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重组人源性抗HBsAg Fab抗体的特性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
通过噬菌体展示技术从含高滴度抗乙肝表面抗原(HBsAg)抗体的人外周血淋巴细胞获得抗HBsAg Fab抗体的轻、重链基因.将Fab的轻、重链基因分别整合到巴斯德毕赤酵母(Pichua pastons)GS115菌株的染色体上,成功构建了高效分泌表达抗HBsAg Fab抗体的酵母工程菌.对酵母表达的重组Fab抗体进行了纯化,并对其相对分子质量、糖基化以及抗原结合能力等特性进行了分析,结果显示重组酵母分泌表达的重组人源性抗HBsAg Fab是一个相对分子质量为50000左右的低糖基化糖蛋白,1mg重组Fab抗体相当于40u的抗乙肝表面抗原抗体(20U/mg).表明重组Fab抗体具有较强的结合HBsAg的能力. 相似文献
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钝顶螺旋藻对硒的富集和有机化作用 总被引:5,自引:1,他引:4
目的:研究钝顶螺旋藻(Spirulina platensis,S.P)对硒的富集和有机化作用,方法:培养其中添加无机硒亚硒酸钠培养S.P,2,3-二氨基萘(DAN)荧光分光光度法测定不同增殖期藻体含硒量。结果:①S.P生长的迟缓期富集硒较快,而在快速期则有机硒增量较明显;②在高浓度无机硒条件下培养,藻体的总硒、有机硒、有机化率均呈现下降趋势;③S.P对硒的生物有机化率在培养第3d时较低,第6d时较高;添加150mg.L^-1硒培养的富硒螺旋藻,第6d时硒主要与水溶性蛋白质结合,占65.5%。结论:S.P中总硒含量、有机硒含量、硒的有机化率及硒在藻体中的分布均呈现动态变化。 相似文献
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为了获得大量重组血管内皮生长因子(VEGF-A_(189))蛋白的可溶性表达,对重组VEGF-A_(189)工程菌进行发酵条件的优化并开展发酵研究.通过摇瓶培养进行可溶性发酵条件优化,在5 L发酵罐中发酵重组VEGF-A_(189)工程菌,将发酵产物经镍离子柱亲和层析纯化,并对发酵产物进行SDS-PAGE,Western Blot和ELISA等分析鉴定.结果表明,重组VEGF-A_(189)工程菌可溶性发酵条件为:37℃培养重组VEGF-A_(189)工程菌4 h,加入0.3 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)于28℃诱导表达4 h.在5 L发酵罐中按比例放大发酵,在补料发酵3.5 h后菌体密度(A_(600nm))达到8.0,调整发酵温度到28℃,IPTG诱导4 h后的菌体密度为13.72,菌体产量为40 g/L.镍离子柱亲合层析纯化后重组VEGF-A_(189)纯度达到90%以上,回收率大于80%,Western Blot、ELISA分析结果显示,重组VEGF-A_(189)蛋白和抗VEGF抗体有良好的结合活性.结果表明经过发酵条件优化后发酵可获得有免疫结合活性的可溶性重组VEGF-A_(189)蛋白. 相似文献
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以优选的合成抗原(H(ap)-BSA)免疫动物产生了滴度为1:55000(1号兔,Rt-1)的兔抗多克隆催化抗体.采用盐析和ProteinA-SephaxoseCL4B亲和层析法,从兔抗血清中分离出了具有电泳纯度的多克隆催化抗体.经SDS-PAGE检测,IgGs相对分子质量为148000.纯化后的多克隆抗体,经ELISA法测定,其最低检出活性为2×10(-6)~4×10(-6)g/L. 相似文献
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牛奶中过敏原组分的分离纯化及主要过敏原的鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:分离纯化并鉴定牛奶中引起过敏反应的主要致敏原组分,并分析其与组胺释放的关系.方法:等电点沉淀、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE-Sepharose离子交换层析等技术分离纯化牛奶过敏原组分.脱脂乳浸液免疫C57/BL6小鼠制备抗血清.Western-Blotting分析脱脂乳致敏原组分.间接ELISA检测抗血清中slgE和sIgG;同时荧光法检测各致敏组分体外诱发免疫小鼠腹腔肥大细胞组胺释放率.结果:分离纯化出酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白等致敏组分(纯度>90%).免疫印迹表明酪蛋白是主要致敏原组分.抗血清sIgG水平差异显著,sIgE水平没有大的变化;组胺释放率与sIgG水平是一致的,而与sIgE水平没有明显相关性.酪蛋白抗血清sIgG效价最高为1:25 600,组胺释放率高达(73.28±9.31)%.结论:牛奶中主要过敏原组分鉴定为酪蛋白,对牛奶过敏症的体外诊断治疗以及低/无过敏原配方奶的研制有一定的意义. 相似文献
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概述了SARS—CoV的S蛋白的结构及功能相关研究。严重急性呼吸综合症相关的冠状病毒(SARS-CoV)引起2003年我国南方非典型肺炎爆发流行,波及多个国家和地区。目前全球许多学对SARS-CoV进行了广泛的研究,发现S蛋白是病毒表面的主要蛋白,它构成冠状病毒科特征性的冠状样结构,在严重急性呼吸综合症的发病机制起着关键性作用,可介导表达相关受体的宿主细胞感染。现已鉴定出SARS-CoV的S蛋白相关受体,同时它在抗病毒感染中是一个关键靶蛋白。 相似文献
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氯霉素多克隆抗体的制备及特性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了建立快速检测氯霉素(CAP)的免疫学方法,采用重氮法、混合酸酐法与碳二亚胺法(EDC)法分别合成氯霉素完全抗原,并通过稳定性比较实验确定采用混合酸酐法合成的氯霉素卵清蛋白(CAP-OVA)免疫BMb/C小鼠,制备抗血清,采用EDC法制备的氯霉素牛血清白蛋白(CAP-BSA)作为检测抗原,用ELISA方法进行鉴定与特性分析.结果显示该多抗与常见抗生素的交叉反应率均小于0.01%,IC50为18.53 ng/mL,灵敏度达到0.53ng/mL,该抗体可用于氯霉素的快速检测. 相似文献
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五种赤潮藻单克隆抗体的制备 总被引:4,自引:1,他引:3
目的:建立分泌抗海洋褐胞藻(Chattonella marina)、卵圆褐胞藻(Chattonella ovata)、赤潮异弯藻(Heterosigma akashiwo)、具齿原甲藻(Prorocentrum dentatum)、尖刺拟菱形藻(Pseudonitzschia pungens)等5种藻的高特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株.方法:利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并通过反相间接血凝、间接酶联免疫吸附测定(ELISA)等方法筛选克隆阳性杂交瘤细胞株.结果:获得15CA7、23BG2和23BG9等3株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体与5种藻具有一定的特异性,但抗体的亲和力较低,仅与海洋褐胞藻具有较高的亲和力;而获得的M18杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可与以上除尖刺拟菱形藻外4种藻产生高效价的明显交叉反应。结论:获得了3株分泌对5种藻具有一定的特异性较低亲和力抗体;而M18细胞株分泌的单抗与除尖刺拟菱形藻外4种藻产生明显的高效价的交叉反应,显示此单抗可代替5种海洋藻的抗血清. 相似文献