制革用细菌蛋白酶生产菌222-UV90的选育及其应用研究

枯草杆菌222-UV 90是为生皮脱毛选育的一株中性蛋白酶产生菌。其亲株222是从变质的黄豆粉中分离得到。变异株222-UV 90是经NTG和UV诱变育种获得。发酵试验表明:500ml摇瓶装量50ml培养基,接种一小铲,32℃摇床培养40小时,产酶为8081μ/ml;BF-12-1型发酵罐32℃发酵36-38小时,产酶为8453u/ml。酶在PH6.0-8.0较稳定,35～40℃时活性稳定,40℃两小时仅失活16.7％。Ca~╫和Mg~╫对酶有激活作用,Fe~╫、Hg~╫和Cu~╫则有抑制作用。聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分析得到11条带。酶制剂使用安全无毒。制革脱毛软化应用试验结果表明:该酶用于猪皮正面革脱毛软化效果很好。每克皮用200 Folin单位的酶,38～40℃,pH7～8,1.5～2.0小时脱毛软化同时达到终点。成革质量达灰碱法水平,且可消除制革脱毛过程中硫化物对环境的污染。     

BT—37蛋白酶的初步研究

BT—37是从土壤中分离出的一株对多种鳞翅目昆虫有较高毒力的苏芸金芽孢杆菌。在PB培养基中振荡培养,蛋白酶活性随着细胞的生长而增强,培养36小时,芽孢晶体开始脱落时达到高峰。所产蛋白酶为中性蛋白酶。酶作用的最适条件:最适温度为50℃,60℃保温1.5小时酶活性降低70％;最适pH7.0;在pH6.0℃—10.6范围内稳定。1.5×10~3M时,Mn~+显著提高酶活。在蛋白酶活性高的培养基中获得了较高毒力的培养物。     

地衣芽孢杆菌HX-12-5的鉴定及中性蛋白酶性质的研究

对一株能产生具有良好脱毛效果的中性蛋白酶的高产菌芽孢杆菌Bacillus sp。HX－12－5进行了菌种鉴定，结果表明，该菌株属地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis)。中性蛋白酶的最适作用条件为：50℃，pH7.0,40℃时在pH6-9范围内稳定；EDTA和PMSF对酶活力有不同程度的抑制作用。     

中性蛋白酶抗噬菌体生产菌株KRP406的选育

从中性蛋白酶产生菌枯草芽孢杆菌ys94菌株出发,用混合噬菌体选育出KRP406抗噬菌体变异株.在摇瓶条件下,结果表明,KRP406抗株抗多种噬菌体和不同的混合噬菌体,噬菌体从异常发酵液等获得与制备.在同时间的工业生产中,KRP406抗株的平均酶活力655lu/ml,此酶活超过原生产菌株ys94产生的酶活587u/ml.     

产蛋白酶和淀粉酶菌株的筛选及其发酵产酶特性研究

利用酪蛋白固体平板分离培养基、淀粉平板分离固体培养基初筛,液体发酵产酶培养基摇瓶复筛相结合,从实验室保藏的真菌茵株中筛选出一株产蛋白酶的真茵菌株和一株产淀粉酶的真茵茵株,对其固态发酵特性进行了研究．结果表明：蛋白酶产酶高峰为24h,酶活力达到3760tJ／g;淀粉酶产酶高峰为32h,酶活力达到0．405u／g．     

产低温蛋白酶海洋菌筛选、鉴定及性质的初步研究

通过脱脂牛奶平板法从深海海泥中筛选到35株在低温条件(4℃)下具有蛋白酶活性的菌株,并对这35株菌进行了分子生物学鉴定和酶活测定,发现这35株菌分别属于动性球菌属(Planococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、Fictibacillus、发光杆菌属(Photobacterium)、冷蛇菌属(Psychroserpens)、微小杆菌属(Exiguobacterium)、交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas).选择各个属活性最高的菌株为研究对象,以酪蛋白为反应底物对其所产蛋白酶粗酶液酶学性质进行初步研究.结果表明,动性球菌属菌株PL4-1所产蛋白酶酶活最适反应温度为40℃,10℃时可保持50%以上的酶活,在60℃时酶活下降至40%以下,为典型的低温蛋白酶.     

枯草芽孢杆菌培养液水解鱼蛋白质制备蛋白胨的初步研究

对枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶的产生条件及其培养液水解鱼蛋白质制备蛋白胨进行了初步研究．结果表明，适宜枯草芽孢杆菌产蛋白酶的培养基初始pH值7．0、培养温度30℃、250mL三角瓶中的装液量为60mL，培养时间为24h；用枯草芽孢杆菌培养液为蛋白酶源水解蛋白质时，应控制反应体系的温度为55℃，pH9．0，加入低浓度的Mg^2＋、Ca^2＋并去除Cu^2＋、Fe^3＋、Pb^2＋和Ag^＋，对枯草芽孢杆菌产酶有促进作用．用枯草芽孢杆菌培养液分别水解鳕鱼粉和罗非鱼，蛋白质制备蛋白胨的得率分别为13．95％和14．96％，与目前的工业水平基本相当．     

一株耐高温α-淀粉酶生产茵的分离鉴定及其产酶条件优化

作者从四川成都及其周边地区的淀粉厂,米厂,面粉厂等样品采集地的土样和污水当中筛选到16株酶活较高的野生型-α淀粉酶生产茵,其中一株编号为C-1的茵株酶活最高,液体发酵酶活达到20 U/mL.这株茵能在高温(50℃)下生长良好.在电子显微镜观察,有明显芽孢,生理生化常规鉴定为枯草芽孢杆茵(B.subtilis),进一步的16S rDNA分子鉴定确定该茵属于枯草芽孢杆菌,命名为B.subtilis C-1.并对B.subtilis C-1的产酶条件进行优化.     

鸡肉蛋白水解液的研究

用酶水解鸡肉 ,通过单因素实验确定胰蛋白酶 1、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶 2、胃蛋白酶水解鸡肉的最适条件 ,并确定在它们的最适条件下 ,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶是单酶水解较好的酶。在双酶水解中 ,发现胰蛋白酶 1与酸性蛋白酶在各自最适条件下组合水解鸡肉水解率最高 ,进一步确定双酶水解的条件为胰蛋白酶先在 5 0℃ ,p H8.5 ,加酶量 40 0 0 U/ g蛋白质 ,固液比 1∶ 4,水解 3h,后酸性蛋白酶在 45℃ ,p H2 .5 ,加酶量 40 0 0 U/ g蛋白质水解 2 h。在这种组合下酶解 ,水解产物的水解度为 40 .5 % ,蛋白回收率为 81.0 %     

脂肪酶高产菌株的筛选及酶学特性研究

从富油土壤中分离筛选到40株脂肪酶产生茵,其中060805茵株产脂肪酶的能力较强,根据其形态特征、生理生化鉴定及16s rDNA鉴定,初步鉴定为短波单胞茵.060805茵株发酵产酶需油脂的诱导,同时也依赖Mg2 ,培养基中不添加Mg2 时产酶量很少,微量的Mg2 就能激活茵体产酶.蔗糖等糖类物质不利于060805菌株产脂肪酶.该酶的最适作用温度为35℃,最适pH为6.0;而且在60℃保温60 min酶活基本不损失,在pH 5.0～8.0范围内稳定.