噬夏孢欧文氏菌类crtB基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

噬夏孢欧文氏菌类胡萝卜素合成相关基因crtB,编码八氢番茄红素合成酶。利用PCR技术扩增出crtB基因,克隆进表达载体,构建表达质粒pET-15bcrtB。重组质粒转化大肠杆菌,构建工程菌株。经IPTG诱导,工程菌高效表达了重组八氢番茄红素合成酶,表达量占菌体总蛋白的40%。重组蛋白以包含体形式存在,包含体经洗涤、尿素溶解、复性并经镍离子树脂亲和层析、Superdex 75凝胶层析柱纯化,得到了电泳纯的重组八氢番茄红素合成酶,带有His-tag的该蛋白分子量为35 kDa,pI值为7.3。     

旅游管理专业实践教学质量评价探讨

旅游管理专业实践教学在整个教学过程中占有重要的地位,因此对旅游管理专业实践教学进行评价具有重要的现实意义。在旅游管理专业实践教学现状分析的基础上,从教师的教学、学生的学习、组织管理者的三个方面构建了旅游管理专业实践教学评价指标体系,提出了综合评价方法、动态监测实践教学情况,有助于规范和引导实践教学的发展。     

重组人白细胞介素6工程菌的表达和功能初探

自人外周血的ｍＲＮＡ中获得了白细胞介素６ｃＤＮＡ,基国被克隆并在大肠杆菌中表达,在２０Ｌ发酵罐中每Ｌ发酵液可得６０ｇ湿菌体,ＩＬ－６的表达量约占大肠杆菌全蛋白的３０％以上,占包含体蛋白的６０％。纯化产物在长期,急性毒性和三致实验正常的基础上,用恒河猴的功能实验表明,在不制造血象降低模型的情况下,仍能明显增加血液中血小板和白细胞的数量。     

黑松过氧化物酶cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用RT-PCR的方法,从黑松愈伤组织中获得过氧化物酶cDNA,其开放阅读框全长981bp,编码326个氨基酸残基。将该开放读框克隆到表达载体pET-15,构建重组表达质粒pET-15b-POD,转化E.coli BL21(DE3)构建工程菌,IPTG诱导工程菌高效表达过氧化物酶,通过Ni 2+螯合亲和层析得到了电泳纯的重组过氧化物酶。生物信息学分析表明,该蛋白具有植物过氧化物酶的典型结构,以及具有过氧化物酶家族保守的活性位点。活性分析表明该蛋白的确是黑松过氧化物酶,这一结果为松萎蔫病抗性机理的研究奠定了基础。     

浅析我国畜牧业信息建设与应用

改革开放以来,我国的畜牧业获得了很大程度的发展,对于国民经济做出了巨大的贡献。随着信息时代的到来,如何将实现畜牧业的信息化,使其能够更好的适应当前市场经济的发展以及信息化时代的要求。文章分析了我国畜牧业信息化建设过程中存在的问题,并提出了畜牧业信息建设的方法,并对其应用进行了探讨。     

松材线虫携带的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens GcM5-1A菌株分泌的毒素及其对黑松的毒性

从松材线虫携带的致病细菌荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens GcM5-1A菌株的培养液中分离、纯化得到一种50 ku的蛋白质，其N-末端氨基酸顺序为ALSVNTNITS，证明其为荧光假单胞标准菌株P.fluorescens Pf-5的鞭毛蛋白相似，同时该蛋白能与Pf-5菌株鞭毛蛋白抗体反应，证明其为相同的鞭毛蛋白。两个环二肽同时从GcM5-1菌株培养液中被分离和鉴定，它们是cyclo(-Pro-Val-)和cyclo(-Pro-Tyr-)。生测表明此次分离鉴定的鞭毛蛋白和两个环二肽对黑松愈伤组织及幼苗均具毒性。采用细胞免疫荧光分析、细胞染色观察、电导率测定、基因组DNA电泳分析技术对上述鉴定的鞭毛蛋白与黑松愈伤组织的作用及致死方式进行了研究，结果表明：鞭毛蛋白与黑松细胞之间存在直接的互作；鞭毛蛋白处理的细胞其细胞膜皱缩变形、细胞质浓缩、细胞核变形，形成若干小核，细胞质中的RNA降解；处理细胞着色力增强，细胞培养液的电导率增加，说明鞭毛蛋白科增加细胞膜的透性；基因组DNA电泳分析证实处理细胞的DNA发生断裂，但无明显的梯子形成，推测鞭毛蛋白对黑松细胞的致死方式为非典型的细胞凋亡。     

脱乙酰几丁质对烟草叶片一些生理生化特性的影响

以温室栽培生长７￣８周的烟草第４片真叶为材料，测定了脱乙酰几丁质对细胞膜透性的影响。结果发现，脱乙酰几丁质处理的烟草叶片的电解质、可溶性蛋白质的外渗量和胞外可溶性过氧化物酶的活性均比对照组大，并且随所用的脱乙酰几丁质浓度增加而增大。Ｍｇ＾２＋、Ｃａ＾２＋、Ａｌ＾３＋能抑制脱乙酰几丁质诱导的蛋白质外渗。脱乙酰几丁质（５００μｇｍｌ＾－１）处理的烟草叶片的几丁酶和β－１，３－葡聚糖酶的活力，在处理６ｈ     

兔生长激素cDNA克隆和表达

从兔脑下垂体中的ｍ ＲＮＡ中,利用合成引物逆转录ＰＣＲ,获得了前体和成熟生长激素的ｃＤＮＡ,成熟生长激素的ｃＤＮＡ克隆在ｐＥＴ３ａ 表达载体并转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３ ｐｌｙｓ） 中,获得了高效表达,表达量达到大肠杆菌总蛋白的４０ ％ 。     

荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens GcM5 1A菌株的 胞外木素过氧化物酶的部分纯化和鉴定

荧光假单胞菌GcM5 1A是松材线虫携带的一种致病菌。在GcM5 1A的培养液中发现有木质素过氧化物酶的活性，同时显示很强的毒性。通过对其胞外木质素过氧化物酶的酶学性质的初步研究发现：其最适温度为35 ℃，最适pH为4.0。在15~35 ℃、pH为6.0~9.0范围内，酶活保持相对稳定。NH2OH·HCl和KCN对酶活的抑制作用分别达到88 %和57 %，而NaN3对酶活的抑制作用只有15 %左右。Ca2+、Mn2+ 和Fe3+对其活性有增强作用，但是Hg2+ 和 Zn2+却有中等的抑制作用。KCN 和NH2OH·HCl抑制其酶活性分别达57 %、88 %，而NaN3的抑制率仅为15 %。吸收光谱显示该酶在406 nm处有一个Soret峰，加入1 mmol/L Na2S2O4后，吸光度出现了明显的下降，但Soret峰没有显著移动。     

畜牧业发展中存在的问题与解决策略

畜牧业在我国的国民经济中扮演着十分重要的角色,改革开放之后,我国的畜牧业获得了空前的发展,当前我国的畜牧业在发展过程当中还存在一些的问题,严重的制约了我国畜牧业的进一步的发展。文章对这些问题进行了分析,在此基础上有针对性的提出相应的建议。