大蒜超氧化物歧化酶活性测定及某些性质研究

采用肾上腺素自氧化法对蒜头ＳＯＤ进行活力测定及某些性质研究。结果表明：蒜头粗提取液富含ＳＯＤ，其比活力为４．６０２×１０４ｕ／ｇ蛋白质；它在３０～６５℃及ｐＨ５～ｐＨ９时活力较强；用ＰＡＧＥ分离出两条酶带；能被高浓度的ＫＣＮ、Ｈ２Ｏ２完全抑制，但对氯仿－乙醇液不敏感，说明此酶为Ｃｕ、Ｚｎ－ＳＯＤ。     

从微生物中提取超氧化物歧化酶的研究

超氧化物歧化酶，简称ＳＯＤ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ），是一种应用价值大、广泛存在于生物体细胞内的金属酶．本实验以酿酒酵母和嗜热脂肪芽孢杆菌为出发菌株，进行抗Ｈ_２Ｏ_２性能的筛选，选出耐受性好的菌株经２Ｌ发酵罐发酵后，提取到了热稳定性好的Ｃｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ和Ｆｅ－ＳＯＤ，酶活力为３２９２和３５４７ｕ／ｍＬ，其比活力为３４５７和３０８４ｕ／ｍｇ．     

大蒜超氧化物歧化酶活性测定及某些性质研究

采用肾上腺素自氧化法蒜头ＳＯＤ进行活力测定及某些性质研究。结果表明：蒜头粗提取液富含ＳＯＤ，其比活力为４．６０２×１０＾ｕ／ｇ蛋白质；能被高浓度的ＫＣＮ、Ｈ２Ｏ２完全抑制，但对氯仿－乙醇液不敏感，说明此酶为Ｃｕ、Ｚｎ－ＳＯＤ。     

大蒜鳞茎SOD的分离纯化

利用（ＮＨ４）２ＳＯ４分级沉淀，透析后经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析和ＤＥＡＥ－３２柱层析从大蒜鳞茎中分离并纯了ＳＯＤ，最大比活为９６ｕ／ｍｇ蛋白，最高纯化倍数为４８。     

饭豆铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

饭豆种子粗提液中有６条Ｃｕ·Ｚｎ—ＳＯＤ活性谱带，经氯仿－乙醇混合液处理，硫酸铵盐析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析被分离，获得了两组ＳＯＤ同工酶组分（ＳＯＤ—１，ＳＯＤ—２）．它们在酶分子结构上可能存在一定差异．ＳＯＤ－１含与粗提液相对的、电泳迁移率较小的活性谱带，它在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）图谱上的活性染色带和蛋白染色带相互对在；在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳图谱上均呈现单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．该酶分子量为３１３００，亚基分子量为１６５００，等电点为４．２，在紫外区的吸收值为２６４．０ｎｍ．该必在０—７５℃范围内稳定．纯化的ＳＯＤ—１比活性为１７８９Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ—２比活性为２８４Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ活力回收率为３２％．     

酵母超氧化物歧化酶的研究

从味精厂发酵废液培养的酵母中分离纯化超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）纯化倍数达１００倍，比活１１１５０ｕ／ｍｇ蛋白，电泳纯，回收率达８０％；每公斤湿酵母菌体产超氧化物歧化酶酶活力达５０万单位．此酶分子量为３７２００，等电点为５．６．     

化学沉积Ni-Cu-P合金及晶化处理对镀层结构和硬度的影响

从弱碱性化学镀溶液中化学沉积Ｎｉ－Ｃｕ－Ｐ合金,并用差热分析（ＤＳＣ）、Ｘ－射线衍射（ＸＲＤ）和透射电镜（ＴＥＭ）研究了晶化处理对镀层结构及硬度的影响。结果表明,镀液中ＣｕＳＯ４．５Ｈ２Ｏ浓度对合金组成有显著影响。在化学沉积过程中,Ｃｕ的优先析出使镀层中Ｃｕ／Ｎｉ摩尔比远远高于镀液中Ｃｕ＾２＋／Ｎ＾２＋摩尔比。镀液中ＳｕＳＯ４．５Ｈ２Ｏ浓度低时,沉积速度随其浓度增加而增大,但ＣｕＳＯ４．５Ｈ２Ｏ浓     

水稻幼苗超氧物歧化酶同工酶的研究

应用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳对水稻幼苗ＳＯＤ同工酶进行了研究。结果表明，４个品种的水稻幼苗的均含有６种ＳＯＤ同工酶，其中５种为Ｃｕ．Ｚｎ－ＳＯＤ，一种为Ｍｎ－ＳＯＤ，未发现Ｆｅ－ＳＯＤ．Ｃｕ．Ｚｎ－ＳＯＤ活性占ＳＯＤ总活性的９０％左右，Ｍｎ－ＳＯＤ占１０％左右，品种间同酶类型，酶活性无明显差异。     

超氧物歧化酶对糖尿病模型大鼠血液及肾中自由基代谢的影响

以链脲菌素诱发ＳＤ大鼠糖尿病模型，发现模型组大鼠血液及肾组织中的Ｔ—ＳＯＤ、Ｃｕ·Ｚｎ—ＳＯＤ水平较正常对照组大鼠下降，而ＬＰＯ、ＭＤＡ含量较正常对照组明显上升（Ｐ＜０．０１）．用不同剂量和不同疗程的纯化Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ肌注治疗，能不同程度升高糖尿病模型大鼠血液及肾组织中Ｔ－ＳＯＤ、Ｃｕ．Ｚｎ－ＳＯＤ含量，降低ＬＰＯ、ＭＤＡ水平，且与ＳＯＤ剂量及疗程的长短是正相关．     

超氧物岐化酶提纯研究

采用氯仿—乙醇提取液盐析、丙酮沉淀及ＤＥ（３２）纤维素柱层析方法，从牛红细胞中分离得到纯品铜锌超氧物歧化酶（Ｃｕ、Ｚｎ—ＳＯＤ）．纯化的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳为一条蛋白带，活性染色在蛋白带的位置上呈现表示酶活性的亮斑，比活力为每毫克２４８７３单位，原子吸收测Ｃｕ、Ｚｎ含量及紫外吸收光谱测定结果制备样与标准ＳＯＤ样相同．     

四种木本植物叶芽不同生长期SOD的检测研究

对枫藤等植物叶芽不同生长期的SOD使用连苯三酚自氧化法进行了检测,以确定SOD含量较高的植物材料及其所在生长阶段,并研究了Mg2+及Ca2+对雪松SOD活力的影响。实验表明,枫藤叶芽在开始取样后第9天SOD活力达到最大值,为159.24 u?g-1;辽东冷杉与雪松在第一次取样时SOD活力达到最大值,分别为83.57,190.71 u?g-1; Mg2+,Ca2+加入均在0.1mL(4mg/mL)时,对雪松SOD活力的增强作用达到最大,分别为148 %,138 %。     

两种中草药的SOD活性测定及其对细胞体外培养存活时间的影响

分别以改良的连苯二酚自氧化法和极谱氧电极法测量了两种药用植物（祁州漏芦和女贞子）提取液ＭＰＥ－１和ＭＰＥ－２含有的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性。检测结果表明，ＭＰＥ－１和ＭＰＥ－２的ＳＯＤ活性分别为１３１．３ｕ／ｍｌ和２９８．５ｕ／ｍｌ．以ＭＰＥ－１和ＭＰＥ－２为培养液添加物的人红细胞体外培养试验证实，这两种中药提取液均能稍微延长人红细胞体外培养的存活时间。     

水果超氧物歧化酶活性及性质

采用ＮＢＴ光化还原法对２２种水果进行ＳＯＤ活性测定，结果表明，新鲜水果富含ＳＯＤ，其中菠萝和山楂ＳＯＤ活性最高，克鲜重酶活性超过３００单位，其次是葡萄、枣、桑椹，克鲜重酶活性在２８８—２２４单位之间．酶的比活以山楂最高，毫克蛋白质达２２９．５单位．８种供试水果果皮中ＳＯＤ活性均明显高于果肉．这２２种水果中至少有９种不同的ＳＯＤ同工酶，其中４种同工酶在多数水果中出现．试验表明，水果ＳＯＤ活性在贮存期内均呈下降趋势．菠萝ＳＯＤ的热稳定性、酸碱稳定性高于西瓜ＳＯＤ．水果普遍具有Ｃｕ·Ｚｎ—ＳＯＤ和Ｍｎ—ＳＯＤ，本研究还发现菠萝、蕉柑和枣具有Ｆｅ—ＳＯＤ．     

分泌癌胚抗原肿瘤靶向性Cu,Zn-SOD的基因克隆及表达

将Cu,Zn-SOD与抗癌胚抗原（CEA）单链抗体基因（ScFvgene)融合,重组到含T7启动子的表达载体p ET-22b(＋）中,构建表达质粒pETSOD－ScFv,并转化大肠杆菌BL21（ED3）,进行了高效表达,表达物占菌体可溶性总蛋白的18％。SDS－PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物相对分子质量为41kD,与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在磊肠杆菌中为分泌型表达,有利于纯化。RIA测定表明产物能特异性地与抗原CEA结合,邻苯三酚法测定也表明产物具有SOD酶的活性,该融合蛋白为分泌CEA肿瘤的靶向性治疗及放疗、化疗后的恢复提供新的途径。     

超氧化物歧化酶新制备方法的研究

研究了制备超氧化物歧化酶的一种新方法．通过加热、盐析和中空纤维超滤,得到高纯度的产品．1000mL猪血,可得到94mgSOD,比活为6312μ／mg,产率为70．8%．     

葛仙米中SOD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用PCR技术从葛仙米（Nostoc sphaeroides）总DNA中克隆了一段基因序列,该序列与基因库中已公布的编码普通念珠藻（Nostoc commnue）超氧化物歧化酶的氨基酸序列同源性为98％,将该基因插入含T7启动子的质粒pET-32a（＋）中构建表达质粒pET-sod,然后将该表达质粒转入大肠杆菌BL21中进行蛋白表达,表达菌株用lmmol／L1PTG诱导表达数小时后,产生较多重组的蛋白,且该蛋白以可溶性蛋白形式存在,SDS-PAGE分析表明：在相对分子量约为22kd的位置有一条明显蛋白质带,将诱导表达后的蛋白通过亲和层析的方法进行蛋白纯化;NBT光还原法测定表达产物的比活力,每毫克纯化蛋白约为2550U。     

猪血过氧化氢酶的纯化及其性质研究

采用乙醇-氯仿去血红蛋白、硫酸铵分级沉淀、CM-32 DEAE-Sephadex A-50柱层析和超滤等步骤,从猪血红细胞中获得了高纯度的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CTS),纯化后的CTS比活达7580u/mg,分子量为229 646。紫外检测CTS在280,405,505,535,583和620nm均有光吸收,经测定CTS有18种氨基酸组成,最适pH为7.0,K_m为22mmol,K_(cat)为0.18/min,金属离子对酶活性的影响与金属的浓度及所带电荷有关。     

具有GPx和SOD双酶活性含硒76肽的制备及其穿膜效应

根据模块酶原理设计一种嵌有穿膜结构域序列并具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和超氧化物歧化酶(SOD)双酶活性的含硒76肽(Se-CuZn-76P),利用半胱氨酸缺陷表达法在单一蛋白生产(SPP)系统表达该肽,并鉴定其穿膜效应.实验结果表明:该方法可成功表达纯度较高的Se-CuZn-76P,并且每毫克蛋白表现出109μmol/min的GPx活力和1 218μmol/min的SOD活力;在Se-CuZn-76P存在的环境中培养肝L02细胞一段时间后,细胞内的GPx和SOD活力分别升高1.65和4.12倍,且Se-CuZn-76P可顺利进入L02细胞.