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人Cu,Zn-SOD在酵母系统中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
甲醇酵母(Pichia pastoris)是一种理想的真核蛋白高水平表达系统。将人Cu,Zn-SOD基因克隆到酵母整合型质粒载体pPIC3.5K,经转化his4缺陷型酵母GS115,用MD培养基及PCR方法筛选阳性转化子,并用含G418的YPD培养基筛选多拷贝转化子,经甲醇诱导表达,SDS-PAGE和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的人Cu,Zn-SOD,经计算机扫描分析,表达量占酵母可溶性 相似文献
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大肠杆菌caiE基因的克隆与高效表达 总被引:1,自引:0,他引:1
用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱代谢相关酶基因cai E,将其克隆到克隆载体pBluescripy SK中,测序表明:该基因有612bp,与文献报道相比,有10个核苷酸不同,相应的翻译氨基酸有6个相异,将该基因重组到ColE1为复制子,T7为启动子控制下的分泌型表达载体pET-22b( )中,构建表达质粒pETCaiE,重组到载体pACYC184中构建以p15A为复制子,Lac为启动子的表达质粒pACYC-CaiE;重组到载体pWSK129中,构建以pSC101为复制子,T7为启动子的表达质粒pSC-CaiE。上述表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,均可表达,SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约26ku,表达量占菌体总蛋白质的比例分别为pETCaiE30%,pACYC-CaiE8%,pSC-CaiE5%。 相似文献
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将Cu,Zn-SOD与抗癌胚抗原(CEA)单链抗体基因(ScFvgene)融合,重组到含T7启动子的表达载体p ET-22b(+)中,构建表达质粒pETSOD-ScFv,并转化大肠杆菌BL21(ED3),进行了高效表达,表达物占菌体可溶性总蛋白的18%。SDS-PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物相对分子质量为41kD,与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在磊肠杆菌中为分泌型表达,有利于纯化。RIA测定表明产物能特异性地与抗原CEA结合,邻苯三酚法测定也表明产物具有SOD酶的活性,该融合蛋白为分泌CEA肿瘤的靶向性治疗及放疗、化疗后的恢复提供新的途径。 相似文献
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扩展青霉PF898的发酵液经硫酸铵沉淀、DE52纤维素离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤等步骤,其碱性脂肪酶的活性被纯化了79.3倍,回收率约15%,此活为76.9U/mg。纯化蛋白经SDS-PAGE和HPLC TSK-GEL G3000SW凝胶过滤分析显示其分子量约为28kDa。纯化蛋白经氨基酸序列测定仪分析表明,其N-端12个氨基酸的序列为:A-T-A-D-A-A-A-F-P-D-L-H。 相似文献
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以家蚕为生物反应器 (重组家蚕核型多角体病毒表达系统 )生产基因工程产品 ,具有成本低、安全、产品产量与活性高的优点。随着近年生命科学和生物技术的迅猛发展 ,需要发展新的实验动物品种、特别是利用低等动物代替哺乳动物 ,大力开发动物资源型功能 ,造福人类。本文报道我所利用家蚕表达外源基因与家蚕实验动物化饲育技术方面一些研究成果。由家蚕细胞、转移载体、修饰的BmNPV、家蚕幼虫或蛹组成家蚕表达系统。获得了含有日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因的重组病毒 (rsj14NPV)和含有日本血吸虫 2 8KDGST基因的重组病毒 (rsj2 8NPV)。r… 相似文献
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NDV核心抗原重组杆状病毒转移载体的构建 总被引:2,自引:1,他引:2
F和HN蛋白是新城疫病毒(NDV)中两种具有抗原性的表面糖蛋白.对NDV中国强毒株F48E8的F和HN基因进行了全长核苷酸序列分析.F基因的长度为1662bp,编码553个氨基酸,糖基化位点与已知的其他株系的位点相同;HN基因全长1904bp,编码571个氨基酸,其中第5个糖基化位点(第500~502个氨基酸)由NPT突变成NPV.为了便于在杆状病毒中表达,将F和HN基因的核心抗原区通过PCR扩增,并成功地克隆进杆状病毒转移栽体中,为利用杆状病毒表达系统生产抗新城疫病毒的基因工程疫苗打下基础. 相似文献
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将编码人胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)成熟肽的cDNA插入含T7启动子的质粒pET-28a( )中构建表达质粒pET-EC-SOD,表达菌株用1mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达3h-5h后,产生较多的重组人EC-SOD,并形成包含体。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白质的26%以上。经纯化和复性后的EC-SOD比活为每毫克纯化酶蛋白1200U。将EC-SOD转染粉纹夜蛾Tn-5Bl-4细胞,经扩增后在细胞内进行表达。SOS-PAGE分析结果表明,粉纹夜蛾细胞中表达一相对分子质量约为28ku的特异蛋白质带,Western blot分析表明,该特异条带即为EC-SOD蛋白,连苯三酚自氧化法测得表达产物比活为每毫克细胞裂解物260U。 相似文献
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