重组蛋白对工程菌的保护作用

为考察重组蛋白对强氧化剂环境中工程菌的保护作用，分别在含百草枯及维生素K3（VitK3）的强氧化剂和不舍强氧化剂的培养基中培养重组蛹虫草超氧化物歧化酶菌株和对照菌株并诱导表达．测定菌体密度（A600）及菌体内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的酶活变化。结果表明：重组菌株对百草枯和VitK3引起的生长抑制作用具有抗性．百草枯和VitK3对重组蛋白的表达没有影响．重组菌株的A600、SOD酶活力明显高于对照菌株．CAT酶活力略高于对照菌株。说明外源基因在E．coli中的高效表达提高了菌体抵抗自由基引起的损伤的能力。     

诱导条件对重组人锰超氧化物歧化酶发酵的影响

分别研究了3种诱导剂和Mn^2＋浓度对重组人锰超氧化物歧化酶（rhMn-SOD）发酵表达的影响,并进一步优化了乳糖诱导rhMn-SOD表达的条件。结果表明：异丙基--βD-硫代半乳糖苷（IPTG）和乳糖诱导能够获得类似的表达效果,诱导的同时加入2 mmol/L的Mn^2＋能够明显提高rhMn-SOD的表达。进一步的实验结果表明：乳糖诱导的最佳浓度为7 mmol/L,最佳时机为接种后6 h,A600为2.1,诱导表达6 h rhMn-SOD活性和比活达到最高。     

重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用

用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列，将其重组到原核表达质粒pT7-473中，并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35％，表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下，经Ni-NTA柱纯化，得到羧肽酶原B，在复性液中进行稀释复性后，胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B，然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28．5mg／L)，比活为13．5u／mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶 羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物，证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。     

嗜热芽孢杆菌β-半乳糖苷酶发酵条件研究

以嗜热芽孢杆菌为菌种,研究发酵生产β－半乳糖苷酶的条件。应用均匀设计法优化发酵培养基组成,结果为（ｇ／Ｌ）：乳糖０．５、蛋白胨２．０、牛肉浸膏２．０、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０１。在温度５５℃、初始ｐＨ７．０、摇床转速２００ｒ／ｍ ｉｎ 和１０％ 接种量条件下,发酵２４ｈ,β－半乳糖苷酶酶活力达１３．２Ｕ／ｍ Ｌ。在乳糖水解反应中,证实该酶能催化转半乳糖苷反应,合成半乳糖低聚糖。     

鸡卵黄抗体的制备及其不均一性

介绍了免疫期卵黄液中白蛋白（牛）抗体效价和亲合力的变化。研究了ＰＨ对稀释卵黄液去脂效果,以及硫酸铵浓度对ＩｇＹ浓缩、纯化效果的影响。探讨了抗白蛋白ＩｇＹ的异质性。实验表明稀释卵黄液酸化处理和ＩｇＹ盐析的最适合条件分别是ＰＨ５．１和２．２ｍｏｌ／Ｌ。经免疫亲和柱层析或金属螯合亲和柱层析后,白蛋白抗体样品均出现多个不同层析行为的抗体峰。实验提示免疫卵黄液中不仅可能存在不同亲合力、特异性的白蛋白抗体,还     

人Cu,Zn-SOD在酵母系统中的表达

甲醇酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）是一种理想的真核蛋白高水平表达系统。将人Ｃｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ基因克隆到酵母整合型质粒载体ｐＰＩＣ３．５Ｋ，经转化ｈｉｓ４缺陷型酵母ＧＳ１１５，用ＭＤ培养基及ＰＣＲ方法筛选阳性转化子，并用含Ｇ４１８的ＹＰＤ培养基筛选多拷贝转化子，经甲醇诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的人Ｃｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ，经计算机扫描分析，表达量占酵母可溶性     

冬虫夏草(Cordyceps sinensis)菌丝体固体发酵粉中麦角甾醇的定量分析

建立了冬虫夏草固体发酵粉中以麦角甾醇含量为生物量指标的分析方法:麦角甾醇含量的RP-HPLC检测方法.采用超声和回流等方法处理样品.结果:虫草粉的乙醇提取物中游离麦角甾醇的含量为53333±603μg/g,总麦角甾醇的含量138146±1896μg/g,HPLC分析采用麦角甾醇标准品外标定量法,线性范围:057～14317μg/mL,直线回归分析方程:Y=1879X-2E-13,R2=1.精密度相对偏差(RSD):0361%.样品中麦角甾醇的含量稳定,重现性好,可以作为冬虫夏草固体发酵的生物量的控制指标.     

猪血过氧化氢酶的纯化及其性质研究

采用乙醇-氯仿去血红蛋白、硫酸铵分级沉淀、CM-32 DEAE-Sephadex A-50柱层析和超滤等步骤,从猪血红细胞中获得了高纯度的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CTS),纯化后的CTS比活达7580u/mg,分子量为229 646。紫外检测CTS在280,405,505,535,583和620nm均有光吸收,经测定CTS有18种氨基酸组成,最适pH为7.0,K_m为22mmol,K_(cat)为0.18/min,金属离子对酶活性的影响与金属的浓度及所带电荷有关。     

钝顶螺旋藻Fe-SOD的纯化及性质

以螺旋藻中分离纯化的Fe-SOD平均比活为4576U/mg，总活力回收率50%，纯度达电泳纯，SDS-PAGE测定纯化的Fe-SOD亚基相对分子质量为21ku，每分子亚基含0.7个Fe原子；在Tris-盐到缓冲液中的最适pH为8.2，最适温度为25℃，在紫外区279nm有最大光吸收，酶的pH稳定范围为6～11，65℃以上迅速的失活，该酶对H2O2敏感，在5mmol/L H2O2中迅速失活，而在Ψ=0.1的乙腈和5mmol/L叠氮化钠中稳定。     

超滤法纯化超氧物岐化酶

研制了适合纯化猪血超氧物岐化酶(Cu.Zn-SOD)溶液的醋酸纤维素(CA)超滤膜,其截留分子量约为16 000。研究了溶液浓度、操作压力等因素对通量的影响。结果表明,自制CA膜超滤纯化SOD溶液性能优于一些市售膜。收率为86～89%,比活提高25%,纯化因子1.35。利用透析过滤法,基本上能除去溶液中游离铜离子。