聚丙烯酰胺凝胶电泳快速显色方法的研究

通过对聚丙烯酰胺凝胶电泳的固定方法、时间、染色液种类、染色方法及蛋白灵敏度的研究,确定了以10%三氯乙酸为固定液,室温固定10min的固定方法;染色液为：考马斯亮蓝G-250、95%乙醇和10%磷酸,染色时间为15min;蛋白质灵敏度与考马斯亮蓝R-250相当,达到0.1μg。     

考马斯亮蓝R-250显现血足迹的应用研究

目的研究考马斯亮蓝R-250显现潜血足迹所适用的常见客体。方法选择1O种常见客体，制作潜血足迹样本，用考马斯亮蓝R-250进行显现。结果浅色非渗透性客体的效果优于其他客体。结论考马斯亮蓝R-250可以很好的显出某些渗透性客体和非渗透性客体表面的潜血足迹。     

用考马斯亮蓝测定植物粗提液中可溶性蛋白质含量方法的研究

用木立芦荟的叶片为材料,以牛血清白蛋白为参照,对蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合后的光吸收稳定性,不同的蛋白质溶剂、植物粗提液等对光吸收的影响进行了研究。结果表明：蛋白质与考马斯亮蓝结合后,在595nm处的光吸收值不很稳定,通过降低仪器的灵敏度可以提高光吸收的稳定性；以0.02～0.5mol·L~(-1)pH为6.8的磷酸缓冲液、0.1～1.0mol·L~(-1)pH为6.8的Tris-HCI缓冲液为蛋白质溶剂,对蛋白质与考马斯亮蓝结合后的线性无影响；芦荟叶片粗提液中的其他成分对其中可溶性蛋白质与考马斯亮蓝结合后的线性亦无显著影响。     

考马斯亮蓝G-250染色法测定草乌中可溶性蛋白质含量

采用考马斯亮蓝G-250染色法对草乌药材中可溶性蛋白质含量进行了测定,建立了快速、灵敏的测定蛋白质的方法.结果表明,考马斯亮蓝G-250染色法简单、迅速,且相对较为准确,是测定低浓度蛋白质含量的有效方法.     

日本血吸虫尾蚴不同染色方法的比较研究

目的探索不同化学染色法对日本血吸虫尾蚴的染色效果,并对其形态结构进行分析,为血吸虫研究和教学提供参考。方法采用自然逸出法从阳性钉螺获取尾蚴,涂片法制作尾蚴玻片标本,分别采用苏木素-伊红(HE)染液、瑞氏-姬姆萨染液、尼氏(Nissl)染液、0.4%台盼蓝、考马斯亮蓝R-250染液、丽春红染液、0.1%茜素红染液、刚果红染液等化学染料进行染色,在光学显微镜下观察和评价尾蚴形态结构,比较各方法的染色效果。结果形态学测量的结果显示获取的尾蚴为成熟期尾蚴,8种染色方法均能使血吸虫尾蚴呈不同程度的着色,但在尾蚴形态结构显示上有相似性,亦有不同之处。HE染色、瑞氏-姬姆萨染色、台盼蓝和尼氏染色等对尾蚴头部和尾部结构均能较好显示。考马斯亮蓝和丽春红染色对尾蚴头部微细结构均显示欠佳,但考马斯亮蓝可显示尾部排泄管,丽春红可显示尾部部分结构。茜素红、刚果红染色效果类似,对头部和尾部结构均能部分显示。结论 HE染色能将尾蚴各部位器官显示清楚,对比明显,可在教学科研中广泛使用。其余染色方法应根据研究目的不同,选取不同的方法。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳——曙红Y染色法

十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳已广泛用于分子生物学和医学临床等领域,但该技术的染色方法多沿用考马斯亮蓝和银染色,这两种方法均有其局限性,如蛋白凝胶染色前须经酸或醛固定,不易洗脱且操作繁琐,脱色耗时等。而曙红Y染色具有检测灵敏度高,操作简便,染色时间短,可对各种蛋白质染色,染色后的蛋白质可直接进行电泳转移印迹,也可将凝胶中蛋白质电泳转移后染色。染色后的蛋白质仍具有抗原性。此外,还具有试剂便宜,使用安全,便于推广应用等优点。     

植物细胞骨架观察实验的改进与优化

从实验对象及其取材部位、抽提试剂的种类及其浓度、抽提时间、固定液种类等10个方面采用控制变量法对植物细胞骨架的显微观察方法进行了优化改进。结果表明:以蒜苗白色根茎部中段内表皮细胞代替传统的洋葱内表皮细胞为实验材料,使用1%Triton X-100作为抽提试剂抽提25 min去除杂蛋白,选用戊二醛作为固定液固定45 min,最后只需使用考马斯亮蓝R250染色10 min便能够观察到清晰的细胞骨架。此外,实验前将样本置于1 mol/L的甘露糖溶液中预处理浸泡5 min,细胞骨架的观察效果更佳。     

玉米超氧化物歧化酶(SOD)的分离及纯化

用硫酸铵分级沉淀、葡萄糖凝胶过滤及离子交换柱层析从玉米中分离纯化SOD,并采用考马斯亮蓝G-250法测蛋白含量,NBT光还原法测定SOD酶活性,得到酶比活力为115.522U/mg.Pr,回收率为1.02%,提纯倍数7.77的SOD.同时进行了蛋白染色、SOD酶活性染色及非变性凝胶电泳(PAGE)研究,得到了电泳均一的SOD酶.     

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量中的细节问题

蛋白质含量测定是生物学实验的一项重要内容。该文采用考马斯亮蓝法测定了植物中可溶性蛋白质含量,介绍了考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理、试剂、仪器设备和操作步骤,着重介绍了实验操作过程中应注意的细节,分享了本实验室积累的经验。实践表明,该实验使得蛋白质含量测定结果的准确性和稳定性大大提高,拓展了学生的专业知识,提高了学生的实验技能。     

考马斯亮蓝法快速测定乳品中蛋白质含量

采用考马斯亮蓝G-250染料染色法对市售乳品中蛋白质进行测定,在595 nm波长处测定溶液的吸光度。实验结果表明,标准蛋白质在10～80 μg/mL之间呈现良好的线性关系。该法简便快速、灵敏度高、重现性好,是测定乳品中蛋白质的有效方法。     

小PVDF膜转移蛋白印迹及其凝胶电泳玻璃板的改进

该文对蛋白印迹技术有关操作实验优化进行了报道,在蛋白印迹实验中,蛋白质样本经凝胶电泳后,根据检测目的蛋白质分子量的位置,该文利用小PVDF膜转移蛋白,考马斯亮蓝染色观察,发现小膜转移具有节约资源和方便操作的优点。此外,为了解决蛋白印迹实验中部分操作、表述和交流中的问题,该文在凝胶电泳玻璃板中央设计了纵横相交的标尺刻度。实践表明,此设计有利于完善与凝胶电泳相关的生物医学分析手段。     

两种染色方法对聚丙烯酰胺凝胶电泳回收蛋白的影响

以牛血清白蛋白(BSA)为材料进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),分别采用考马斯亮蓝(CBB)G-250染色和咪唑-Zn反染,用电洗脱仪回收.它们的灵敏度分别为500ng和5 ng;蛋白质回收率分别为37.9%和74.4%.     

光照对考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度影响的研究

通过考马斯亮蓝法测定在不同光照和孵育时间下对已知不同浓度的牛血清蛋白的影响.结果显示,在0~100μg/ml蛋白质浓度标准曲线测定范围内,黑暗环境测定蛋白质误差率最小.在黑暗和弱光条件下高浓度蛋白质组(50~75μg/ml)误差率最低显著低于低浓度蛋白质组(5~25μg/ml).在黑暗和弱光条件下浓度在50~75μg/ml范围内的蛋白质与染料孵育30 min以内时误差率较低且较稳定.因此,采用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度时,环境光照、待测样品浓度以及染料与蛋白质孵育时间等是决定实验结果准确性的重要因子.     

5-NO2-PAH光度法测定血清白蛋白的研究

血清中蛋白的测定在临床医学、生命科学的研究中都有着重要的意义.由于大多数蛋白质在可见区无吸收,可利用光谱探针进行测定,如考马斯亮蓝(CBBG-250)[1],茜素红S[2],硝基磺酚C[3],甲基橙[4]等.     

中华芦荟多酚氧化酶的分离纯化

采用丙酮粉沉淀抽滤法从中华芦荟中提取多酚氧化酶.提取的粗酶液经30%~80%硫酸铵分级沉淀,透析除盐,DEAE-Sephadex A-50阴离子交换柱层析,后经PEG 6000浓缩,得到纯化的多酚氧化酶,其纯化倍数为13.28.纯化后的酶液经SDS-PAGE电泳分析,采用考马斯亮蓝R-250染色显示为单一蛋白带,分子量约为54.1 KD.     

热疗后Hela细胞微丝和形态改变关系的研究

目的:用Hela细胞作模型,研究热疗后肿瘤细胞的微丝变化与其形态学上改变的关系。方法:用不同温度(37℃、40℃、43℃和45℃)经不同时间(1h和2h)水浴处理培养的Hela细胞后,倒置显微镜下观察其形态变化,并用考马斯亮蓝R250显示其微丝。结果:37℃和40℃处理后Hela细胞形态和微丝分布均正常;43℃、2h处理后开始有一定程度的形态改变,微丝分布较散乱,变短;45℃处理后有明显形态变化,微丝大多完全解聚成球状,分布极为紊乱。结论:高温引起的Hela细胞微丝的解聚可导致细胞的形态改变,两者之间有着极为密切的联系。     

几种鱼肌肉蛋白的电泳分析

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对鲤鱼、草鱼、白鲫鱼、鲢鱼、罗非鱼及鲨鱼的肌肉蛋白做鉴别分析．实验采用4种不同抽提液对肌浆蛋白和肌原纤维蛋白进行提取．肌肉蛋白经电泳后以银染色或考马斯亮蓝染色并对蛋白质图谱作对比分析．根据蛋白质条带的数量、迁移率及浓度等特点，得出各鱼种间的相似性及差异性．结果表明，以SDS-PAGE电泳法可实现对水产食品原料品种的初步鉴别．     

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量中的细节问题

蛋白质含量测定是生物学实验的一项重要内容。测定蛋白质含量的方法有很多种,其中实验室最常用的方法是考马斯亮蓝法。该方法的原理和实验步骤虽然简单,但实验过程中有很多技术细节相关教材和文献中并没有介绍,忽视任何一个细节都可能导致实验失败。该文以测定植物中可溶性蛋白质含量为例,介绍了考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理、试剂、仪器设备和操作步骤等,着重介绍了实验操作过程中应注意的细节问题,分享了实验室积累的经验,以提高学生的操作技能和实验成功率。     

浅析考马斯亮蓝R-250试剂在显现血潜痕迹中的运用

血迹，是命案现场中最常见的痕迹物证之一，也是命案侦查中极具价值的痕迹物证之一。通过对命案现场中血迹的勘验、分析和化验，不仅能够准确进行个体识别和人身认定，还能够判定犯毒人与被害人在现场的活动过程，确定案件性质，缩小侦查范围，判断作案工具，刻画犯罪分子人身形象，揭露伪装，寻找和确定杀人第一现场，考马斯亮蓝R-250属生物染色剂，对血液痕迹的染色，显现是利用考马斯壳蓝对蛋白质定量的测定快速，灵敏的特点，从而提高血潜痕迹提取质量的一种极为实用的方法。     

考马斯亮蓝法快速测定菜籽粕中可溶性蛋白质的含量

采用考马斯亮蓝G-250染色法对菜籽粕中可溶性蛋白质含量进行测定,在波长595 nm处测定其吸光度.实验表明,可溶性蛋白质含量在10~100μg/mL之间呈现良好的线性关系,通过此法测得菜籽粕中可溶性蛋白的平均含量为5.30%.方法简便快速、灵敏度高、重现性好,是测定菜籽粕中可溶性蛋白质的一种有效方法.