用锌离子从人尿中分离尿激酶

用低浓度锌离子从人尿中沉淀尿激酶（ＵＫ）,锌离子浓度为３ｍｍｏｌ／Ｌ时,沉淀回收率为８７％～９３％,用ｐＨ１０～１０．５的２０ｇ／Ｌ硫酸铵按１∶４（ｇ∶ｍｌ）溶解ＵＫ沉淀物,ＵＫ溶解得率为９７％。溶解液用７０％饱和度的硫酸铵盐析,ＵＫ盐析收率为９１％,粗品纯度为４．０８×１０５ＩＵ／ｇ,固体效价为３．６×１０４ＩＵ／ｇ,总收率在７７％～８２％之间。每吨尿（５．００×１０６ＩＵ计）可得ＵＫ粗品（３．８～４．１）×１０６ＩＵ。该粗品可用离子交换层析或亲和层析进一步纯化。     

联苯胺亲和层析纯化尿激酶

利用甲基丙烯酸缩水甘油酯与乙二醇甲基丙烯酸酯经悬浮聚合反应合成亲水性亲和载体骨架,骨架上的不环氧基与氨水反应,继之与丁二酸酐反应,最后与配基联苯胺偶联制备亲和载体,配基密度为５４μｍｏｌ／ｇ湿胶。亲和载体吸附激酶的最佳条件为ＰＨ４．６和２．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ;测定了吸附等温线,算得离常数Ｋｄ为３１６ＩＵ／ｍｌ,了大吸附量ｑｍ为２．３８３×１０＾４Ｕ／ｍＬ湿胶,洗脱条件为含０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ     

PEG修饰青霉素酰化酶及其在两水相生物转化体系中的分配

厅用对甲苯磺酰氯法,用聚乙二醇对青霉素酰化酶进行化学修饰,修饰酶的比活为未修饰酶的75％,稳定性比游离酶有了很大提高。酶在带修饰酶的聚乙二醇与葡聚糖组成的两水相体系中的分配系数为25。     

用锌郭从人尿中分离尿激酶

用低浓度锌离子从人尿人沉淀尿激酶，锌离子浓度为３ｍｍｏｌ／Ｌ时，沉淀回收率为８７％－９３％，用ＰＨ１０－１０．５的２０ｇ／Ｌ硫酸按溶解ＵＫ沉淀物。     

水溶性亲和超滤载体的制备和应用

用Ｄｅｘｔｒａｎ Ｔ２０００,经环氧氯丙烷交联并氧化产生部分羧基,偶联对氨基苯甲脒制得水溶性亲和载体巨配基。配基密度为７１．４μｍ ｏｌ／ｇ。截留分子量为１０ 万的超滤膜对所制亲和载体的截留率大于９９．５％ ,但尿激酶能自由通过。将比活为５００ＩＵ／Ａ２８０的尿激酶粗品经亲和超滤得到纯化的尿激酶,比活达６６ ３００ＩＵ／Ａ２８０,纯度提高１３３ 倍,回收率达８３．４％ 。     

聚苯乙烯载体亲和层析纯化尿激酶

聚苯乙烯经磺化后连接手臂６－氨基己酸，然后偶联配基对氨基苯甲脒，制成亲水性的亲和载体。载体的最适配基密度为每克湿载体３２μｍｏｌ，最适吸附条件为ｐＨ７．５、０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）。在ｐＨ４．０、０．１ｍｏｌ／Ｌ醋酸缓冲溶液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）中，采用０～１ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＳＣＮ梯度洗脱，可将比活８．３３μｍｏｌ·Ｓ－１·ｍｇ－１的粗酶纯化５０倍，收率大于５３％。     

固定化青霉素酰化酶在光敏感可再生两水相体系中催化青霉素G为6-APA

在一种光敏感可再生高聚物(PNBC 300000)与葡聚糖20000(Dextran 20000)形成的两水相体系中进行固定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应。在这个两水相体系中,当pH为7.8,底物浓度为62 mmol/L,反应温度为20℃,在50 mmol/L KCl存在下,6-APA的分配系数可达8.4。催化动力学显示,达到平衡的时间近6 h,PG(Na)转化率约82.6%。3批半连续反应转化率为60%~70%,较相近条件下的单水相反应得率提高近20%。在两水相中,底物及产物主要分配在上相,固定化酶分配在下相,底物青霉素G进入下相经酶催化产生的6-APA及苯乙酸又转入上相,从而解除了青霉素酰化酶催化反应的底物及产物抑制作用,达到提高产物得率的效果。形成两水相的高聚物通过488 nm的激光照射可实现循环利用,高聚物的光照回收率在95%~98%。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子的分离纯化

采用肝素-sepharose亲和层析和SephadexG-100凝胶过滤层析法,从含haFGF基因重组体的大肠杆菌菌体中分离纯化得到人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF)。SDS-PAGE,IEF电泳检测均为单一谱带。HPLC层析显示单一蛋白峰,SDS-PAGE测定rhaFGF分子质量为16.67ku,IEF测定等电点pI为4.8,并用Edman降解法测定了N-末端氨基酸序列,Balb/c3T3细胞培养法测定纯化的rhaFGF生物活性ED50为6μg/L,表明其对细胞分裂有明显促进作用。     

非修饰性寡核苷酸芯片用于HLA-DQA分型的初步研究

利用非修饰寡核苷酸基因芯片技术,根据HLAⅡ类抗原DQA位点不同基因亚型的特异性序列设计探针,制成分型芯片;待测样本经PCR反应标记上荧光之后,与探针在芯片上进行杂交,根据杂交产生的荧光信号值,确定样品DQA位点基因亚型。将这一方法应用于125例临床样本和10例标准品的HLA-DQA分型,该方法分型的结果与准确结果相比,准确率达到93.3%。实验结果表明:非修饰性寡核苷酸芯片用于HLA-DQA分型技术可行。