牛奶黄嘌呤氧化酶的纯化及性质研究

本文建立从牛奶中分离纯化黄嘌呤氧化酶的工艺,该工艺采用正丁醇-硫酸铵分级提取、磷酸钙凝胶吸附、SephadexG-150层析纯化获得纯品．从磷酸钙凝胶上解吸到的XOD粗酶比活性达5．096I．U／mg－pr,提纯340倍,产率达74．3％．每单位粗酶的吸附剂用量以6mg为最佳．纯酶的最大紫外吸收在285nm处,酶活性测定的最适pH在8．60～10．15之间,最适温度在25℃～35℃间．1mol／LKCN、1．5％H2O2及甲醇对酶活力都有明显的抑制作用．经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两条蛋白带．经黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶-Luminol（XOD－X－Luminol）发光体系检测结果表明20μl牛奶XOD（相当0．181．UXOD）的发光强度最大,其发光值受抑制50％的超氧化物歧化酶（SOD浓度（IC50）为1．14μg／ml（相当0．514USOD）．     

福寿螺β-葡萄糖苷酶的分离纯化及性质的初步研究

以福寿螺内脏为材料,经本实验室开发的工业生产法制备粗酶粉,进一步采用葡聚糖凝胶（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００）和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析纯化,获得经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一纯的β－葡萄糖苷酶制剂．测定该酶的最适反应温度为４３℃,最适反应ｐＨ为５．１;在ｐＨ５．１,４５℃下,该酶催化水杨素水解的Ｋｍ值为３．４０ｍｍｏｌ／Ｌ,活化能为５０．６３ｋＪ／ｍｏｌ．研究几种效应物对酶活力的影响,结果表明：Ｍｎ２＋、Ｃｏ２＋对酶有激活作用,而Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、ＳＤＳ及脲对酶有不同程度的抑制作用,其中Ｃｕ２＋和Ｈｇ２＋对该酶的抑制作用最强,其抑制机理均表现为非竞争性抑制     

猪肾溶菌酶的纯化和部分性质研究

猪肾溶菌酶提取液经过正丁醇脱脂,（NH4）2SO4沉淀,得到粗酶液,再经过CM—Sepharose FF阳离子层析柱和Sephacryl S-100凝胶过滤层析纯化得到电泳纯的溶菌酶．该酶的比活力为162．45,提纯倍数为113．6,回收率为16．89％．该酶对溶壁微球菌作用的最适温度为45℃,最适作用的pH为6．0,在50℃以下和pH4．5～9．0之间都有较好的稳定性．酶分子量约为15．0kd,其米氏常数为0．0135g／mL．     

马铃薯酪氨酸酶的部分纯化及理化性质的研究

马铃薯酪氨酸经粗提、丙酮沉淀和酸铵分级后，得到了纯化１．８倍，活力回收４２．５％，比活力为４９．７Ｕ／ｍｇ蛋白的部分纯化酶，并对其理化性质进行了研究。结果表明，以多巴为底物，酶的Ｋｍ为５．７ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍ为１６．２μｍｏｌ／Ｌ?ｍｉｎ，最适ＰＨ为８．２，最适温度为４０℃，ＨＳＯ＾－３Ｆ＾－、苯甲酸、叠氮化钠、过氧化氢为其抑制剂，Ｖｃ、苯肼等对该酶的半抑制浓度为μｍｏｌ／Ｌ水平。Ｃｕ＾２＋在低浓     

家蚕碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质

经10％～50％硫酸铵分级沉淀分离，DEAE—Sepharose离子交换柱层析,Sephacryl S-200凝胶过滤纯化,从家蚕（Bombyx mori）肠液中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶、该酶提纯倍数为464倍，比活力为3936U／mg、酶学性质和动力学性质研究表明，该酶催化磷酸苯二钠的水解反应，最适pH值为10.5，pH小于7.5和大于11均不稳定；最适温度为40℃，温度高于50℃不稳定；米氏常数Km值为1．25mmo1／L.     

大豆β—淀粉酶的纯化和性质研究

主要介绍大豆β－淀粉酶的分离纯化。首先通过酸抽得到粗提物，再经过乙醇沉淀，百里香草酚吸附和超滤技术进行纯化。纯化的酶用聚丙烯酰凝胶电泳检测为三条带。回收率为３５．８％；酶的比活为３４１ｕ／ｍｇ蛋白，分子量为５．３万，等电点为５．２；最适ｐＨ５－６，最适温度４０－５０℃。     

大豆β－淀粉酶的纯化和性质研究

主要介绍大豆β－淀粉酶的分离纯化。首先通过酸抽提得到粗提物，再经过乙醇沉淀，百里香草酚吸附和超滤技术进行纯化，纯化的酶用聚丙烯酰凝胶电泳检测为三条带。回收率为３５．８％；酶的比活为３４１ｕ／ｍｇ蛋白。分子量为５．３万，等电点为５．２；最适ｐＨ５－６，最适温度４０—５０℃．     

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶经氯仿－乙醇混合液处理，丙酮沉淀，凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等步骤提取和纯化．纯化酶在聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＰＡＧＥ）图谱上的两条蛋白染色带和活性染色带相互对应，在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈现单一区单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．此酶分子量为３４０００，亚基分予量为１７０００，在紫外区最大吸收值为２５８ｎｍ．该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２均敏感，在０～７５℃温度范围内对热稳定．纯化酶的比活性为７４６３Ｕ／ｍｇ，纯化１００９倍，酶的回收率为７９％．     

核酸酶P1的纯化和酶学性质研究

桔青霉发酵液通过硫酸铵分级沉淀、凝胶层析和离子交换纤维素层析等生化分离步骤，得到的核酸酶P1比活力为711U/mg，纯化倍数1500。纯化的酶蛋白纯品经SDS－聚丙烯酰胺电泳，呈现一条单带。该酶催化反应的最适pH范围为6－8，最适温度在70℃，在60℃以下时酶活较为稳定，锌离子对此酶有明显的激活作用，而铜离子具有明显的抑制作用。     

黑曲霉胞外葡萄糖淀粉酶的纯化及特性

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ７２８）的粗酶液，经硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤脱盐，ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换柱层析和ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－１００凝胶层析纯化，经ＰＡＧＥ鉴定为一条带ＳＤＳ凝胶电泳测定分子量为７００００．金属离子Ｆｅ３＋对该酶有一定的抑制作用，该酶的等电点为３．７，最适ｐＨ为４，最适温度为６０℃．Ｅ２８０１％为１５．７２，Ｋｍ值为０．１１２×１０－３ｍ．     

荧光假单胞菌产木聚糖酶的纯化和性质

有硫酸铵分级沉淀,葡聚糖凝胶分离技术,对荧光假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕ．）所产的半纤维素酶进行分离纯化,得到单一组分的木聚糖酶。通过凝胶电泳法,测得其摩尔式量为３３０００。研究表明,该酶的最适ｐＨ值为６．０,最适温度６０℃。酶的动力学研究测出米氏常数Ｋｍ值为４．７６ｍｇ／ｍｌ。     

酵母超氧化物歧化酶的研究

从味精厂发酵废液培养的酵母中分离纯化超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）纯化倍数达１００倍，比活１１１５０ｕ／ｍｇ蛋白，电泳纯，回收率达８０％；每公斤湿酵母菌体产超氧化物歧化酶酶活力达５０万单位．此酶分子量为３７２００，等电点为５．６．     

背角无齿蚌酸性磷酸酶的分离、纯化及部分性质研究

从背角无齿蚌外套膜中,经盐析,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０离子交换柱层析及Ｓｅｐｈａｄｅｘ,Ｇ－１５０凝胶过滤等步骤,分离提纯到一种酸性磷酸酶,提纯倍数８８．２５酶液比活力为２４．７Ｕ／ｍｇ,通过动力学方法测得其最适ｐＨ值为４．８,最适温度为５０℃,同样以对硝基苯磷酸二钠作底物测得其Ｋｍ值为０．７３ｍｍｏｌ／Ｌ ,Ｚｎ＾２＋对酶有激活作用,而Ｆ＾－,Ｐｂ＾２＋和Ｂａ＾２＋则对酶有一定的抑制     

地衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheni formis）AS10106α－乙酰乳酸脱酸酶经硫酸沉淀，聚乙二醇沉淀，DEAE－Sepharose Fast Flow离子交换，Gigapite K-100S柱层及SephadexG－100分子凝胶过滤柱等分离纯化步骤，得到SDS－PAGE电泳纯，α－乙酰乳酸脱羧酶的比活提高了53．5倍。对该酶性质的研究表明，酶单亚基分子量为32Kda，等电点为4．5；该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH为6．0，对热（40℃以上）敏感。在pH5．0－6．5之间稳定。酶活不需要金属阳离子，Cu^2 、Co^2 强烈抑制酶的活性。摇瓶实验表明，纯化的地衣芽孢杆菌α－乙酰乳酸脱羧酶能明显降低双乙酰的形成并缩短其还原时间。     

染料脱色酶特性研究

从脱色优势菌ＮＤ１ 提取脱色酶,对酶特性进行研究．结果表明酶的最适作用条件为ｐＨ ７,３７℃,无氧环境,反应需ＮＡＤＨ 的参与;纯化结果表明经ＤＥＡＥ柱层析及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００ 凝胶层析后脱色速率分别提高１０ 倍和５０倍,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００ 凝胶层析中２～４ 管蛋白具有偶氮和蒽醌染料脱色酶活性,６～１２ 管具有蒽醌染料脱色酶活性．     

聚苯乙烯载体亲和层析纯化尿激酶

聚苯乙烯经磺化后连接手臂６－氨基己酸，然后偶联配基对氨基苯甲脒，制成亲水性的亲和载体。载体的最适配基密度为每克湿载体３２μｍｏｌ，最适吸附条件为ｐＨ７．５、０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）。在ｐＨ４．０、０．１ｍｏｌ／Ｌ醋酸缓冲溶液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）中，采用０～１ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＳＣＮ梯度洗脱，可将比活８．３３μｍｏｌ·Ｓ－１·ｍｇ－１的粗酶纯化５０倍，收率大于５３％。     

大熊猫肌肉肌酸激酶的纯化与性质

用改进的Ｋｕｂｙ等人方法从大熊猫骨骼肌中纯化了肌酸激酶，并对此酶的某些性质进行了研究。纯化倍数为 ３５．７；收率１７．３％；比活力为 ５５．３Ｕ／ｍｇ；等电点为 ６．６０。聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为一条带。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为４２ ０００，总分子量为 ８４ ０００，该酶是由两个相同亚基组成的二聚体。酶对肌酸的Ｋｍ 为 ５．２６ｍｍｏｌ／Ｌ；对ＡＴＰ的 Ｋｍ为 ０．７４ｍｍｏｌ／Ｌ，酶的最适温度是 ３０～３６℃；酶的最适ｐＨ大于８．０。     

镰孢菌属Q7-31菌株产耐碱性木聚糖酶的酶学性质

对镰孢菌属Q7-31菌株所产木聚糖酶的粗酶液和部分纯化后的酶液进行了酶学性质比较试验。其粗酶液的最适反应pH为6.0,温度50℃;稳定范围:pH6.0,温度30℃。粗酶液经部分纯化后酶液的最适反应pH5.0～6.0,温度为40～50℃;稳定范围:pH5.0～6.0,温度30～40℃。纯化后酶液的酶学性质明显优于粗酶液。     

猪肾溶茵酶的纯化和部分性质研究

猪肾溶菌酶提取液经过正丁醇脱脂,(NH4)2SO4沉淀,得到粗酶液,再经过CM-Sepharose FF阳离子层析柱和sephacryl S-100凝胶过滤层析纯化得到电泳纯的溶菌酶.该酶的比活力为162.45,提纯倍数为113.6,回收率为16.89%.该酶对溶壁微球菌作用的最适温度为45℃,最适作用的pH为6.0,在50℃以下和pH 4.5～9.0之间都有较好的稳定性.酶分子量约为15.0 kd,其米氏常数为0.013 5 g/m L.     

中国黑白花优良种公牛精子透明质酸酶的分离纯化及部分性质研究

中国黑白花优良种公牛精子透明质酸酶经硫酸铵分级沉淀和 Sephadex 柱层析分离纯化,得到一个电泳纯品,活力纯化40倍.用 sephadexG-150凝胶过滤和 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为65000.该酶的最适 pH 为3.5～4.5,最适温度为37℃～45℃,在室温下较稳定,用 Limeweaver-Burk 作图法求得 Km 值为6.06×10~(-4)mol/L.