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1.
构建并筛选出重组人表皮生长因子(rhEGF)高表达的毕赤酵母(Pichia pastoris)基因工程菌株,于30L发酵罐进行中试发酵按1∶15接种15LFBSM发酵,pH 6.0、28~30℃、DO20%~30%、流加甲醇诱导发酵42h,rhEGF的表达量可达1g/L.采用疏水层析、离子交换柱层析及分子筛凝胶层析的方法分离纯化rhEGF,获得的rhEGF试制品的纯度大于95%,得率在40%以上.通过基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)测定rhEGF的分子质量为5 946.309u,与理论分子质量一致.N端蛋白序列分析仪分析其N端氨基酸序列,测序结果与理论的氨基酸序列一致.采用Balb/c 3T3细胞增殖/MTT比色法测定其活性,测定rhEGF的活性为1.0×106 IU/mg,与WHO标准品相当.本研究实现了毕赤酵母高效表达rhEGF并纯化得到符合《中国药典》标准的rhEGF,为工业化生产rhEGF提供基础. 相似文献
2.
发酵产物对灰绿曲霉β-葡萄糖苷酶活力的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
从自行筛选出的灰绿曲霉XC-9菌株的发酵液得到活力较高的纤维素酶,分离纯化出其中的β-葡萄糖苷酶(BG).探讨发酵产物对酶活力的影响,乙醇、乙酸、乳酸对酶活力有不同程度抑制,抑制强度依次为乳酸乙酸乙醇,其半抑制浓度(IC50)分别为0.09,0.34和4.4mol/L.它们对BG的抑制作用均表现为非竞争性可逆抑制,抑制常数分别为0.7%(0.083mol/L)、2%(0.315mol/L)、26%(4.25mol/L),实验结果表明它们不是结合在酶活性中心的底物结合部位上,而是结合在其以外的必需基团上抑制酶活力.随着乙醇浓度上升,BG最适反应温度逐渐降低,乙醇达到20%(体积分数,下同)时,BG最适温度由60℃降到50℃.在低体积分数乙醇溶液(小于16%)中的BG活力高过无乙醇溶液中的BG活力.荧光光谱分析表明,高浓度乙醇可使BG分子构象松散,导致变构失效.该研究为纤维素酶发酵进程控制提供了理论依据. 相似文献
3.
苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力的抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
酪氨酸酶(EC 1.14. 18.1)是生物黑色索形成的关键酶.该酶抑制剂在果蔬防褐变保鲜中具有重要的应用前景.在筛选酪氨酸酶活力抑制剂过程中,发现苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力有明显的抑制作用,对蘑菇防止褐变具有较好的保鲜效果.报道了苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶单酚酶活力和二酚酶活力的影响和抑制作用.结果表明,苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的效应不仅降低了酶促反应的稳定态活性,也延长了酶促反应的迟滞时间,并具有浓度依赖关系.当苯丙酸浓度达10.0 mmol/L时,稳定态活力下降2/3,迟滞时间从100 s延长到140 s;苯丙酸对二酚酶活力的抑制也显爪浓度效应,抑制效果更为显著,引起酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为2.05 mmol/L,苯丙酸对二酚酶活力的抑制显示可逆的效应,抑制类型为混合型,抑制常数(KI和KIS)分别为1.570和3.070 mmol/L. 相似文献
4.
肠激酶(EK,EC 3.4.21.9)是一种在基因工程产品中广泛应用的工具酶.以小分子荧光物质Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β-萘胺为底物,采用荧光跟踪法研究了变性剂盐酸胍、硫脲、尿素对重组牛肠激酶(rEK)活力的影响及抑制动力学.结果表明:盐酸胍、硫脲、尿素均对该酶的活性有较强的抑制作用,它们对该酶的半抑制浓度(IC50)分别为0.025,0.080和0.750 mol/L.研究的3种变性剂对该酶的抑制均显示可逆抑制机理;抑制类型也均为竞争性类型,测定它们对酶的抑制常数KI分别为0.015,0.060和0.553 mol/L. 相似文献
5.
利用BALB/c小鼠子宫内膜异位症(EMs)模型,采用实时荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附试验,从mRNA水平和蛋白水平上检测了EMs BALB/c小鼠腹腔免疫细胞和腹腔液中的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在造模后变化情况.结果显示:造模后的21 d内MIF在基因水平和蛋白水平上都高于对照组,尤其在异位灶形成的早期阶段增加更为显著.提示MIF与EMs的发生发展过程关系密切,可能参与早期的病理活动过程. 相似文献
6.
肠激酶(EK,EC 3. 4. 21. 9)是一种在基因工程产品中广泛应用的工具酶.以小分子荧光物质甘氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-β-萘胺(Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β-naphthylamide, GD4K-β-naphthylamide) 为底物,采用荧光跟踪法研究了不同氨基酸、几种常用有机溶剂、EDTA、DTT等对牛肠激酶(BEK)活力的影响.结果表明:L-赖氨酸(L-Lys)、丙酮、EDTA、DTT对该酶的活性有较强的抑制作用,IC50分别约为25,50,50 和120 mmol/L.进一步研究了L-Lys与丙酮对BEK活力的抑制机理以及抑制类型,结果表明:L-Lys对该酶的抑制机理为可逆抑制,其抑制类型为竞争型抑制类型,其抑制常数KI为12.02 mmol/L.丙酮对BEK的抑制类型表现为不可逆抑制. 相似文献
7.
文蛤多肽粉对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用及免疫调节作用 总被引:1,自引:0,他引:1
将文蛤肉以复合胰蛋白酶酶解,经喷雾干燥工艺得到了文蛤多肽粉,研究文蛤多肽粉对肝癌细胞的抑制作用和对昆明种小鼠的急性毒理作用和免疫调节作用,结果显示文蛤多肽粉对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721具有明显的杀伤作用,使细胞变形以至破裂从而抑制癌细胞的生长,抗肿瘤作用明显;文蛤多肽粉给药组的胸腺指数和脾脏指数较空白对照组明显升高,提示文蛤多肽粉能促进小鼠胸腺和脾脏的生长发育,增强免疫力. 相似文献
8.
以巴戟天(Morinda officinalis How) 为原料,运用多种理化方法,提取纯化巴戟天粗多糖,经红外吸收光谱比较和鉴定确认提取物中有多糖特征吸收.采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,以多糖的纯度和提取率为主要指标,对提取方法进行优化.结果表明,用乙醇-水提取法进行提取,用Sevag法除蛋白,氯化十六烷基吡啶(CPC)结合醇沉法进行纯化.正交实验结果表明提取纯化巴戟多糖最隹条件是乙醇浓度为85%,CPC浓度为0.4%,粗多糖浓度为10%的条件下,纯化多糖的纯度为89.7%,多糖的提取率为10.2%. 相似文献
9.
木贼活性成分对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
以木贼为材料,研究木贼的提取物对蘑菇酪氨酸酶的效应.结果表明,木贼的乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶有较强的抑制作用,其IC50值为0.375 mg/mL,抑制机理为可逆混合型.DPPH实验显示木贼的乙醇提取物具有较强的抗氧化作用,说明木贼乙醇提取物通过清除氧自由基来抑致黑色素生长的作用. 相似文献
10.
文昌鱼碱性磷酸酶的分子量及氨基酸组成的初步研究 总被引:7,自引:1,他引:6
经凝胶过滤法测得文昌鱼(Bronchiostoma belcheheri Gray)碱性磷酸酶的分子量为138,000,用等电聚焦电泳法测得其等电点为4.79,用氨基酸自动分析仪测得该酶的氨基酸组成共20种和1117个氨基酸残基。 相似文献