肝片吸虫DNA疫苗的构建及其免疫效应的初步研究

用ＥcorRI酶切含肝片吸虫保护性抗原基因ＦＨ３的重组质粒pUC18/FH3,回收ＦＨ３（－１．０Ｋb)片段克隆到真核表达载体pBlueCMV上,酶切筛选顺向插入重组子pBlueCMV-FH3,即得到一种肝片吸虫ＤＮＡ疫苗,制备纯化该疫苗并免疫小鼠,小鼠肌肉细胞中有一定的ＦＨ３抗原表达;用ＥＬＩＳＡ检测抗血清表明,注射疫苗的小鼠均伴随产生一定量的特异性抗体,用肝片吸早囊蚴攻击（２０囊蚴／鼠）小鼠,初步显示有一定的减虫率。     

A 407-NM BLUE LIGHT GENERATION IN A BULK PERIODICALLY POLED LiTaO_3

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催化杀虫剂西维因水解的抗体酶制备(Ⅰ)抗原的分子设计、合成与优选

以杀虫剂西维因酯解反应中间过渡态的结构信息进行分子设计，合成了α－萘基磷酸氢酯半抗原，将其与载体蛋白牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和鸡卵清蛋白（ＣＥＡ）偶联，制得了具有不同抗原价（４～２２）的合成抗原．经小鼠免疫学实验，优选出了可产生滴度高、特异性强之抗血清的免疫用抗原（Ｈａｐ－ＢＳＡ）．经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定，用该免疫原制得的鼠抗血清滴度可达１∶３２０００．优选抗原Ｈａｐ－ＢＳＡ可被用作产生催化西维因水解之抗体酶的免疫原．     

沙门氏菌Ⅱ相鞭毛蛋白基因在减毒株中的表达

应用转化转导法把含有沙门氏菌Ⅱ相鞭毛蛋白基因ＦｌｊＢ＾ｅｎｘ的重组质粒ｐＨⅠ１０４导入无鞭毛的减毒株ＳＬ５９２８中获得表达;经电镜观察、玻板凝集试验及动力抑试验证实重组菌表达了相应的外源鞭毛蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得表达产物分子量为５２ｋｄ：Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ试验中表达产物可与Ｈ－２＾ｅｎｘ单因子血清发生特异性反应;体内外试验表明重组菌很稳定,口服免疫小鼠能诱导产生针对表达产物的特异性抗体。     

催化杀虫剂西维因水解的抗体酶制备

以杀虫剂西维因酯解反应中间过渡态的结构信息进行分子设计，合成了α－萘基磷酸氢酯半抗原，将其与载体蛋白牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和鸡卵清蛋白（ＣＥＡ）偶联，制得了具有不同抗原价（４－２２）的合成抗原，经小鼠免疫学实验，优选出可产生滴度高，特异性强之抗血清的免疫用抗原（Ｈａｐ－ＢＳＡ）经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定，用该免疫原制得的鼠抗血清滴度可达１：３２０００优选的Ｈａｐ－ＢＳＡ可被用作产生催化相     

淋巴细胞性脉络丛胞膜炎病毒单克隆抗体的研制及初步鉴定

用提纯的ＬＣＭ病毒抗原（主要为ＮＰ６３）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，应用鼠—鼠杂交瘤技术获得了三珠（１Ｅ２、１Ｃ６和２Ｄ２）分泌抗ＬＣＭＶ单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经检测，它们所分泌的抗体亚类分别为ＩｇＧ１（１Ｅ２）和ＩｇＭ（１Ｃ６）。亲和力为７５μｇ（１Ｅ２）和５μｇ（１Ｃ６）。腹水效价为１０５。免疫荧光阻断法和ＥＬＩＳＡ阻断试验测定结果一致，１Ｅ２的标记物能阻断２Ｄ２，但不能阻断１Ｃ６。三株ＭｃＡｂ对７种鼠源性病毒抗原（ＲｅＯ３、Ｓｅｎｄａｉ、ＭＨＶ、ＧＤⅦ、ＥＨＦＰＶＭ和Ｅｃｔｒｏ）均无反应。     

黄芪多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫功能的影响

采用红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ），红细胞免疫复合物花环率（ＲＢＣ－ＩＣＲＲ），血清中红细胞Ｃ３ｂ受体花环抑制率（ＲＥＩＲ）和红细胞Ｃ３ｂ受体花环促进率（ＲＦＦＲ）等四个指标，研究了黄芪多糖对Ｓ１８０Ａ小鼠肝癌（ＨＥＰＡ）和小鼠红细胞免疫功能的影响。结果表明，黄芪多糖能明显提高荷瘤小鼠的ＢＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ和ＲＦＥＲ，降低ＲＢＣ－ＩＣＲＲ和ＲＦＩＲ。这一结果说明黄芪多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫有明显的促进作用。     

沙门氏菌rDNA ISR序列测定及特征分析

以细菌ｒＤＮＡＩＳＲ通用经物对鼠伤寒等８种沙门氏菌进行了ＰＣＲ分析，表明在沙门氏菌属的不同菌株中都存在１个比大肠杆菌的Ｌ－ＩＳＲ长几十年碱基对的Ｌ－ＩＳＲ。进一步测定和分析鼠伤寒，纽波特和田纳西３种沙门氏菌Ｌ－ＩＳＲ的全序列，揭示出不同血清型的沙门氏菌具有相似的ｔＲＮＡ基因的间隔区和特征性核苷酸序列。这些特征序列可以作为沙门氏各的分子标志，用于沙门氏菌的分子检验和系统学鉴定。     

乙型肝炎表面抗原基因DNA介导的体液免疫初步研究

用ＣＰＲ技术从纯化的乙型肝炎病毒核酸中扩增出ｐｅｒＳ２－Ｓ基因,并将其定向克隆于真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１（＋）中,构建成带有完整的乙肝表面前Ｓ２抗原基因和Ｓ基因的重组质粒。重组质粒经酶切及部分序列分析鉴定后,瞬时转梁小鼠Ｌ细胞,ＥＬＩＳＡ法检测到培养上清液有ＨＢｓＡｇ表达。用纯化的重组质粒静脉、肌肉和皮下注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,首次接种质粒ＤＮＡ３周后,血清抗体开始出现,再次加强２周后,阳性     

红细胞生成素单克隆抗体制备及初步鉴定

为获取高效价的红细胞生成素（ＥＰＯ）单抗,以建立重组人红细胞生成素（ｈＥＰＯ）测定方法。用基因重组的ｈＥＰＯ与小鼠血清白蛋白经Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基－３（２－吡啶基二硫）丙酸酯（ＳＰＤＰ）交联后,常规免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,并用细胞融合技术制备分泌ｈＥＰＯＭｃＡｂ杂交瘤细胞;用间接ＥＬＩＳＡ和免疫印迹技术将ｈＥＰＯＭｃＡｂ与白色念珠菌胞质抗原的ＭｃＡｂ、嗜肺性军团病杆菌ＭｃＡｂ、ＨＣＶ核心肽ＭｃＡｂ、人μ链ＭｃＡｂ、ＩＦＮ－γＭｃＡｂ的间接ＥＬＩＳＡ同时进行特异性鉴定。经融合后检测,获取一株分泌ｈＥＰＯＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。初步鉴定,ｈＥＰＯＭｃＡｂ针对ｈＥＰＯ间接ＥＬＩＳＡ效价为１０－７（对照腹水为１０－３）;免疫印迹结果显示：此ＭｃＡｂ与基因重组的ｈＥＰＯ在分子量３０００～４０００之间有一条显色带,而其它几种ＭｃＡｂ均为阴性结果。小分子物质经与同种动物（免疫用动物）血清白蛋白交联后用作免疫抗原,可提高小分子物质的免疫原性,容易获取高效价的单克隆抗体。     

用合成多肽免疫制备抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的研究

介绍一种用合成的多抗原肽免疫动物来制备与天然人心肌肌钙蛋白Ⅰ特异反应的单克隆抗体新方法。从人心肌肌钙蛋白ⅠＮ端，根据多肽分子氨基酸的亲水性值选出了ＰＡＰＡＰＩＡＡＡＳＳ１１个氨基酸片段。将它用有八位点的赖氨酸核连接成多抗原肽后，以它为抗原用Ｒｉｂｉ佐剂进行免疫。将小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，获１１株抗此多肽的杂交瘤细胞株。对其中７株属于ＩｇＧ亚类的细胞进行了ＥＬＩＳＡ分析，发现这７株细胞均与天然的人心肌肌钙蛋白Ⅰ呈特异性反应，而不与人骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ发生交叉反应。利用３Ａ２细胞株所分泌的单克隆抗体对急性心肌梗塞患者、手术患者和正常人的血样进行了ＥＬＩＳＡ检测，证明它只对心肌梗塞患者血清发生阳性反应。获得了较为满意的结果。此细胞株所分泌的抗体有望用于心肌梗塞临床检测。     

肺支原体抗原快检试剂盒的研制

用不同抗体建立快检肺支原体抗原的夹心ＥＬＩＳＡ方法，并以培养汪评价，研制相应的试剂盒。结果表明夹心ＥＬＩＳＡ检测方法与培养法相符经为１００％，检出极限为１０００菌／ｍＬ，该方法特异性高，与其它相关抗原交叉反应低于３３％，度剂盒稳定性好。     

HIV-1和HBV复合型DNA免疫的初步研究

近年的研究表明,在啮齿类和非人灵长类免疫带有编码病毒和细菌抗原基因的质粒ＤＮＡ可以激发体液和细胞免疫应答．在本实验中,将ＨＢＶ的Ｓ基因和ＨＩＶ－１的ｇｐ１６０基因以融合形式插入到载体ｐｃＤＮＡ３中,其能表达ＨＢｓＡｇ和ｇｐ１６０的融合蛋白,并将此质粒ＤＮＡ分别直接注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠和Ｓｗｉｓ小鼠．三次免疫后,用ＥＬＩＳＡ的方法初步检测ＨＢｓＡｇ和ｇｐ１６０抗原特异的抗体免疫应答均为阳性．结果说明,带有ＨＢＶ和ＨＩＶ－１融合基因的质粒ＤＮＡ直接免疫小鼠后,均激发了小鼠产生相应的免疫应答反应,这个结果为研究和生产多价疫苗提供了新的思路     

红细胞生成素单克隆抗体制备及初步鉴定

为获取高效价的红细胞生成素（ＥＰ）单抗,以建立重组人红细胞生成素（ｈＥＰＯ）测定方法。用基因重组ｈＥＰＯ与小鼠血清白蛋白经Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基－３（２－吡啶基二硫）丙酸酯胞;用间接ＥＬＩＳＡ和免疫印迹技术将ｈＥＰＯＭｃＡｂ与白色念珠菌胞质抗原的ＭｃＡｂ,嗜肺性军团病杆菌ＭｃＡｂ,ＨＣＶ核心肽ＭｃＡｂ,人μ链ＭｃＡｂ,ＩＦＮ－γＭｃＡｂ的间接ＥＬＩＳＡ同时进行特异性鉴定。经融合后检测获取一株分泌ｈＥ     

黄芪多糖对P_（388）小鼠红细胞免疫促进作用的机制研究

研究了黄芪多糖（ＡＰＳ）对淋巴白血病Ｐ＿（３８８）小鼠红细胞膜功能的影响。研究结果表明，ＡＰＳ（１０～４０ｍｇ／ｋｇ）可显著增加Ｐ３８８小鼠红细胞免疫功能，显著升高红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（ＲＢＣ—Ｃ３ｂＲＲ）、红细胞Ｃ３ｂ受体花环促进率（ＲＦＥＲ），同时可降低红细胞免疫复合物花环率（ＲＢ—ＩＣＲＲ）、红细胞Ｃ３ｂ。受体花环抑制率（ＲＦＩＲ）。研究结果还表明，ＡＰＳ增强淋巴白血病Ｐ３８８。小鼠红细胞免疫功能的机制与ＡＰＳ降低Ｐ３８８小鼠红细胞膜过氧化脂质（工ＰＯ）含量、抑制红细胞膜蛋白与收缩蛋白交联高聚物（ＨＭＰ）的形成、增加红细胞膜封闭度、唾液酸含量、增强红细胞膜超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）、钠，钾—三磷酸腺苷酶（Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ）活性有关。     

抗沙门氏菌O4抗原单克隆抗体的研制及鉴定

制备抗沙门氏菌O4抗原单克隆抗体并鉴定其特性.用加热灭活的乙型副伤寒沙门氏菌免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合方法建立分泌抗体的杂交瘤细胞株.用包被沙门氏菌全菌和纯化的乙型副伤寒沙门氏菌LPS的间接ELISA法筛选杂交瘤细胞和鉴定抗体.其中3株杂交瘤细胞分泌的抗体初步判断为针对O4抗原的抗体,分别命名为1E12、2D5和4C2,这3株抗体与肠道正常细菌及常见的致病性细菌无交叉反应;单克隆抗体的免疫球蛋白类型分别为IgG1κ和IgMκ.获得的单克隆抗体具有较高的特异性,有可能用于B群沙门氏菌免疫学检测方法的建立.     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取脾细胞,与Ｓｐ２／０ 细胞融合,获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后,复苏生长良好,分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中,所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ     

抗小鼠雄性特异性抗原（H—Y抗原）单克隆抗体的研究

将经Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄鼠脾细胞免疫的同系雌鼠脾细胞与Ｂａｌｂ／ｃ小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０细胞进行融合,以雌、雄鼠脾细胞作细胞性ＥＬＩＳＡ、间接免疫荧光和精细胞间接免疫荧光技术进行筛选,共建立了５株稳定分泌抗Ｈ－Ｙ抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。该杂交瘤细胞可在Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ与Ｂａｌｂ／ｃ杂交子一代雌性小鼠腹腔生长并形成腹水性抗体。鉴定结果证明这些抗体具有较好的特异性。     

江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A2的免疫学研究

用江浙蝮蛇毒中纯化的中性磷脂酶Ａ２（ＮＰＬＡ２）免疫家兔，获得了多克隆抗体，抗体与抗原结合后，抑制了该抗原的神经毒性，而对其催化活力无影响，表明ＮＰＬＡ２有两个活性结构域，即神经毒性与催化活性分别位于两个活性位点上，利用免疫亲和层析纯化了ＮＰＬＡ２的多抗，经ＥＬＩＳＡ检测，与酸性ＰＬＡ２和碱性ＰＬＡ２均有免疫交叉反应，这提示了ＮＰＬＡ２与酸性ＰＬＡ２及碱性ＰＬＡ２的抗原决定簇有同源性。     

我国鸡白痢沙门氏菌病诊断与防治研究概况

鸡白痢沙门氏菌可感染各日龄、不同品种的鸡、其临床症状表现不尽相同、均严重影响鸡的生产性能．细菌学方法仍是不可或缺的诊断手段．随着血清学技术、PCR技术、快速检测试剂盒逐步应用于鸡白痢的检疫之后，对鸡白痢的防制巳跃上了一个新台阶，鸡白痢沙门氏菌的毒力质粒和耐药性研究，为药物、疫苗防治打开了新思路．减毒菌苗、灭活菌苗、脂多糖(LPS)抗原、卵黄抗体、活菌生物制剂、抗生素、磺胺药、中草药、有机酸等措施在鸡白痢的防治中发挥着重要作用。