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重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因及其重组质粒构建
引用本文:芦春斌,马贞丽.重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因及其重组质粒构建[J].暨南大学学报,2010,31(6).
作者姓名:芦春斌  马贞丽
基金项目:教育部留学回国人员科研启动基金项目,广东省科技计划项目,广东省科技计划项目国际合作项目
摘    要:目的:利用重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因的全长序列.方法:对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠PCR法分别合成该基因的3个片段,测序鉴定后以酶切连接法将各段拼接成全长为1 443 bp的RV rE1,将E1基因的全长序列克隆导入原核表达载体pET32a.结果:分别进行8轮、5轮和6轮的重叠PCR扩增,合成风疹基因3个片段;以酶切连接法将3个片段拼接成全长rE1基因并克隆入pET32a构建成载体pET32-RV rE1,PCR、酶切和测序鉴定结果表明,合成的E1基因大小、序列与预期相符;构建获得重组质粒pET32-RV rE1.结论:成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因并构建其重组质粒pET32-RV rE1.

关 键 词:风疹E1基因  重叠PCR  酶切连接  密码子优化

Synthesis of rubella virus E1 gene and construction of plasmid vector
LU Chun-bin,MA Zhen-Li.Synthesis of rubella virus E1 gene and construction of plasmid vector[J].Journal of Jinan University(Natural Science & Medicine Edition),2010,31(6).
Authors:LU Chun-bin  MA Zhen-Li
Abstract:
Keywords:
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