苯丙氨酸解氨酶菌株的选育及L─苯丙氨酸的合成

本文以粘红酵母ＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｇｌｕｔｉｎｉｓＡＳ２．１０２，１００１－２Ｏ－６Ｒ和深红酵母ＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｒｕｂｒａＡＳ２．２７９为出发菌株，经紫外诱变筛选得到一株苯丙氨酸解氨酶高活力菌株Ｒｈ．ｇｌｕｔｉｎｉｓＮＣ０６，其酶活力是亲株１００１－２０－６Ｒ的１．５倍。在最适转化条件下，肉桂酸转化率达５７．７％，每升转化液生成Ｌ－苯丙氨酸１１．５４克，另外对ＮＣ０６的生理特性进行了初步研究。     

固定化细胞合成L—苯丙氨酸的酶活及稳定性

研究了固定化酶ＰＡＬ合成Ｌ－苯丙氨酸过程中的酶活力与酶稳定性情况，找出了维持酶活的最佳保存条件，考察了不同氨基供体、肉桂酸、ｐＨ值及酶的不同固定化量等因素对酶反应过程的影响，确定其适宜反应条件为肉桂酸１．５％～２．０％，醋酸铵２～４ｍｏｌＬ－１，ｐＨ８．５～１０，温度３０℃，细胞固定化量为０．１ｇ湿细胞／ｇ固定化颗粒     

旱芹直播土壤人工种子及胚状体分化过程中的POD,PAL活性变化

旱芹无菌苗子叶为外植体，在ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ２．４－Ｄ＋０．５ｍｇ／ＬＫＴ上诱导产生愈伤组织，然后转入ＭＳ＋１．０ｍｇ／ＬＡＢＡ诱导产生胚状体后用于人工种子包埋，在有菌土壤１中获得了７％左右的转株率，当人工种子外面包裹一层酯类共聚物作外膜，并在人工胚乳中加入６％的麦芽糖和１％的活性炭后，使人工种子在有菌蛭石土中的转株率提高到５１％，还测定了芹菜胚状体分化过程中的苯丙氨酸解氨酸氨酶（ＰＡＬ）活性，     

L-苯丙氨酸生产中PAL酶活及产酸因素的研究

研究了诱导剂、表面活性剂及酶稳定剂对L-苯丙氨酸解氨酶 (PAL酶 )酶活的影响 ,考察了细胞量及反式肉桂酸的流加对产酸的影响。结果表明 :以 0.05 %L-苯丙氨酸为诱导剂可提高酶活 18.2%,以 0.005%溴化十六烷基吡啶为表面活性剂可提高酶活 12.4 %,PAL酶的稳定剂 2mol/L山梨醇与 0.1%戊二醛的组合可使酶活提高 94.5%。细胞量/肉桂酸比率α为3.6对产酸最有利 ,在第 3, 25 ,40h流加反式肉桂酸至浓度为 0.1mol/L ,可提高产酸浓度9.6%。实验发现野生菌株的产酸能力可达10.03g/L ,肉桂酸的转化率可达 60%。     

核酸P1酶产生菌选育及其生理生态学研究

采用改良的菌选育方法选育到一株高活性磷酸二酯酶产生菌。通过生理生态双向选择方法，确定了适合于该菌株产酶的优化条件．在营养因子筛选中发现一种廉价的产酶促进因子，添加该物质可使酶活提高２～４倍。在最佳工艺条件下，摇瓶酶活可达５００ｕ／ｍｌ，对该菌株进行了３０Ｌ发酵罐发酵试验，酶活达６４０ｕ／ｍｌ。     

植酸酶高活性菌株的选育及酶性质的初步研究

以本实验室筛选的一株米曲霉为出发菌株，通过紫外线诱变，并经过初筛、复筛等步骤而得到一株植酸酶高产菌株，酶活约提高１５６％，最高酶活达２４０Ｕ／ｍｌ粗酶液，７２ｈ左右达到产酶高峰期．植酸酶的最适温度为５６℃，最适ｐＨ为５．５；Ｆｅ２＋、Ｚｎ２＋、Ａｌ３＋对其酶活有强烈的抑制作用，而Ｍｇ２＋和ＥＤＴＡ在浓度为１ｍｍｏｌ／Ｌ时有激活作用     

酵母嗜杀质粒融合转移──Ⅰ．融合转移系统的建立

以嗜杀酵母ＥＲＲ１和啤酒生产酵母ＡＳ２４２０出发菌株，建立了供体菌ＭＫ２－３：Ｋ＋Ｒ＋Ｌｅｕ－ρ＋（ｎ）和受体菌ＡＳ２４２０－１：Ｋ－Ｒ－ｌｅｕ＋ρ°（２ｎ）．对原生质体制备再生条件的研究结果表明两株菌的原生质体制备条件不尽相同；同一菌株原生质体形成与再生的最佳条件也不相同．有利于融合再生的原生质体制备条件是ＭＫ２－３：菌龄３０ｈ，蜗牛酶解量３０ｇ／Ｌ酶解时间３０ｍｉｎ，此时原生质体形成率为８０％，而再生率达１７．１％，这些条件对嗜杀活性无影响，再生菌落的嗜杀活性率达１００％；而ＡＳ２４２０－１；菌龄２４ｈ，蜗牛酶量２０ｇ／Ｌ，酶解时间３０ｍｉｎ，原生质体形成率为８１％，再生率为１８．１％．对四种渗透压稳定剂的再生效果实验表明甘露醇效果最佳，氯化钾次之，考虑到廉价，氯化钾是很好的代用品，在３０％ＰＥＧ６０００及Ｃａ２＋条件下进行原生质体融合，融合率可达８．９×１０－６，对其中的融合子ＭＡＲ４的遗传性状及嗜杀活性的稳定性检测，ＤＮＡ含量及细胞大小测定，ｄｓＲＮＡ质粒的提取及电泳结果分析和发酵性能测定，结果表明融合子ＭＡＲ４具有较高的嗜杀活性并可以稳定遗传，有与供体菌ＭＫ２－３嗜杀质粒ｄｓＲＮＡ相同的电泳行为，     

胞外植酸酶高产酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到五株胞外植酸酶活性较高的酵母，选择酶活最高的１－１作为出发菌株，经单倍体分离、原生质体制备、紫外诱变，最后得到一株突变株Ｍｓｐ－２１２８，其胞外植酸酶活力为２３．０８Ｕ／ｍＬ，比出发菌株提高了８２％，且产酶稳定     

利用微生物转化丙烯腈生产丙烯酸的研究

从长期受工业污水污染的河水、污泥中分离到４７株能以丙烯腈或丙腈为唯一碳、氮源或氮源生长的菌株．经高压液相色谱（ＨＰＬＣ）测试发现有５株菌在以０．１５ｍｏｌ／Ｌ丙烯腈为底物的转化反应中，产物除丙烯酸外几乎无副产物．探索了菌株６－１３的基本培养特性及其酶促反应条件．在选定条件下．通过分批补加丙烯腈，连续反应４ｈ，反应液中累积丙烯酸０．５２６ｍｏｌ／Ｌ，未检出丙烯酰胺，丙烯腈转化率高于９６％，丙烯酸由红外光谱和质谱确证．     

胞外植酸酶产酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到五株胞外植酸酶活性较高的酵母，选择酶活最高的１－１作为出发菌株，经单倍体分离，原生质体制备，紫外诱变，最后得到一株突变株Ｍｓｐ－２１２８，其胞外植酸酶活力为２３．０８Ｕ／ｍｌ，比出发菌株提高了８２％，且产酶稳定。     

克鲁维酵母Y－85菊粉酶的研究

菊粉酶产生菌株─—克鲁维酵母Ｙ－８５在１５Ｌ罐中进行产酶发酵，培养２４ｈ，发酵液中菊粉酶的总活力可达１０３２ｕ／ｍｌ，其中胞壁酶活７６８ｕ／ｍｌ，占总酶活的７４％。用含半胱氨酸的缓冲液提取胞壁酶，酶的回收率达８８％，比活力可达１００８ｕ／ｍｇ．酶作用于菊糖的最适ｐＨ为４．５，最适温度为５０℃，在５０℃以下和ｐＨ４～８稳定，金属离子Ａｇ￣＋、Ｈｇ￣（２＋）对酶有强烈的抑制作用，ＰＣＭＢ对酶也有明显的抑制作用。该酶可水解菊糖，棉子糖和蔗糖等多种底物，能快速将菊芋抽提液中的菊糖水解成果糖，适合用于以菊芋为原料的高果糖浆生产。     

γ－亚麻酸产生菌及其发酵条件的研究

γ－亚麻酸（ＧＬＡ）是一种具有特殊生理活性的多不饱和脂肪酸，具有抗衰老作用，对糖尿病、高血压及多种皮肤病有一定疗效传统方法从月见草油中提取，产量受到限制．笔者从产脂的小型丝状真菌中筛选出两株能利用葡萄糖产生ＧＬＡ的Ｃ菌株和Ｇ菌株，它们分别产脂２５％～３５％、４５％－５５％，脂中含ＧＬＡ为６．４％～９．８％和４．４％～７．０％．     

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活…

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位的构象变化五活力变化的关系。酶于０．６ｍｏｌ／Ｌ Ｇｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２－２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数，也研究了酶的重折叠与复性的关系。     

γ-亚麻酸高产菌株的选育

以从土壤中筛选得到的被孢霉菌为出发菌，用紫外线诱变处理，筛选γ－亚麻酸高产变异株，用摇瓶发酵选出其最佳培养基配方。原出发菌株细胞干重２５．０ｇ／Ｌ，油脂含量９．５ｇ／Ｌ，γ－亚麻酸含量５．０％。选出的高产菌株在最佳条件下发酵，细胞干重５０．２ｇ／Ｌ，油脂含量２１．８ｇ／Ｌ，γ－亚麻酸含量８．５％。所得高产菌株具遗传稳定性。发酵油脂具优良特性，适用于保健食品及药品开发。     

茴香原生质体培养研究

以茴香（ＦｏｅｎｉｃｕｌｕｍｖｕｌｇａｒｅＬ．）幼苗茎切段在ＭＳ附近２，４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ、６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上诱导产生愈伤组织，经４～５次继代后形成胚性愈伤组织。将胚性愈伤组织转至ＭＳ＋ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．２５ｍｇ／Ｌ的液体培养基中培养，形成胚性细胞悬浮系。悬浮细胞在含有１．５％纤维素酶、１％果胶酶、０．５％蜗牛酶的混合酶液中酶解得到大量的原生质体，原生质体用修改的ＫＭ８Ｐ培养基中做液体浅层培养。２天后细胞发生一裂，两个月后形成０．５～１ｍｍ大小的小愈伤组织，转入含琼脂糖的固体培养基中３周后形成２～３ｍｍ的愈伤组织     

激光复合诱变黑曲霉原生质体选育热稳定菊粉酶高产菌

以菊粉酶产生菌黑曲霉ＡＳ－４原生质体为对象,经激光和亚硝基胍复合诱变,从大量突变株中最终选育出高产热稳定的菊粉酶产生菌ＡＬ－１５４．在以菊芋提取液为碳源、玉米浆加０．３％酵母膏为氮源的基本培养基中,菊粉酶活力达１４６．３ｕ／ｍＬ,比出发株提高近３倍．其产酶最适营养条件为：起始ｐＨ４．５～５．０,２８～３０℃,３６ｈ时产酶量达最高．酶作用最适条件为ｐＨ５．０,６０℃;该酶遗传性能稳定,热稳定性强,６０℃保温处理２ｈ,其酶活性不变,６５℃保温３０ｍｉｎ,仍保留９８％的初始酶活     

γ—亚麻酸产生及其发酵条件的研究

γ－亚麻酸是一种具有特殊生理活性的多不饱和脂肪酸，具有抗衰老作用，对糖尿病、高血压及多种皮肤病有一定疗效，传统方法从月中草油中提取，产量受到限制。笔者从产脂的小型丝状真菌中筛选出两株能利用葡萄糖产生的ＧＬＡ的Ｃ菌和Ｇ菌株，它们分别产脂２５％－３５％、４５％－５５％，脂中含ＧＬＡ为６．４％－９．８％和４．４％－７．０％。     

产植酸酶青霉菌株的诱变研究

对产植酸酶的青霉菌株Ａ２进行了诱变研究。分别以ＨＮＯ２－ＵＶ和ＵＶ－５Ｂｕ复合处理，进行了二轮诱变筛选后，得到高于Ａ２５０％以上的变异株６株，其中Ａ２－ＵＶ５９－２０株的酶活达０．８１２±０．０１９ｕ／ｍｌ，为出发菌株Ａ２的二倍多。     

聚苯乙烯载体亲和层析纯化尿激酶

聚苯乙烯经磺化后连接手臂６－氨基己酸，然后偶联配基对氨基苯甲脒，制成亲水性的亲和载体。载体的最适配基密度为每克湿载体３２μｍｏｌ，最适吸附条件为ｐＨ７．５、０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）。在ｐＨ４．０、０．１ｍｏｌ／Ｌ醋酸缓冲溶液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）中，采用０～１ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＳＣＮ梯度洗脱，可将比活８．３３μｍｏｌ·Ｓ－１·ｍｇ－１的粗酶纯化５０倍，收率大于５３％。     

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活力变化的关系

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位构象变化与活力变化的关系，酶于０．６ｍｏｌ／ＬＧｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２～２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数，也研究了酶的重折叠与复性的关系