定,用对峙法、抑菌圈法和液体振荡培养法观察抗植物病原真菌的作用,用96孔板法观察抗线虫作用。实验筛选到产丝氨酸蛋白酶的芽胞杆菌SNUB19,鉴定结果为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis),该菌株发酵液的无菌滤液对尖孢镰刀菌等植物病原真菌有显著的抑制作用,对南方根结线虫有较强的致死效应。     

脂肪酶高产菌株的筛选及酶学特性研究

从富油土壤中分离筛选到40株脂肪酶产生茵,其中060805茵株产脂肪酶的能力较强,根据其形态特征、生理生化鉴定及16s rDNA鉴定,初步鉴定为短波单胞茵.060805茵株发酵产酶需油脂的诱导,同时也依赖Mg2 ,培养基中不添加Mg2 时产酶量很少,微量的Mg2 就能激活茵体产酶.蔗糖等糖类物质不利于060805菌株产脂肪酶.该酶的最适作用温度为35℃,最适pH为6.0;而且在60℃保温60 min酶活基本不损失,在pH 5.0～8.0范围内稳定.     

产中性蛋白酶的枯草杆菌478的发酵及其基本特性

枯草芽孢杆菌478是为生皮脱毛选育的一株中性蛋白酶产生茵。500 ml 摇瓶,装量50 ml 培养基,接种一小铲,31℃摇床培养40小时,产酶为5502 u/ml。BF—12—Ⅰ型罐发酵28小时,31℃产酶为5795 u/ml。酶的酪蛋白水解最适 PH 为7.0,活性范围为 PH 6.5～7.5,此间热稳定性较好,40℃两小时失活为12%。酪蛋白水解的最适温度为40～50℃。Fe ~(++)Hg~(++)与 Cu 对酶有抑制作用,Ca~(++)与 Mg~(++)则有激活作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析得到9条带。国内外一直沿用的硫化碱脱毛工艺对环境污染严重。酶法脱毛则是解决污染问题的可行途径。半个世纪以来人们对此作了积极的研究。然而,可用的产酶株仍是屈指可数,脱毛工艺的革新受到很大限制。为了推进酶法脱毛工艺向前发展,我们选育了脱毛效果较好的枯草芽孢杆菌478中性蛋白酶产生株。本文对该茵的发酵及其产生的中性蛋白酶的一些基木特性作一报导。     

南极产低温蛋白酶菌株Marinobacter sp.R2的发酵条件及酶学性质研究

从南极海域沉积物中筛选到一产蛋白酶的菌株R2，经细菌学形态特征鉴定及16S rDNA序列分析鉴定，该菌株属于海杆菌属(Marinobacter)．生长特性研究表明该菌株属于兼性嗜冷菌，其最适生长温度为10～15℃．R2菌株能利用多种碳源产酶，最适产酶温度为20℃．粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE cellulose-52柱层析进行初步分离纯化后进行酶学性质的研究．该菌株所分泌蛋白酶的最适作用温度为20℃，最适pH值为9～10，对热敏感．是典型的低温碱性蛋白酶．Ca^2 、Mn^2 、Cu^2 对该蛋白酶有较为明显的激活作用，而Cd^2 、Co^2 则能抑制酶活．高浓度的变性剂、PMSF、AEBSF和EDTA都能抑制该蛋白酶，表明该酶属于丝氨酸蛋白酶，且金属离子对酶活性中心构象有关键性的影响．     

时间及温度对腐乳毛霉生长及产蛋白酶的影响

研究了曲种培养时间、培养温度及培养基成分对腐乳毛霉菌丝生长及产蛋白酶的影响．结果表明,在25℃左右恒温培养36～48h,菌丝生长良好,孢子产生少,蛋白酶产量尤其是酸性蛋白酶产量较高;麦麸豆粉培养基比单纯麦麸培养基利于毛霉菌丝生长及产酶．合理选择培养时间、培养温度及培养基成分,对腐乳毛霉的生长及蛋白酶的适度产生有较好的效果．     

产壳聚糖酶的肠杆菌分离鉴定及其培养特性研究

针对筛选的一株产壳聚糖酶菌株进行了鉴定和培养特性研究．首先对产酶菌株进行鉴别培养基培养、显微镜检并结合生理生化与16SrDNA分子鉴定以确定菌属来源,后对菌株产壳聚糖酶的碳源、氮源、金属盐和诱导物进行筛选优化．结果表明：产酶菌株为产气肠杆菌,最佳培养碳源为葡萄糖,最佳氮源为氯化铵和酵母粉,MnSO4,MgSO4,KCl和NaCl对产酶有积极作用．该菌来源的壳聚糖酶为诱导酶,最佳诱导物为粉末壳聚糖,壳聚糖酶活性为1．58U／mL．     

高产酸性蛋白酶黑曲霉菌种选育

从麸醋醋母中分离出黑曲霉Asp5609，用15W紫外灯照射8min，照射距离30cm，在暗处30℃培养3d后挑取透明圈大的茵落用亚硝基胍诱变处理，筛选出高产酸性蛋白酶变异株A5p5609-7．在培养基pH5．0，含水量50％，培养时间60h，变温培养等优化条件下获得固体发酵达35000U／g．干基的酸性蛋白酶物料．     

延胡索内生真菌的分离鉴定及产功能酶菌株的初步筛选

采用纯培养分离方式获得纯化延胡索内生真菌菌株,通过形态学特征、ITS r DNA序列分析对分离菌株进行鉴定,利用6种培养基筛选出代谢产功能酶菌株。分离获得312株内生真菌,可归类于9个属,其中镰刀菌属是优势类群。对已测序的30株内生真菌产酶活性研究表明20株试验菌株产纤溶酶,18株产复合酶,16株产碱性蛋白酶,10株产接触酶,1株产纤维素酶;其中4株内生真菌可代谢产生4种不同功能酶,为代谢产多酶系菌株。延胡索内生真菌的分离鉴定及产功能酶菌株的筛选不仅丰富了内生真菌资源,而且也为获得新颖结构化合物提供理论基础。     

一株耐高温α-淀粉酶生产茵的分离鉴定及其产酶条件优化

作者从四川成都及其周边地区的淀粉厂,米厂,面粉厂等样品采集地的土样和污水当中筛选到16株酶活较高的野生型-α淀粉酶生产茵,其中一株编号为C-1的茵株酶活最高,液体发酵酶活达到20 U/mL.这株茵能在高温(50℃)下生长良好.在电子显微镜观察,有明显芽孢,生理生化常规鉴定为枯草芽孢杆茵(B.subtilis),进一步的16S rDNA分子鉴定确定该茵属于枯草芽孢杆菌,命名为B.subtilis C-1.并对B.subtilis C-1的产酶条件进行优化.     

高产胞外蛋白酶毛霉的筛选及酶学性质研究

通过平板初筛和发酵复筛从保藏的16种毛霉菌株中筛选出了四株高产胞外蛋白酶毛霉菌株,分别为3.4906、3.4909、3.4943和3.5009。筛选过程中发现平板筛选法用于毛霉筛选不易观察,需改进方法,发酵法仍是最直接有效筛选的方法。对四株毛霉所产蛋白酶酶学特性研究发现,在温度耐受性方面,3.4943和3.4906的蛋白酶耐温性强;在反应温度方面,3.4906和3.5009的最适反应温度较低,3.4943和3.4909的最适反应温度较高;在反应p H方面,4种毛霉所产蛋白酶的最适p H在6.0~8.0范围;在受Na Cl浓度影响方面,3.4943的酶活力受Nacl浓度影响较大,3.4909的酶活力受Na Cl浓度影响最小。各菌株的酶学特性存在差异,根据发酵食品的工艺特性选择适宜的菌株。     

鸡大肠杆菌病和鸡霍乱的病原学检验

对发生于同一鸡场不同日龄鸡群的大肠杆菌病和鸡霍乱病例,进行了发病情况及病理变化方面的检验.同时取新鲜病死鸡的脏器组织为材料进行细菌分离,经对36株分离菌的形态特征、理化特性等的鉴定,结果表明：分别为大肠杆菌（E.coli）和多杀巴斯德氏菌败血亚种（P.multocida subsp.septica）,并通过人工感染试验证明分离菌为相应感染症的致病菌.     

豆制品废渣发酵液对青菜种子萌发及植株生长的影响研究

枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤与根际的产酶细菌,在生物肥料领域具有广阔的应用前景．以豆制品废渣为唯一有机氮源进行液体发酵,测定了3株具有高活力的产蛋白酶枯草芽孢杆菌（BY25,NTI,NT2）的发酵液中氨基酸组成与浓度、蛋白质浓度、蛋白酶活力的差异．通过种子发芽和青菜盆栽实验,研究了发酵液对青菜种子萌发及植株生长的影响．发现实验组中BY25豆制品废渣发酵液能够显著促进青菜种子发芽与幼苗根系生长,培养96h后种子发芽率较添加去离子水处理的空白对照提高了13％,青菜幼苗平均根系长度较空白对照增加了66．3％;而以大豆粉为唯一有机氮源的BY25大豆粉发酵液对照组对青菜发芽和长根则产生显著抑制作用,同时BY25发酵液热灭活对照也无法表现出任何促进生长作用,说明发酵液中的蛋白酶等活性成分可能是影响种子萌发和幼苗生长的主要因子．添加BY25豆制品废渣发酵液培养40d后,盆栽青菜叶片SOD酶活力及根系活力均显著提高．     

木糖产乙醇微生物的育种研究进展

甘蔗渣水解产物中含量第二高的是木糖，利用微生物高效转化木糖产乙醇是目前蔗渣纤维综合利用的关键途径之一，但野生型酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）不能利用木糖发酵产乙醇，这成为当前纤维素乙醇实现产业化生产的主要瓶颈之一。本文从微生物木糖代谢途径、利用木糖产乙醇的微生物、木糖产乙醇基因工程菌的构建、利用传统诱变方法改良木糖乙醇菌种等4个方面综述当前木糖产乙醇微生物的育种研究进展，指出木糖乙醇发酵最为理想的微生物菌种和最有应用前景的微生物分别是树干毕赤酵母（Pichia stipitis）和酿酒酵母基因工程菌，为改良木糖乙醇微生物提供理论依据。     

AFLP分子标记技术及其应用研究进展

AFLP是新近发展起来的一种DNA指纹技术，该方法重复性好、特异性高、能反映生物基因组的细微变化，在生物遗传多样性研究、品系分析、高密度遗传图谱的构建、微生物分型与鉴定、生态位变化、抗性育种、动物近交系选 育、疾病诊断等方面应用广泛。本简述了AFLP分子标记的基本大批量、方法与特点以及在动植物、微生物、生态群落等方面研究中的应用和发展前景。     

农业院校有机化学实验网络教学平台的构建

构建了有机化学实验网络教学平台,通过逼真的模拟实验、交互性的答疑系统和报告上传系统以及实时性的在线考试系统,借助计算机网络技术给学生提供了一种综合性、创造性、自主性的实验学习环境。     

林木遗传育种实验课教学改革的探索与实践

林木遗传育种是林学专业重要的专业基础课,如何改革使之适应经济社会对林学人才的理论与动手能力培养的需求,在对林木遗传育种实验教学存在问题分析的基础上,针对过去重理论、轻实践的实验教学方式,进行改革,初步形成了以学生为中心和分层次实验教学的模式,创新了实验教学新方法和现代教育技术在林木遗传育种实验中的运用。实践证明,对于培养林学学生的学习兴趣,提高学生分析问题、解决问题的能力起到了积极的作用。     

电路分析实验课程教学改革的研究

根据全国高校实验教学改革的方向,分析本校电路分析实验课课程设置的不合理性及存在的若干问题,提出了几大改革研究方法:将该课程独立设课;实验教材内容在原来的基础上加了综合性和设计性实验;对实验考核方式进行了改革;对实验教师工作量的计算方式进行了探讨。     

强化实践教学环节提高作物育种学课程教学质量

作物育种学是一门综合性、应用型和实践性很强的专业课程,针对其实践性和综合性强的特点,强化实践教学和学生综合技能的培养至关重要,这就要求在理论教学和实践有机结合的基础上,通过优化实践教学内容,解决传统的实验、实践教学模式存在许多问题和弊端,达到提高作物育种学教学质量和学生综合素质的目的。     

改革实验成绩评定方式,促进应用型人才培养

分析了传统实验课考核方式的不利之处。通过现代化信息技术在农业院校植物保护和植物检疫专业实验考核中的探索应用,结合专业特点,建立科学合理的实验成绩评定方式,更加直观、生动和全面地考核学生对病虫害实际发生发展规律和特点的认识,并促进学生自主学习的积极性,有利于学得扎实、用得自如的应用技术型人才培养。为大农学实验课程的考核方式提供参考。