HIV-1逆转录酶非核苷类抑制剂MKC分子结合位点的理论研究

1RT1蛋白是一个HIV-1逆转录酶核心蛋白,是抑制剂药物分子的作用靶点.非核苷类抑制剂MKC分子是1RT1蛋白中的配体分子.采用量子力学密度泛函理论,B3LYP计算方法,结合6-31G(d,P)基组,逐个计算MKC分子与其周围半径0.7 nm结构范围内的34个氨基酸残基相互作用和结合能,发现在1RT1蛋白中103Lys残基是MKC分子的结合作用位点,结合能值为-46.73 kJ·mol-1.该结合位点的发现将为进一步设计和寻找抗HIV-1逆转录酶抑制剂药物分子提供一些理论基础.     

重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因及其重组质粒构建

目的:利用重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因的全长序列.方法:对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠PCR法分别合成该基因的3个片段,测序鉴定后以酶切连接法将各段拼接成全长为1 443 bp的RV rE1,将E1基因的全长序列克隆导入原核表达载体pET32a.结果:分别进行8轮、5轮和6轮的重叠PCR扩增,合成风疹基因3个片段;以酶切连接法将3个片段拼接成全长rE1基因并克隆入pET32a构建成载体pET32-RV rE1,PCR、酶切和测序鉴定结果表明,合成的E1基因大小、序列与预期相符;构建获得重组质粒pET32-RV rE1.结论:成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因并构建其重组质粒pET32-RV rE1.     

转基因小麦T1代中外源基因的检测和分析

该研究采用Multiplex PCR和SDS-PAGE技术对转1 Dx5基因(ORF)T1代小麦进行了检测和分析.结果显示,Multiplex PCR能够扩增出转基因T1代材料中1 Dx2基因和1 Dx5基因的特征片段,表明外源基因已整合到受体基因组中;SDS-PAGE检测到一新的蛋白质亚基X,表明外源基因的插入引起了转基因T1代籽粒中HMW-GS组成的变化.该研究不仅验证了线性基因片段遗传转化策略的可行性,而且印证了普通小麦Glu-1D等位基因的多重PCR分子标记体系的有效性,为培育安全型的转基因作物新种质打下坚实的基础,加快小麦分子育种进程.     

罗汉果性别相关的RAPD标记

应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术寻找与罗汉果性别相关的分子标记,筛选了130个10 bp的随机引物,发现有4个引物(S60、S90、S100、S343)能在雌、雄株DNA间扩增出5条差异性片段,大小在300~1 300 bp之间,表明这些特异带可被用来作为性别鉴别的特异性分子遗传标记。     

等边浅蛤(Gomphina aequilatera)核糖体DNA第一内转录间隔区序列的特征分析

从浙江和福建沿海潮间带的6个采样点各随机选取2个等边浅蛤(Gomphina aequilatera)样品,以聚合酶链式反应、分子克隆和序列测定等分子生物学实验技术获得了ITS-1序列.通过比对发现,该序列内存在一个长度为17 bp的插入/缺失片段和一个结构为(GA)3(GGGA)2(GA)4~6的微卫星DNA,这2个结构是造成等边浅蛤ITS-1序列在个体基因组内及个体之间长度变化的主要原因.统计分析结果显示,该序列在个体基因组内的变异与相同采样点个体之间的变异无显著差异(P>0.05),而与不同采样点个体之间的变异差异显著(P<0.05),因此在种群水平的研究中是有效的分子标记.系统发生关系重建的结果和单倍型网络结构图均显示等边浅蛤的ITS-1序列各单倍型间的亲缘关系较近.     

重庆南川区道地药材玄参遗传多样性ISSR分析

本研究利用ISSR-PCR分子标记技术分析研究了重庆市南川区五个地方人工种植玄参的遗传多样性,利用7条UBC引物共扩增出了61条DNA片段,其中多态性片段为48条.片段长度约为250~2000bp,每条引物扩增出的DNA片段数为4~14条.同时采用NTSYSpc2.1软件计算出五个区域之间和区域内部子区域的玄参的Nei’s遗传距离,并用UPGMA法分别构建了系统树.结果表明五个地方人工种植玄参存在一定的遗传多态性,但其地方之间差异并不明显,其遗传多样性主要在同一地方内的子区域间被观察到.     

燕麦品种间杂交后代SSR遗传变异分析

采用SSR分子标记技术研究燕麦杂交后代与亲本之间在DNA分子水平上的遗传变异,为杂交亲本选配提供基因组水平理论依据。试验从50对SSR引物中筛选出11对多态性明显、重复性比较好的引物,共扩增出143个DNA片段,其中111个片段呈现多态性,占总扩增片段的63.3%;燕麦杂交后代与亲本的相似性系数范围为0.42~0.77。UPGMA聚类分析结果表明,SSR标记能将这14个杂交后代相互区分开,且品系Ⅱ比品系Ⅰ遗传变异较大。     

小麦taf1位点的连锁不平衡分析

利用遍布全基因组的21个SSR分子标记,对小麦雌性不育系XND126与1201、802、60个普通小麦品种(系)组成的三个品种(系)群体进行群体结构的评估,发现在三个群体中都存在群体结构.对消除群体结构后的三个亚群体中各标记的连锁不平衡值(linkage disequilibrium value)进行比较.结果表明,群体大小影响标记与雌性育性位点间的LD值.基于对小麦雌性育性taf1位点初步定位的信息.对2DS染色体上30个SSR分子标记的LD研究显示,Xgwm71、Xwmc25、Xgwm515、Xcfd36同样与原标记Xgdm35等具有较大的LD值,可能与taf1密切相关.获得这些较大LD值的标记(Xgwm71、Xwmc25等),为taf1位点的精细定位做出了充分的准备.     

青岛文昌鱼hedgehog及两个hedgehog-like片段的克隆

采用RT-PCR方法获得了青岛文昌鱼2497bp长的hedgehog基因片段,其所编码的氨基酸序列与多种生物hh基因家族成员的相应片段显示了较高的同源性.同时获得2个含有部分hedgehog基因片段的序列hedgehog-like-1和hedgehog-like-2,提示文昌鱼中发生hedgehog基因倍增过程和有多拷贝hh基因存在的可能性.为研究hh基因的分子进化提供了线索.     

杂环化合物的分子形貌的研究

杂环化合物广泛存在于自然界,与生物学有关的重要化合物多数为杂环化合物.使用MP2/6-311＋＋G（3df,3pd）优化呋喃、噁唑和异噁唑的几何结构,并计算了分子处于电子基态的第一电离能.使用MELD精密从头计算程序中的SDCI/3-21＋G^＊,并结合我们自编的分子形貌程序,研究了这些分子中1个电子所受到的作用势,探讨了化学键区域内的作用势的势垒Dpb大小与化学键强弱的关系,得出Dpb是可以用来表征化学键强弱的1个物理量.同时,描绘出了这些杂环化合物的分子形貌,探讨了杂环化合物中的杂原子对五元环上电子共轭效应的影响.     

用α—珠蛋白基因探针对两例Hb—Bart''''s胎儿双亲的α—基因的探测

采用限制性内切酶印迹杂交放射性自显影技术和α—珠蛋白基因探针分析了二例Hb—Bart's胎儿水肿综合征及其双亲的α—珠蛋白基因,其分析结果表明:Hb—Bart's胎儿水肿综合征没有α—基因;其双亲则以内切酶HindⅢ消化其DNA得到17、4.5、3.8kb α—基因特异片段,用内切酶Bgl Ⅱ消化则得12.3、7.2kb二个α—基因特异片段。其基因图谱与正常人相似,为正常人的一半。     

血小板反应素-1活性片段的克隆与表达

选择两段血小板反应素（TSP-1）中抑制血管再生的活性片段，设计两对引物，使用RT-PCR的方法从人血细胞中进行克隆并对获得片段进行测序验证．克隆片段大小分别为723和522bp，命名为聪P-1-1和聪P-1-2．利用原核表达载体pET-29a获得大肠杆菌重组子，重组子经过IPTG诱导以包涵体的形式表达相应的多肽片段．再对包涵体进行体外溶解、纯化，得到了目的多肽．     

Probing the Proteolysis of Melitin Using Liquid Secondary Ion Mass Spectrometry

ＰｒｏｂｉｎｇｔｈｅＰｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓｏｆＭｅｌｉｔｉｎＵｓｉｎｇＬｉｑｕｉｄＳｅｃｏｎｄａｒｙＩｏｎＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ＊ＷｕＹｉ＋（武轶），ＷａｎｇＪｉｎｇｚｕｎ（王敬尊），ＳｕｉＳｅｎｆａｎｇ＋（隋森芳）＊＋Ｄｅｐａｒｔｍｅ...     

中国人群DMD基因含外显子片段的限制性带型和RFLPs研究（Ⅰ）──BglⅡ片段的杂交带型及限制性片段长度多态的频率

采用ＤＭＤ基因的全长ＣＤＮＮ（４ｋｂ）为杂交探针，分析了中国人群ＤＭＤ基因含外显子片段（ｅｘｏｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｆｒａｇｍｅｎｔ）的ＢｇｌⅡ限制性片段和ＲＦＬＰｓ．新揭示出四个ＢｇｌＩＩ片段，ＤＭＤ基因全长范围内含外显子的ＢｇｌⅡ限制性片段总数至少为５９个，这为制作ＤＭＤ基因的ＢｇｌⅡ部分限制图奠定了重要基础；另分析了四个ＢｇｌⅡＲＦＬＰｓ在中国人群中的等位频率，在ｃＤＮＡ２ｂ－３、ｃＤＮＡ４－５ａ和ｃＤＮＡ５ｂ－７三个亚克隆探针的杂交带型中，杂合体频率预期值（ＥＨＦ）分别是０．３３、０．３３和０．４４，实际观察值为：０４０、０．４０、０．４８，表明有较高的临床应用价值．此外，在ＢｇｌⅡ／２ｂ－３和ＢｇｌⅡ／４－５ａ的带型中，还分别发现一个新的罕见等位片段．     

白屈菜碱对SGC-7901细胞Cdk1、cyclinB1表达影响

研究白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞Cdk1、p-Cdk1(Thr14)、cyclinB1蛋白表达,探讨白屈菜碱诱导人胃癌SGC-7901细胞G2/M期阻滞的机制.采用Western blotting法测定白屈菜碱对SGC-7901细胞Cdk1、p-Cdk1(Thr14)、cyclinB1蛋白表达的影响.不同质量浓度的白屈菜碱可显著下调人胃癌SGC-7901细胞内Cdk1与cyclinB1蛋白表达水平,同时显著上调p-Cdk1(Thr14)蛋白的表达水平,并呈一定的剂量依赖性.白屈菜碱可下调SGC-7901细胞内Cdk1和cyclinB1蛋白的表达,上调p-Cdk1(Thr14)蛋白的表达,这可能是白屈菜碱诱导SGC-7901细胞G2/M期阻滞的主要机制之一.     

煤基富勒烯的制备研究

以 1 4种国产煤为原料 ,用电弧等离子体蒸发法制备富勒烯 .富勒烯产品的表征采用质谱、紫外光谱、红外光谱及高压液相色谱技术 .考察了煤样的基础性质对富勒烯产率的影响 .结果表明 ,由实验所用煤种均可制得富勒烯 ;原料煤本身的化学结构和组成影响富勒烯的产率和分布 ;由某些煤得到的富勒烯中 ,C70 的含量较之以石墨电极为原料时的含量要高得多 .     

Neutral dissociation of methane in the ultra-fast laser pulse

Neutral fragments of methane were performed using femetosecond laser at an intensity of 10^（13-14） W/cm^2. A new mechanism of neutral dissociation is proposed in this work. The methane molecule is excited to super-excited states, in which it would dissociate into neutral fragments. We made Morse type potential energy surfaces for the super-excited molecules. Furthermore, we investigated the dissociation dynamics of the super-excited states by using quasi-claseical trajectory （QCT） method. The results thus interpret the neutral dissociation of the methane molecule in the ultra-fast laser pulse.     

大鸨的随机扩增多态DNA分析与种内亲缘关系研究

利用随机扩增多态DNA技术对大鸨(Otis tarda)6个个体进行了随机扩增多态DNA分析,共筛选出有效随机引物14条,利用所得的随机引物对每只大鸨的基因组DNA进行扩增,共得到327个扩增片段,其中共有片段150个,根据聚类分析所得到的树状图确定了6只大鸨的亲缘关系.     

苏云金芽孢杆菌猝倒亚种Cry1Aa13基因的克隆及序列分析

根据Gen Bank中Cry1A类基因序列设计一对特异性引物，以苏云金芽孢杆茵猝倒亚种质粒DNA为模板，应用PCR扩增技术得到一大小约为3．6kb的DNA片段(Cry1Aa13)．通过引物步行法测定该片段长3598bp，其中开放阅读框(ORF)长3540bp，编码1180个氨基酸，分子量为133．49kD，等电点pI=5．0．序列比较表明该基因与Cry1Aa类基因高度同源(达95％以上)，该基因已在GenBank中登录，登录号为AF510713，并被Btδ-内毒素基因国际命名委员会正式命名为Cry1Aa13。     

MST1的酵母双杂交及与Salvador体外结合的研究

利用酵母双杂交系统,以鼠M ST 1(M amm alian STE 20-1 ike 1)为诱饵蛋白,在鼠胚胎库中筛选到22个Salvador的片段。通过E.coli表达系统纯化了6个组氨酸(6H is)融合的M ST 1和谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合的Salvador,并做体外蛋白质结合实验,进一步证实了两蛋白质相互结合。通过体外激酶活性分析,发现M ST 1并不直接磷酸化Salvador,但是Salvador能够较强地抑制M ST 1对M BP(磷酸丁酯)的磷酸化,提示有可能Salvador通过影响M ST 1的激酶活性来参与了M ST 1介导的细胞凋亡途径。