Ⅰ型单纯疱疹病毒包膜糖蛋白L基因片段的克隆及高效表达

 采用PCR方法扩增HSV-1病毒型特异性包膜糖蛋白L(gL)基因片段并克隆至原核表达载体pGEX-5X-1获得重组质粒pGEX-5X-1-gL,将重组质粒转化E.coli BL21表达菌后经IPTG诱导表达目的蛋白.SDS-PAGE蛋白检测表明,在分子质量56 ku处有HSV-1 GST-gL融合蛋白的高效表达,通过IPTG浓度筛选和诱导前表达菌扩增培养时间的比较分析对诱导条件进行了优化,GST-gL融合蛋白表达量可达到菌体蛋白总量的48.65%.Western blot中利用HSV-1灭活病毒获得的多克隆抗体确证所表达蛋白为HSV-1病毒组分.这一表达系统的建立和优化对进一步探讨HSV-1 gL蛋白功能及其免疫原性提供了有利条件.     

2个由HSVI诱导的人成纤维细胞EST差异表达基因的SAGE分析

对单纯疱疹病毒Ⅰ型感染KMB-17细胞后的基因反应所克隆得到2个未知功能新基因片段HSP-5和HSP-7进行了初步探讨,运用电子SAGE分析和组织表达分析,表明HSP-5和HSP-7基因和肿瘤组织具有一定的相关性,且在KMB-17细胞刺激2h的细胞中的表达及癌组织中表达均大于对照细胞,显示出HSP-5和HSP-7与HSVI病毒刺激,以及肿瘤组织均有着一定的相互关系.     

与传染病抗争:疫苗的应用与发展

疫苗是目前人类可以彻底控制某一传染性疾病的唯一武器，预防接种不但保护了个体免受传染病病原体的侵袭，而且在群体中也限制了病原微生物的传播。可以说，疫苗的发明与使用，是人类文明的伟大成就之一。自200多年前牛痘疫苗的发明到今天数十种疫苗的广泛应用，就是一个人类认识并掌握使用生物技术的过程。在此过程中，疫苗经历了第一代的传统疫苗、第二代重组基因工程疫苗及第三代的核酸疫苗的发展，并已出现了以治疗为目的的治疗性疫苗。     

2个由HSVⅠ诱导的人成纤维细胞EST差异表达基因的SAGE分析

 对单纯疱疹病毒Ⅰ型感染KMB-17细胞后的基因反应所克隆得到2个未知功能新基因片段HSP-5和HSP-7进行了初步探讨,运用电子SAGE分析和组织表达分析,表明HSP-5和HSP-7基因和肿瘤组织具有一定的相关性,且在KMB-17细胞刺激2h的细胞中的表达及癌组织中表达均大于对照细胞,显示出HSP-5和HSP-7与HSVⅠ病毒刺激,以及肿瘤组织均有着一定的相互关系.     

一个由 HSV-1诱导的人成纤维细胞差异基因的电子克隆和特性分析

目的 :对单纯疱疹病毒1型感染KMB -17细胞后的早期基因反应进行研究。方法 :从HSV -1感染后细胞特异性cDNA文库中筛选出一个EST片段 (GeneBank登录号:Aw307599) ,NorthernBlot分析证实了该基因片段的病毒相关特异性 ,并采用生物信息学的方法进行基因的电子克隆。结果 :克隆出一个新的全基因序列HSP -5contig(GeneBank登录号 :AY142148)。结论 :HSP -5含有完整的ORF框架 ,cds全长456bp,编码156个氨基酸 ;对该基因及其编码蛋白序列的特征进行了分析和预测 ,初步推测了该基因和编码蛋白的结构特点。