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把大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因克隆到带有GAL1启动子的酵母诱导表达质粒pYES2中,研究了酵母半乳糖诱导启动子GAL1控制下的基因表达特性.研究表明,β-半乳糖苷酶基因的表达明显地受培养基中碳源的调节,产生的β-半乳糖苷酶可达细胞总蛋白含量的10%左右,从而为利用可调控表达系统在酵母菌中实现外源基因较高水平表达打下了一定基础. 相似文献
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影响酿酒酵母电击转化率的条件 总被引:1,自引:1,他引:0
以酿酒酵母为材料,用穿梭质粒pYES2进行电击转化的条件实验.实验表明电击中电压大小、细胞的生长状态、处理条件和电击后细胞的培养时间以及质粒浓度等对电击转化率均有影响.取对数生长期酵母细胞,用二硫苏糖醇(DTT)处理以疏松细胞壁,加0.7μg/mL质粒DNA,5kV电压电击,转化后细胞在完全培养基中培养60min后,涂布选择培养基,转化率可达4.8×105个转化子/μg质粒DNA,细胞的存活率为39.2%,比完整细胞转化的效率高,存活率偏低 相似文献
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分泌性表达人rPA毕赤酵母工程菌株的构建及发酵条件的初步优化 总被引:2,自引:0,他引:2
通过PCR扩增得到组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(rPA)基因片断,将该基因片断插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列载体pPIC9K中,构建了重组表达质粒pPICgK/rPA,转化Pichia pastoris GS115宿主菌.通过比较转化子在MM和MD平板上的生长状况,筛选His^ Mut^s表型转化子.并在2.0mg/mL G418平板筛选得到多拷贝转化子GR10,GR11.摇瓶培养,甲醇诱导外源基因表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明重组蛋白分子量约39ku,能与特异性单克隆抗体发生免疫反应;体外气泡法测定rPA活性,结果显示重组蛋白具有较好的纤溶活性.通过正交试验,优化发酵条件,表达活性最高为1050IU/mL. 相似文献
4.
壳聚糖酶产生菌的筛选及其酶解产物的初步研究 总被引:8,自引:0,他引:8
采用平板透明圈法从 19株腐皮镰孢菌 (Fusariumsolani)中筛选到 1株产壳聚糖酶的菌株 ( 0 114 ) .摇瓶培养表明 ,该菌壳聚糖酶的产生不需要壳聚糖诱导 ;该菌培养 84h达到产酶高峰 ,酶的最适作用温度为 5 0℃ .4 5mU mL作用酶量 ,5 0℃下处理 6h ,壳聚糖的降解率达 2 6 .7% ,薄层层析分析表明酶解产物中壳寡糖含量较高 相似文献
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酵母嗜杀质粒融合转移──Ⅰ.融合转移系统的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
以嗜杀酵母ERR1和啤酒生产酵母AS2420出发菌株,建立了供体菌MK2-3:K+R+Leu-ρ+(n)和受体菌AS2420-1:K-R-leu+ρ°(2n).对原生质体制备再生条件的研究结果表明两株菌的原生质体制备条件不尽相同;同一菌株原生质体形成与再生的最佳条件也不相同.有利于融合再生的原生质体制备条件是MK2-3:菌龄30h,蜗牛酶解量30g/L酶解时间30min,此时原生质体形成率为80%,而再生率达17.1%,这些条件对嗜杀活性无影响,再生菌落的嗜杀活性率达100%;而AS2420-1;菌龄24h,蜗牛酶量20g/L,酶解时间30min,原生质体形成率为81%,再生率为18.1%.对四种渗透压稳定剂的再生效果实验表明甘露醇效果最佳,氯化钾次之,考虑到廉价,氯化钾是很好的代用品,在30%PEG6000及Ca2+条件下进行原生质体融合,融合率可达8.9×10-6,对其中的融合子MAR4的遗传性状及嗜杀活性的稳定性检测,DNA含量及细胞大小测定,dsRNA质粒的提取及电泳结果分析和发酵性能测定,结果表明融合子MAR4具有较高的嗜杀活性并可以稳定遗传,有与供体菌MK2-3嗜杀质粒dsRNA相同的电泳行为, 相似文献
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以K_2型嗜杀酵母为材料在改进Russell(1986)的嗜杀活性检测方法基础上,建立了双层平板单菌落检测法。此法可直接用于嗜杀酵母的筛选,嗜杀质粒的检测,并能在诱变后的平板上检出有嗜杀活性的营养缺陷型菌株MK_2-3:K~+,len。对K_2嗜杀特性初步研究表明,K_2型嗜杀酵母能杀死酿酒酵母(Saccha-romyces cerevisiae),但对所测汉逊酵母(Hansenula spp.)无作用。嗜杀毒素产生的最适pH和温度分别为pH4.5—5.5和20—25℃,酵母菌的对数生长期嗜杀毒素达到高峰。用紫外线(UV)、溴化乙锭(EB)、亚硝基胍(NTG)和甲基磺酸乙酯(EMS)进行消除K因子实验,表明亚硝基胍和紫外线对K因子具有一定消除率,而溴化乙锭和甲基磺酸乙酯未发现消除作用。 相似文献
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虎眼万年青的体细胞胚胎直接发生与植株再生 总被引:2,自引:0,他引:2
本文结果表明,在含NAA和BA各0.5mg/l的MS培养基上,体细胞胚以高频率直接发生于虎眼万年青休眠子鳞茎鳞片切段的近轴面原形态学基部一侧。体细胞胚在残余的半干旱培养基上失水处理后萌发率显著提高,并产生根系完整的健壮再生植株。 相似文献
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P137G点突变对嗜热细菌木糖异构酶酶活性及热稳定性的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
利用重叠延伸法对嗜热细菌(Thermus thermphilus)的木糖异构酶基因xylA进行体外P137G定点突变,通过酿酒酵母表达载体XM204将突变基因xylA137引入酿酒酵母H158中,得到重组菌株H158 XI137. 酶活分析表明,H158 XI137在中温条件下的酶活有很大的提高,与对照菌株H158 XI相比,30?℃时的酶活提高1倍,并且拓宽了最适反应pH,但是其热稳定性大大降低. 结果表明,嗜热细菌木糖异构酶137位的Pro对维持其热稳定性起到重要的作用,并且对其酶学性质有很大的影响. 相似文献
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