用活化的单甲氧基聚乙二醇修饰L-天冬酰胺酶

使用活化的单甲氧基聚乙二醇（mPEG2）对L－天酰胺酶进行修饰,修饰过程中加入底物L－天冬酰氨保护酶的活性中心。得到的修饰酶抗体结合能力消失,保留酶比活力32．8％,酶的常温稳定性和热稳定性均有显著提高。荧光胺法科氨基数目得出酶分子的92个自由氨基中有51个被修饰剂结合。     

聚乙二醇衍生物修饰胰蛋白酶的研究

采用各种类型的聚乙二醇衍生物修饰胰蛋白酶，对所修饰酶的酶学性质进行了评价并与原酶比较.结果表明：修饰酶的残存活力受修饰剂的结构、分子量和修饰化度的影响较大，其中分子量为5000-6000的2种聚乙二醇衍生物所修饰的酶活力升高所有修饰酶的热稳定性显著改善，其最适pH值没有发生变化，修饰酶的Km值有所增加．实验表明采用合适的修饰剂对胰蛋白酶进行适度地修饰不会降低酶的活性和改变酶性能.     

青霉素酰化酶研究——Ⅱ.酶的修饰和修饰酶的性质

本文介绍用β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)活化右旋糖酐T2000以修饰大肠杆菌5852青霉素酰化酶。活化时500mg右旋糖酐需SESA 20mg。制备对氨基苯磺酰乙基葡聚糖(ABSE)-右旋糖酐的反应温度为80℃,与500mg活化右旋糖酐偶联的酰化酶酶量为100u,修饰率达88.3%。用琼脂糖(Sepharose 4B)或交联葡聚糖(Sephadex G150)柱层析分离得高分子量的修饰酶。修饰酶对热和pH的稳定性均优于自由酶,最适温度提高,但最适pH和高浓度青霉素G底物抑制现象没有改变。     

磁性载体用于酶固定化方面的研究

合成了具有磁响应性的两亲性聚乙二醇胶体粒子,并以此为载体,用吸附交联法固定化了α－淀粉酶。最适交联条件研究表明：缓冲液ｐＨ值、戊二醛浓度及加酶量都对固定化酶活力、比活有一定影响。在最适固定化条件下,固定化酶的活力为３４０００Ｕ·ｇ＾－１干胶,蛋白载量为１００ｍｇ·ｇ＾－１干胶,比活为３４０Ｕ·ｍｇ＾－１蛋白,活性回收率为３７．７％。最适反应温度比天然酶（５０℃）提高３０℃。最适ｐＨ比天然酶（７．０     

聚乙二醇修饰超氧化物歧化酶某些性质的研究

用聚乙二醇修饰后,SOD的残留活力为60％～80％,其耐热,耐酸与耐碱效能均高于天然SOD。     

β-环糊精衍生物与核糖核酸酶的相互作用

用β-环糊精和对甲苯磺酰氯合成单-(6-O对甲苯磺酰基)β-环糊精,以合成的β-环糊精衍生物为主体,核糖核酸酶为客体,对比研究β-环糊精衍生物催化核糖核酸的水解和β环糊精衍生物非共价修饰的核糖核酸酶催化核糖核酸水解的酶活性,分析其催化活性的高低,并对其作用机理进行初步的探讨.β-环糊精衍生物具有水解核糖核酸的催化活性,能够非共价结合在核糖核酸酶上,形成的非共价修饰核糖核酸酶的催化活性比核糖核酸酶要高8.8倍.     

壳聚糖修饰L-天门冬酰胺酶对酶活及抗原的影响

采用水溶性壳聚糖对L－天门冬酶胺酶进行化学修饰，修饰后的酶活回收率高达705，修饰酶的比活为每毫克蛋白质121.79U，pH值为7.4，更接近于人体血浆pH值(7.2-7.4），对底物的亲和力有所提高，稳定性增加，抗原性仅为自然酶的1／3，增加了临床使用的安全性。     

从发酵液中直接提取柚苷酶

用双水相萃取方法直接从发酵液中提取柚苷酶进行了实验,就聚乙二醇-硫酸铵双水相系统中的聚乙二醇相对分子量、聚乙二醇浓度、硫酸铵浓度、无机盐的添加等因素对柚苷酶的分配行为的影响进行了探索。结果显示:在用浓度为14%~16%的PEG1000与浓度为14%~18%硫酸铵和0.1%氯化钠组成的双水相体系中,柚苷酶的分配系数达1.85以上,酶活力回收率达80%,提纯倍数为2.1。     

黄原胶修饰糖化酶的性质研究

为更好地应用修饰糖化酶 ,对经黄原胶修饰的糖化酶基本性质进行了研究 ,结果表明修饰糖化酶的最适作用温度与对照酶基本相同 ,为65℃.但随着温度的升高修饰糖化酶对热的抗性增强 而修饰酶的 pH稳定范围有所变宽 ,对酸具有一定的抗性 修饰酶的米氏常数Km值变小 ,为0.788×10-2,而对照酶的Km值为1.17×10-2,表明修饰酶对底物的亲和力增强 在相同条件下 ,修饰酶催化反应的淀粉糖化DE值较高     

福寿螺β-葡萄糖苷酶催化功能基团

应用化学修饰法研究福寿螺β－葡萄糖苷酶活性功能基团的性质．用５，５′－二硫代双（２－硝基苯甲酸）和对－氯汞苯甲酸为修饰剂修饰酶分子中的巯基，酶活力基本不受影响，说明该酶不是“巯基酶”．用Ｎ－溴代琥珀酰亚胺在ｐＨ６．０下修饰酶后，可使酶活力完全丧失，被修饰后的酶分子在２７８ｎｍ处的紫外吸收峰逐渐下降至完全消失，３３８ｎｍ处的荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭，说明色氨酸残基是酶活性必需基团之一．用碳二亚胺、溴代乙酸或甲醛修饰酶，可以使酶活力完全丧失，说明羧基、组氨酸的咪唑基及赖氨酸的氨基也与酶活性有密切的关系．用乙酰丙酮、苯甲磺酰氟修饰酶，酶活力不受影响，表明精氨酸残基和羟基与酶活性无关．     

固定化青霉素酰化酶在双水相体系中催化合成氨苄西林

通过研究氨苄西林、6-氨基青霉烷酸（6-APA）和D-苯甘氨酸甲酯（D-PGME）在聚乙二醇（PEG）和不同盐组成的双水相体系（ATPS）中的分配行为,建立了一个由PEG-4000（w=20％）和硫酸铵（w=15％）组成的双水相体系．在此体系中,氨苄西林的分配系数为5．0,6-APA和D—PGME的分配系数分别为1.7和1．4．以环氧基功能化介孔分子筛SBA-15为载体固定青霉素酰化酶（Penicillin G Acylase,PGA）,并在双水相体系中催化合成氨苄西林,产率为80％,经过4批次的连续合成,产率提高到98％,而在水相体系中酶促合成氨苄西林的产率仅为27％．     

PEG/磷酸盐双水相系统及BSA在其中的分配特性

以PEG/磷酸盐双水相系统为研究对象，成功地制作了PEG6,000./磷酸盐和PEG10，000/磷酸盐两个双水相系统的相图，初步探讨了5种不同组成的PEG6,000/磷酸盐双水相系统相分离过程的一般规律，然后以BSA在PEG6,000/磷酸盐双水相系统两相间的分配系数及其下相分配率为目标，研究了双水相系数成相浓度、外加盐NaCl、BSA起始浓度等对BSA在双水相系统中分配特性的影响。     

分子伴侣GroEL对青霉素G酰化酶亚基折叠的影响

采用Tac启动子控制表达质粒，在不同的宿主细胞中表达了青霉素G酰化酶（PAC），检测这些菌株所表达的PAC活性，分析细胞内分子伴侣GroEL含量，PAC翻译后加工为α，β亚基的状况，以及它们之间的关系，结果表明：质粒pKK-SP在不同宿主中表达时，翻译后加工状况有明显差异，单位质量细胞所表达的PAC活性与翻译后加工效率相关，且与细胞内分子伴侣GroEL在菌体总蛋白中含量正相关，同时也阐明了亚基的折叠成为翻译后加工过程的限制步骤，细胞内分子伴侣GroEL有助于PAC亚基的折叠和稳定。     

青霉素G酰化酶调节基因定点诱变的研究

构建了大肠杆菌中青霉素G酰化酶（PAC）的调节基因（pacR）翻译起始密码定点突变株。对突变后PAC的表达调控特征进行了研究，结果表明：突变株的pac基因表达后能正常加工成24ku、65ku的α亚基和β亚基；突变后，虽然PAC表达仍需要苯乙酸诱导，但是，可诱导性提高，形成低组成型表达，无葡萄糖有分解代谢物阻遏效应，因而pacR对PAC表达水平存在着影响，pacR基因是葡萄糖以及它的分解代谢物在分子水平上影响PAC表达的另一作用因素。采用突变株进行发酵生产中，PAC产量较亲株提高3倍，而且可以采用葡萄糖作为碳源，有利于改善PAC的生产。     

双水相萃取红景天苷的研究

聚乙二醇(PEG)/盐的水溶液双相体系(ATPS)形成双相行为和双相分配行为的研究.研究了聚乙二醇(PEG)的分子量和质量分数,盐种类,盐的质量分数,离子强度,红景天初始浓度对红景天提取率的影响.并通过正交试验,确定最佳双水相PEG/(NH_4)_2SO_4体系的条件,产生一个简单的预处理方法为提取和测定红景天苷.当双水相体系是20%PEG1000,20%(NH_4)_2SO_4和1%KCl时,提取效果最好,提取率是95.32%.     

两相分配法制备甘草根质膜及其纯度鉴定

以甘草（Glycyrrhiza uralensis F．）根为材料,利用差速离心法获取细胞微粒体,通过水溶性聚合物Dextran T-500和PEG4000所构成的两相分配体系制备质膜．标志酶鉴定结果表明,上相中富含质膜,内膜污染较少,质膜纯度较高;下相中富含其它内膜．Western blot分析结果表明,在对应于水通道蛋白分子量大小的位置存在特异条带．实验证明,PEG-Dextran两相分配体系可获得较高纯度的甘草根密实正向型质膜囊泡．     

固定化青霉素G酰化酶活性的X射线微区分析(Ⅰ)———捕捉剂的选择

为了能对固定化青霉素G酰化酶进行X射线微区分析 ,筛选了能捕捉酶活的合适的底物与捕捉剂的体系 ,青霉素G钠作为底物 ,FeCl3 作为捕捉剂 ,底物经固定化青霉素G酰化酶水解产生苯乙酸 ,后者与捕捉剂反应生成沉淀 ,可以确定固定化青霉素G酰化酶的催化活性部位 ;还对捕捉剂与底物、固定化青霉素G酰化酶与载体以及载体与底物之间的相互作用进行了研究 ,找到了可用于对固定化青霉素G酰化酶活性进行X射线微区定位的捕捉剂.     

基于双水相体系的KAu(CN)2分配行为

报导了KAu(CN)₂在聚乙二醇(PEG)/硫酸钠双水相体系中的分配行为。实验考察水相金浓度对KAu(CN)₂分配影响。结果表明：富硫酸钠相(下相)的KAu(CN)₂几乎全部转移到富PEG相(上相)。在上相,随KAu(CN)₂含量增加,电导率下降。FT-Raman光谱表明,KAu(CN)₂与PEG可能没有强的相互作用。双水相体系为金分离提供了一种新方法。     

两水相系统萃取糖化酶的相平衡

含有聚乙二醇(PEG)和硫酸铵(NH_4)_2SO_4的两水相系统,能有效地用于从发酵液中提取糖化酶。研究表明:随着PEG平均分子量降低、成相组分浓度的适当增加以及加入较高浓度的无机盐,均能提高酶的分配系数。PEG浓度增大,(NH_4)_2SO_4浓度的减小有利于相比的增大。在同一条系线上,相比的确定应从提取收率和酶的浓缩两方面综合考虑。已发现,在含有26%PEG400-16%(NH_4)_2SO_4,pH4.4的系统中(相比1.2),糖化酶的分配系数为47,收率为96%。     

手性药物扁桃酸的双水相分离

采用聚乙二醇-硫酸铵双水相系统分离手性药物扁桃酸.研究了聚乙二醇分子量、相组成、pH值和温度对扁桃酸分离的影响.结果表明,聚乙二醇分子量对双水相分离扁桃酸的影响最大;温度对扁桃酸的分离几乎没有影响;随pH增大,扁桃酸分配系数减少.