产核苷磷酸化酶大肠杆菌的培养及2‘—脱氧—5—氟尿苷的酶法…

研究了产核苷磷酸化酶大肠杆菌的摇瓶培养和发酵罐培养特征以及乙酸盐和底物诱导对核苷磷酸化酶活力的影响。结果表明：摇瓶培养时，延长菌体培养时间，菌体部分自溶时酶的转化率最高；发酵培养基中加入１０ｇ／Ｌ乙酸钠可使底物转化率提高７．７％，０．００１ｇ／Ｌ的底物ｄＵ诱导可使酶活力提高１１．０％；流加底物ｄＵ对酶反应转化率无显著影响，表明该酶促反应为非２＇－脱氧尿苷底物抑制型；反应过程存在扩散控制，酶反应的最     

应用大肠杆菌的核苷磷酸化酶合成胸苷

通过大肠杆菌核苷磷酸化酶的转脱氧核糖基作用，从胸腺嘧啶和２‘－脱氧核苷合成胸苷。优化了以ｄＵ为底物合成胸苷的反应条件。以３０ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＵ为底物其合成胸苷的转化率可达５．３％；以ｄＡ，ｄＣ，ｄＵ，ｄＧ的混合物为底物转化度为５２．６％；以ＤＮＡ降解后的２’－０脱氧核苷混合液作底物，反应液中胸苷浓度从９．２ｍｍｏｌ／Ｌ提高到１７．９ｍｍｏｌ／Ｌ。     

用大肠杆菌游离细胞酶法合成核苷药物

研究了采用大肠杆菌游离细胞核苷磷酸化酶合成核苷药物过程中反应平衡常数和底物转化率的计算方法及其变化规律，阐明了游离细胞内核苷磷酸化酶的活力与细胞的培养、菌体的预处理方式密切相关。实验结果表明，大肠杆菌湿菌体经４℃干燥处理２￣３ｄ后，胞内核苷磷酸化酶不易失活，并能有效地降低胞内抑制物对酶反应的抑制作用。与湿菌体相比，干燥菌体用于酶反应时底物的转化率可提高３３．５％。     

灵芝深层培养工艺的研究

为了提高发酵终了时灵芝菌丝浓度以获取高等真菌多糖，对灵芝ＡＳ．５．６５的深层培养工艺进行了研究。确定了最适发酵条件为：５％玉米淀粉、０．３％玉米浆、１％豆饼粉、０．６％糖蜜、０．１５％ＫＨ２ＰＯ４、０．０７５％ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ，ｐＨ５．５～６．０，温度２８℃，摇床转速１５０ｒ／ｍｉｎ，摇瓶种子培养３ｄ接种。接种量５％、装液量５０ｍＬ，培养５～６ｄ可终止发酵。最终菌体干重可达２７．５ｇ／Ｌ、含粗多糖２．６ｇ／Ｌ。     

高活力苯丙氨酸解氨酶菌株的筛选

本以４０株含苯丙氨酸解氨酶的酵母为出发菌株，用Ｌ－苯丙氨酸和肉桂酸为底物对苯丙氨酸解氨酶活进行双向测量筛选，得到了一株高活力苯丙氨酸解氨酶菌株１００１－２０－６Ｒ。在１％肉桂酸，７．４ｍｏｌ／Ｌ氨，ｐＨ１０．０，３０℃条件下反应４小时，肉桂酸转化率达５８．３％，其酶活为４９２ｕ／ｇ细胞干重。     

里氏木霉制备木聚糖酶的产酶历程

以玉米芯木聚糖为原料,里氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｓｅｉ）ＲｕｔＣ３０为菌种,采用改进的Ｍａｎｄｅｌｓ配方制备木聚糖酶,产酶历程与制备纤维素酶时有较大差异。具体表现在产酶周期短,ｐＨ值基本无下降的趋势,酶液中可溶性蛋白质浓度较低。底物浓度为７ｇ／Ｌ时,木聚糖酶活力达１２５６ＩＵ／ｍＬ,比活力、酶得率及酶产率分别为８１９０ＩＵ／ｍｇ蛋白质、１７９４３ＩＵ／ｇ木聚糖和４１８６．７ＩＵ／Ｌ·ｄ。产酶最终ｐＨ应控制在６～７较为适宜,酶活力最高。ｐＨ超过７．０,酶可能失活。酶解结果表明,木聚糖酶对木聚糖干粉具有很高的降解效率,当每克底物的酶用量为０．１克木聚糖干粉产的酶液量时,酶解得率一般可达９０％左右。     

酶法合成抗癌新药氟铁龙前体——5-FUR

筛选得到一株核苷磷酸化酶活力高的乙酰短杆菌,以该菌体为酶源酶法合成抗癌新氟铁龙前体5－氟尿苷,所用反应物为鸟苷和和5－氟尿嘧啶。在150mL的摇瓶装液15mL的条件下进行研究,结果显示：菌体添加量20－30g／L,底物浓度100mmol／L,磷酸盐浓度500mmol／L（pH8．0）,60℃,摇床转速160r/min,反应4h,5－氟尿苷的转化率可以达到60％以上。     

细胞转化法生产L—苹果酸的研究

报道普通变形杆菌细胞转化法生产Ｌ－苹果酸的研究,探讨菌体培养和转化反应条件等因素对菌体延胡索酸活性的影响、菌体酶的热性和ＰＨ稳定性。确定最佳工艺条件和酶的稳定性条件分别为：菌体培养时间７２ｈ,转化反应温３５℃,底物转化液ＰＨ７．０,转化反应时间３ｈ;温度≤３５℃,ｐＨ６．０－７．８,菌体经过１０批次转化反应后,其延胡索酸酶活性仍很稳定,酶活保存率达８７．０％。     

流加葡萄糖对L-天冬酰胺酶发酵的影响及其动力学特性

着重讨论了葡萄糖对Ｌ－天冬酰胺酶发酵过程的影响,并对其发酵动力学特性进行了分析。采用自动流加葡萄糖控制发酵ｐＨ的工艺,可使Ｌ－天冬酰胺酶活力达到６４ｕ／ｍｌ,比添加葡萄糖的摇瓶发酵提高了１４６％。流加葡萄糖控制ｐＨ的Ｌ－天冬酰胺酶发酵是生长相关的;维持２～５ｍｇ／ｍｌ和１．２～１．４ｍｇ／ｍｌ的葡萄糖浓度,可分别使比生长速率和比产酶速率达到０．８１／ｈ和１２００ｕ／ｇ．ｈ。     

粗淀粉原料谷氨酸发酵新工艺研究

本研究采用木薯粗淀粉原料，双酶法制糖，在过量生物素下添加青霉素的发酵工艺路线，以接种量８％、初糖浓度１００～１３０ｇ／Ｌ，在发酵的适当时间添加适量青霉素（约４ｕ／ｍｌ），发酵过程流加尿素溶液控制ｐＨ７．１～８．０范围，同时流加浓糖液，经４０小时摇瓶培养，结界谷氨酸生成量高达１０１．９ｇ／Ｌ，糖酸转化率５９．５３％。与传统的采用精淀粉控制生物素＂亚适量＂工艺相比，可大幅降低粮耗、降低成本，提高产酸１５～２０ｇ／Ｌ．     

γ-亚麻酸高产菌株的选育

以从土壤中筛选得到的被孢霉菌为出发菌，用紫外线诱变处理，筛选γ－亚麻酸高产变异株，用摇瓶发酵选出其最佳培养基配方。原出发菌株细胞干重２５．０ｇ／Ｌ，油脂含量９．５ｇ／Ｌ，γ－亚麻酸含量５．０％。选出的高产菌株在最佳条件下发酵，细胞干重５０．２ｇ／Ｌ，油脂含量２１．８ｇ／Ｌ，γ－亚麻酸含量８．５％。所得高产菌株具遗传稳定性。发酵油脂具优良特性，适用于保健食品及药品开发。     

添加纤维二糖,淀粉水解液对纤维素酶制备的影响

里氏木霉（ＴｒｉｃｈｄｅｒｍａｒｅｓｅｉＲｕｔＣ３０）以经蒸汽爆破预处理的玉米秆为底物制备纤维素酶,产酶ｐＨ值维持在５．０左右,底物浓度为３．７５％（玉米秆,干基）时,产酶３天,滤纸酶活力和纤维二糖酶活力达１．７６ＩＵ／ｍＬ和０．３８ＩＵ／ｍＬ,纤维二糖酶活力高,酶水解得率达８０．２％;在试验培养基中添加纤维二糖对纤维素酶的合成具有抑制作用,培养基中添加纤维二糖浓度在０．２５～１．５０ｇ／Ｌ时,滤纸酶活力和纤维二糖酶活力同时下降３０％～４０％;淀粉水解液对纤维毒酶合成的影响是由葡萄糖的抑制和复合糖的诱导共同作用的结果,在用本研究培养基制备纤维酶过程中添加淀粉水解液,从经济角度来说是不适宜的。     

棒曲霉UA—2木聚糖酶的蔗渣固态发酵

棒曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｃｌａｖａｔｕｓ）ＵＡ－２固态发酵蔗渣产木聚酶的培养基为每克蔗渣加营养液５ｍｌ，初始ｐＨ８．５．营养液的适宜组成为每升含：ＮＨ４ＮＯ３１０ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４６ｇ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．７５ｇ、ＣａＣｌ２０．７５ｇ、ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ１１．２５ｍｇ、ＭｎＳＯ４·Ｈ２Ｏ３．７５ｍｇ、ＺｎＳＯ４３．０ｍｇ、ＣｏＣｌ２４．５ｍｇ．在上述培养基中接入其湿重１０％（Ｗ／Ｗ）的新鲜的ＵＡ－２种子曲，２８℃培养１０８ｈ，其木聚糖酶，滤纸降解酶和羧甲基纤维素酶的活力分别为２６９５．６、２８．５和４２．７ｕ／ｇ蔗渣．酶反应的最适ｐＨ５．０，最适温度５０℃；在ｐＨ４．０～１１．０内酶活性十分稳定．５０℃保温１ｈ，酶活剩余５５％，８℃下放置２３ｄ，活力几乎不变．磷酸盐，半胱氨酸对酶有激活作用，ＥＤＴＡ和对氯汞本甲酸对酶有抑制作用     

克鲁维酵母y－85菊粉酶水解菊粉的研究及其中试

克鲁维酵母（Ｋｌｕｖｅｒｏｍｙｃｅｓｓｐ．）Ｙ－８５在菊粉提取液培养基中生长产菊粉酶，其细胞和胞外的菊粉酶活力分别约占菊粉酶总活力的７６％和２４％．试验中以酶发酵液作酶液．该酶的Ｓ／Ｉ值为１５．２．酶液在５０，５５和６０℃下保温１ｈ，活力分别残留１００％，９６％和６５％；在８℃下放置７ｄ，１４ｄ，酶活力分别残留９８％和９６％．在ｐＨ３．６～７．０内，酶活性十分稳定．５ｍｍｏｌＬ－半胱氨酸和Ｆｅ＋２分别可使酶活力提高１０．４％和４１．２％．ｙ－８５菊粉酶水解菊粉的适宜条件是：底物为总糖浓度１０％～１５％菊粉提取液，ｐＨ５．０，温度为５５℃，酶用量为底物每克糖加酶８００ｕ（以蔗糖为底物测酶活力）或２６．３ｕ（以菊糖为底物测酶活力）、搅拌酶解６ｈ．在上述条件上，底物降解率最高可达９８．５％．酶解液中，果糖占总还原糖量的８５％．用１１００Ｌ罐进行酶解中试，５批试验，底物降解率平均达９４．２％．     

嗜热芽孢杆菌β-半乳糖苷酶发酵条件研究

以嗜热芽孢杆菌为菌种,研究发酵生产β－半乳糖苷酶的条件。应用均匀设计法优化发酵培养基组成,结果为（ｇ／Ｌ）：乳糖０．５、蛋白胨２．０、牛肉浸膏２．０、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０１。在温度５５℃、初始ｐＨ７．０、摇床转速２００ｒ／ｍ ｉｎ 和１０％ 接种量条件下,发酵２４ｈ,β－半乳糖苷酶酶活力达１３．２Ｕ／ｍ Ｌ。在乳糖水解反应中,证实该酶能催化转半乳糖苷反应,合成半乳糖低聚糖。     

基因重组人Gamma-干扰素发酵和提取优化工艺的研究

对基因重组人Ｇａｍｍａ－干扰素（ｒＩＦＮ－γ）ＰＢＶ２２０ＤＨ５α工程菌株的发酵工艺进行了研究．结果表明,采用在２５０ｍＬ摇瓶中装液量为１５０ｍＬ,按照１∶４０的稀释比进行两次扩大培养,并在大肠杆菌生长最为活跃的对数生长期内进行诱导表达效果最好．收集菌体以后,将菌体进行冷冻和超声破碎,并在２．０ｍｏｌ／Ｌ脲中浸泡８ｈ～９ｈ以清洗杂蛋白,然后用７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍（Ｇｕ·ＨＣｌ）提取．在优化工艺条件下,ｒＩＦＮ－γ的收量为９．０×１０６ＩＵ／Ｌ～１２．８×１０６ＩＵ／Ｌ,总蛋白为７９．５ｍｇ／Ｌ～１２７．２ｍｇ／Ｌ,比活为５．６×１０５ＩＵ／ｍｇ～８．０×１０５ＩＵ／ｍｇ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳含量可达６０％～８０％,使ＰＢＶ２２０ＤＨ５α工程菌株获得了高效表达．     

黑曲霉AJ1958菊粉酶的产生和性质

从菊芋根际土壤中分离出一株菊粉酶（ＩｎｕｌｉｎａｓｅＥ．Ｃ．３．２．１．７）产生菌，经物理和化学诱变得高酶活黑曲霉突变株ＡＪ１９５８．该菌株在培养基（０．０７ｇ／ｍＬ菊芋提取液１０００ｍＬ，豆饼粉５ｇ，麸皮５ｇ，ＫＣＩ０．７ｇ，ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０１ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．５ｇ，ＰＨ５．０）中，于３０℃振荡培养３ｄ，酶活力可达６４μｍｏｌ·ｍｉｎ－１．酶水解反应的最适ＰＨ为３．０～４．０，最适温度为６０℃，在ＰＨ２．５～５．５的范围内和７５℃以下较稳定．适宜条件下，１０ｈ内０．０５ｇ／ｍＬ的菊粉溶液中之底物几乎１００％被酶水解．产物糖中果糖质量分数为９３％，葡萄糖质量分数为５．６％．该突变株产生的菊粉酶具有较满意的水解性和热稳定性．     

木聚糖降解菌的筛选和木聚糖酶性质的研究

筛选两株生长快、产木聚糖酶活力高的菌种；黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ，ＡＮ０１）、链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ｓｔｒ７Ｂ），酶活力分别达１２８ｍｇ／Ｌ·ｍｉｎ和１７６ｍｇ／Ｌ·ｍｉｎ；酶反应最适温度分别为６０℃与５０℃；最适ｐＨ值为５．０和６．０，并分别在ｐＨ２．２～５．０，５．８～６．４酶活性稳定；在６０℃条件下保温１．５ｈ，酶活力分别剩余２０．５％，８８．５％，其中ＡＮ０１株原酶液在９０℃保温１０ｍｉｎ，活力仍剩余１４．５％．Ｃｕ２＋对酶活表现出极强抑制，Ｆｅ２＋，Ｍｇ２＋，Ｃａ２＋等离子则有促进作用；用纸层析法探讨了不同培养时间各种产物产生的情况．     

根霉2#(Rhizopussp.2#)产酶条件研究

对影响根霉２＾＃（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐ．２）产生生淀粉分解酶的碳源、氮源、无机盐、温度、ｐＨ值等进行优化组合试验，摸索出了一个最佳的产酶条件，该条件为：木薯渣５％、花生麸０．７５％、尿素０．１％、Ｋ２ＨＰＯ４０．１％、ＭｇＳＯ４０．０７５％、ｐＨ值５．０、３２℃摇瓶培养９６ｈ。使用该条件可使得发酵酶液的酶活达到７．７５Ｕ／ｍＬ。     

衣康酸小试发酵条件研究

对衣康酸产生菌（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓＴｅｒｒｅｕｓＮＲＲＬ１９６０）在不同条件下的小试发酵进行了探讨。通过反复试验，确立了衣康酸最佳斜面培养基、发酵培养基和发酵条件。摇瓶培养７２ｈｒ后，残糖可降至０．１％Ａ右；产酸率平均为４８．６ｇ／Ｌ；对糖的转化率平均为５４．９％。