RDP-p53融合蛋白对小鼠炎症细胞因子的影响

研究不同剂量RDP-p53融合蛋白对小鼠炎症细胞因子的影响。通过大肠杆菌Rosetta表达蛋白并纯化,SDS-PAGE确定RDP-p53融合蛋白准确性。同时,将昆明小鼠分为空白对照组和RDP-p53融合蛋白高、中、低剂量组,经腹腔注射给药,摘眼球取血,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。RDP-p53融合蛋白在上清和沉淀中均获得表达。ELISA测定结果表明,与对照组比较,低、中剂量组小鼠血清炎症因子水平没有明显变化(P0.05),高剂量组的IL-1β和TNF-α含量显著升高(P0.05)。成功制备RDP-P53融合蛋白,并为进一步研究RDP-p53融合蛋白抗神经胶质瘤药理作用时给药剂量的确定提供了实验依据。     

人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定

目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定.方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条件,利用免疫印迹鉴定重组蛋白.结果:重组载体经DNA测序显示包含正确的rhIL-7编码序列,重组载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导后外源蛋白表达,相对分子质量为17 400,与IL-7理论分子质量一致;免疫印迹显示,外源蛋白可以被人IL-7特异性抗体识别,表明在原核表达的外源蛋白是rhIL-7.rhIL-7主要表达于包涵体中,包涵体表达优化条件为:温度为37 ℃、IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为4 h.结论:成功的构建了rhIL-7的原核表达载体.     

人白细胞介素-15表达菌株的构建

从健康人外周血分离单核细胞,并提取总RNA,利用RT-PCR扩增出白细胞介素15(IL-15)基因.构建了重组表达菌株BL21(DE3)(pET28c(+)-IL-15).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒(pET28c(+)-IL-15)含有IL-15基因.经Western blot鉴定证实为IL-15,并实现了在大肠杆菌中的高效表达.表达产物占菌体总蛋白的32%,从而为进一步研究IL-15的生物学功能和临床应用奠定了基础.     

羊痘病毒基因组中编码白细胞介素-18结合蛋白

从羊痘病毒基因组中寻找并扩增羊白细胞介素-18结合蛋白(IL-18BP)基因。将该基因克隆到表达载体PGEX-5X-3,在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。目的蛋白以包涵体形式存在。表达产物经过变性、复性和层析纯化后,具有体外拮抗羊IL-18刺激外周血单核细胞产生IFN-γ的活性。     

重组人截短型IL-6在大肠杆菌DH5α中的高效表达与纯化

为研究重组人截短型白细胞介素6(rhIL-6)工程菌高效表达的影响因素及纯化方法的优化.观察不同培养温度对重组人截短型IL-6工程菌生长密度和IL-6表达的影响;复性蛋白终浓度对复性效率的影响;细菌诱导培养后,经破菌-洗包-溶包初步纯化后,再经柱层析纯化IL-6.其结果为30℃培养后42℃诱导培养5h的IL-6表达效率最高,达32.8%;复性蛋白终浓度在0.5 g/L以下时,蛋白复性效率最佳,比活性为4.42×108 μmol/min*mg-1;进一步柱层析后,IL-6的纯度达96.5%,得率可达46.5%.最后得出培养和纯化工艺简便易行,可获得高纯度、高比活性的截短型rhIL-6的结论.     

中国白兔IL-6基因的分子克隆及其表达研究

运用RT-PCR技术对用ConA刺激的中国白兔外周血淋巴细胞(PMBCr)进行了扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定.结果中国白兔IL-6基因全长726 bp,编码242个氨基酸,其中前26个氨基酸残基构成信号肽序列.与不同物种IL-6基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异.在推导的中国白兔IL-6氨基酸序列中,在108-110位存在1个潜在的N-联糖基化位点,同时存在9个Cys残基.将pTIL-6双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中构建了重组质粒pETIL-6,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行了诱导.结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为29.5kDa的重组目的蛋白.经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的16.2%.     

原核表达HIV-1抗原蛋白的ELISA活性检测

研究了HIV-1 gp120s和gp41在大肠杆菌中表达产物的抗原特异性.首先构建表达质粒p120s和pT41,并转化到BL21和M15中.宿主细胞经IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot表征分析蛋白产物.总蛋白中gp120s占17.9%,为可溶性表达;gp41占24.6%,为包涵体形式.亲和层析法检测蛋白纯度分别为63.1%和89%.酶联免疫吸附(ELISA)实验说明重组蛋白有良好的抗原特异性.     

构建的FIt3L胞外域原核表达载体在大肠杆菌中的表达

目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,FIt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法:依据FIt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆FIt3L基因并构建其胞外域原核表达载体,测序鉴定后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,用免疫印迹鉴定.结果:克隆到FIt3L编码区全长序列,经DNA测序证明与已报道的序列相同;构建羧基端带有His6标签的FIt3L胞外域蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21(ED3)中获得较高表达;免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的FIt3L胞外域蛋白的相对分子质量(Mr)为19 000,与理论值相符,此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应.结论:成功克隆FIt3L基因,构建其胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达.     

重组鲑鱼降钙素融合蛋白工程菌发酵工艺研究

为研究大肠杆菌表达重组鲑鱼降钙素融合蛋白(GST-sCT-Gly)工程菌的发酵工艺,采用瑞士比欧生物工程公司40 L发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目的蛋白的表达条件进行优化;在优化条件下,以40 L发酵罐发酵工程菌,菌体收获量可达到57 g/L,目的蛋白表达量占总蛋白的23.5%;结果表明,研究确定的发酵工艺可以提高工程菌收获量及目的蛋白的表达量,且稳定可靠,可应用于生产。     

斜带石斑鱼神经坏死病毒主衣壳蛋白的原核表达与纯化

将含有斜带石斑鱼Epinephelus coioides神经坏死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)主衣壳蛋白(major capsid protein, MCP)基因的重组表达质粒载体pET32a-MCP转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合表达,经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,证实了重组大肠杆菌融合表达了斜带石斑鱼神经坏死病毒主衣壳蛋白.表达的融合蛋白主要以不可溶的包涵体形式存在,提取的包涵体中融合蛋白含量占60%以上,经柱层析纯化蛋白,纯化度达90%以上.     

香菇深层发酵液和香菇子实体营养成分比较

对香菇发酵液和香菇子实体营养成分蛋白质、多糖、氨基酸及矿物质的含量进行了测定和比较，结果表明，香菇发酵液含有与香菇子实体相同的营养成分，而且含量均高于香菇子实体，尤其是钙、镁、多糖、异亮氨酸、亮氨酸的含量很高。     

V-Mg-O催化剂用于丁烷氧化脱氢制丁二稀和丁烯

制备了用于丁烷氧化脱氢制丁二稀的V Mg O催化剂 .m(V2 O5) / m(MgO)、催化剂焙烧温度对转化率和选择性有较大的影响 ,2 4 V Mg O催化剂具有较高的活性和C4 (C4 H8和C4 H6)选择性 ,当反应温度为 873K、原料气组成为n (C4 H10 ) /n (O2 ) /n (N2 ) =4/ 8/ 88时 ,收率达到 32 % .降低原料气中氧气分压 ,可以提高C4 选择性 ,但转化率降低 ;升高反应温度 ,可以提高转化率和收率     

人肽基脯氨酰顺反异构酶基因的克隆、表达、纯化及热变性交联

蛋白质分子间交联是普遍存在的现象．然而，蛋白质交联的分子机理还不太清楚．为了进一步探测蛋白质交联的分子机理，以及交联能否在异源肽链间发生，本实验室克隆了人肽基脯氨酰顺反异构酶(human Peptidylproly-Cis-trans-isomerase，hPPI)cyclophilin cDNA基因，并纯化出了PPI蛋白．最后，将PPI和．lysozyme蛋白进行热变性交联实验，结果显示在同源和异源肽链间都有二聚体和多聚体形成．并证实蛋白质交联可经三步完成：1)蛋白质构象包括二级结构改变；2)形成分子间二硫键；3)形成分子间异肽键．     

含有重组人白细胞介素18基因的工程菌的产物表达和鉴定

0引言 1996年,Ushio等[1]从人的肝脏细胞中克隆了人的白细胞介素18(IL-18) cDNA,并在大肠杆菌中得到了表达.IL-18是国际上最新获得的细胞因子[2].     

关于去去相连的双音词的测试评分标准

在普通话水平测试中去声加去声的双音节词语评分标准存在一些问题 ,主要是对重中格式的词语把握不定。将《大纲》普通话常用词语表 (表一 )中去去相连的重中格式的词语辑录出来 ,可以引起人们的注意     

等效三体势对偶偶Ba与Xe同位素核的负宇称带的能谱研究

在s-d IBM1的O(6)极限下,引入d玻色子之间相互作用的等效三体势,考虑f玻色子产生的八极态,导出了负宇称态能谱解析表达式,并对过渡区^{118, 120}Xe和^{124, 126, 128, 130}Ba 6个偶偶核的负宇称带进行了能谱计算,得到了与实验能谱符合很好的结果,然后用Staggering指数定量分析了负宇称态能谱中的Staggering现象。     

Smad3基因剔除小鼠6月龄的生物学特性研究

选用 6月龄Smad3基因剔除小鼠 ,称重、采血、解剖 ,检测其生理生化、体重、脏器重量及剖检的特性 ,其结果 :纯合型的MCH、CK、Tibil、GOT和LDH L ,及其肾上腺脏器指数差异显著 ;+ -的肾脏重量差异显著。不同基因型之间比较 :WBC、HCT、MCHC、GLU、CHO、ALP、BUN、LDH L和CA ,及其体重、心脏、肝脏、肾脏、胸腺的脏器指数差异显著 ,并且纯合型的WBC、HCT、CK、CRE、GPT、GOT、ALP、BUN、LDH L较野生型和杂合型小鼠高 ,MCHC、GLU、CHO、MG、CA较野生型和杂合型小鼠低 ;杂合型的GOT、野生型的CK、ALP差异显著。 6月龄Smad3基因剔除小鼠的生理生化指标及脏器重量和指数具有一定的特性     

大麦黄花叶病毒抗性突破株系的分子变异

通过大麦黄花叶病毒 (Ba YMV)抗性突破株系的核酸 RNA1全序列分析并与野生株系比较表明 ,抗性突破株系在病毒复制酶或转运蛋白区域 (6K2 )和核酸 RNA复制酶区域 (NIb)存在二个变异位点 .在这二个位点上抗性突破株系核酸分子编码的氨基酸分别为脯氨酸 (Pro)和苏氨酸 (Thr) ,而野生株系分别为缬氨酸(Val)和丙氨酸 (Ala) .对该两种酶蛋白质二级结构分析显示 ,氨基酸的变异可能导致了蛋白质的结构、功能与性质的改变 ,并且此种变异与抗 Ba YMV冬大麦中抗性基因 ym4的功能丧失有关 ,同时也说明了大麦品种田间致病性的差异与病毒核酸分子中的点突变关系密切 .     

褐煤氧化制备水溶酸

实验研究发现,黄县褐煤的碱空气深度氧化法制备水溶酸的最佳氧化条件：温度为２２０℃,压力为２．８ＭＰａ,碱煤质量比为１．６∶１,反应时间为６ｈ。在此条件下,有机碳的有效转化率为６７．５％,其中水溶酸中的碳占７２．３％。采用蒸汽压渗透法测定水不溶酸和水溶酸的相对分子质量,并采用色质谱对用石灰乳处理后的氧化液的组成进行了定性分析。由分析结果知,水溶酸主要由苯多羧酸组成,酯化后可作为聚氯乙烯增塑剂和润滑剂添加剂     

试论柳永慢词的创作思想

柳永是慢词的开拓者 ,在慢词的创作上表现出独立特行的创作思想。柳永具有积极的创新精神 ,大量运用时调俗曲 ,创作浅近卑俗的歌词 ;在慢词创作的目的和功用上 ,则鲜明地表现出“应歌”的思想。正是在这两个方面 ,柳永慢词创作表现出与晏欧等人不同的创作思想和艺术风貌 ,从而在宋代慢词创作中有先导之功。