香水梨中多酚氧化酶的活性研究

以磷酸盐作为缓冲液。提取梨中多酚氧化酶的粗酶液。以邻苯二酚为底物。用分光光度法研究了多酚氧化酶作用的最适条件以及一些化学试剂对酶活性的影响．结果表明：香水梨中多酚氧化酶酶促反应的适宜温度为25℃,最适pH值为5．0。半胱氨酸、维生素C为较好的抑制剂,柠檬酸对多酚氧化酶的抑制作用随浓度不同而不同．     

磷酸盐缓冲液法提取茶叶多酚氧化酶的工艺研究

采用磷酸盐缓冲液提取法,研究了从茶鲜叶中提取多酚氧化酶的最佳工艺条件.结果表明,茶鲜叶多酚氧化酶提取的最佳工艺条件为pH 6.4,料液比(茶叶g∶缓冲液mL)为1∶1,离心转速为9000 r/min,离心时间35 min.     

超声辅助提取桑葚多酚及抗氧化活性分析

采用超声辅助提取技术从桑葚中提取多酚,通过正交设计方法分别考察溶剂浓度、料液比和超声时间3个因素对桑葚多酚提取效果的影响,以优化桑葚多酚的提取工艺.并通过DPPH自由基抗氧化试验、ABTS+自由基清除试验和铁离子还原力来评价桑葚多酚的抗氧化活性.结果表明,桑葚多酚的最适提取工艺条件为:超声时间70 min,浸提溶剂70%乙醇,料液比1∶30(g∶m L).在此条件下总酚提取率为4.014%.在抗氧化活性试验中发现,在一定浓度范围内随样品浓度的增加其抗氧化能力越强.大孔吸附树脂纯化前后桑葚多酚的铁离子还原力、DPPH和ABTS自由基清除能力IC50分别为0.730、0.682、0.586 mg/m L和0.4536、0.556、0.290 mg/m L.由此可知,纯化前后桑葚多酚均具有较强的自由基清除能力,且纯化后的桑葚多酚抗氧化能力比纯化前的强,这表明多酚是桑葚抗氧化活性的物质基础.     

木棉花超氧化物歧化酶分离工艺的研究

探究优化木棉花超氧化物歧化酶(SOD)的提取条件,建立木棉花SOD生产工艺.以木棉花花瓣为原料,采用正交实验优化超声波提取的技术参数,结合丙酮等电点沉淀和葡聚糖凝胶层析提取纯化SOD,经真空冷冻干燥获得SOD成品.超声波提取的最佳工艺为料液比1∶30,功率180 w,超声波处理总时间9 min,浸提时间8 h.沉淀杂蛋白条件为2 mol/L的HCl将粗提液调节至pH为5.0,提纯SOD条件为pH 4.0丙酮等电点沉淀法,纯化倍数达到5.59,经Sephadex G-75纯化,获得SOD成品,纯化倍数达到18.46.为木棉花SOD的规模化生产提供理论依据.     

从青霉菌丝体中提取核糖核酸的研究

文中研究了从青霉菌丝体中提取纯化核糖核酸的工艺条件。采用盐碱法破碎细胞,调抽提液 pH值至4.6以沉淀部分蛋白质,然后用中性蛋白酶AS1.398处理分级沉淀后的上清液,详细考察了蛋白酶用量、反应温度、初始pH值和反应时间对核酸纯度的影响。酶解液经截留相对分子质量为6.0×10⁴的超滤膜过滤后,核糖核酸的纯度和得率分别是72.1%和0.42%。     

影响金针菇多酚氧化酶活性因素研究

目的 从金针菇中提取多酚氧化酶,并对其特性进行研究.方法 采用分光光度法研究温度、pH、抑制剂对金针菇多酚氧化酶活力的影响.结果 以邻苯二酚为底物,金针菇多酚氧化酶(Polyphenoloxidase fromFlammulina velutipes,FVPPO)的酶促褐变产物在可见光波长295 nm处有最大吸收峰;在pH为5.0～6.0范围内酶活力较大;在20～40℃的范围内随着温度升高,酶活性逐渐增强;在40℃时PPO活性最强;抗坏血酸、柠檬酸、EDTA-2Na对金针菇多酚氧化酶的活性都有抑制作用,在同浓度下,对金针菇PPO活性的抑制效果次序为抗坏血酸>柠檬酸>EDTA-2Na.结论 金针菇多酚氧化酶的最适pH为6.0,最适温度为40℃,抗坏血酸对金针菇PPO活性的抑制作用最强.     

从山茶花花卉中提取多酚的方法和工艺研究

为了从山茶花卉中浸提并沉淀得多酚,采用单因素实验和正交实验(包括温度、时间、料液比、乙醇浓度等)得出最佳的浸提条件;然后采用金属离子沉淀方法从该浸提液中沉淀得到多酚物质,考察了金属离子、pH值、不同类型和浓度碱性溶液对沉淀率的影响.结果表明,1)浸提的最佳条件应为:浸提溶液为60％乙醇,浸提温度为80℃,浸提时间为20 min,浸提的料液比为1∶35;2)发现多种金属离子沉淀剂(Al3+、Fe3+、Zn2+、Mg2+、Ba2+和Ca2+)中Al3+的沉淀效果最好,且沉淀的最佳pH值为5.5,所得多酚的最终收率为7.1％,纯度为72.47％.研究认为上述方法提取的多酚纯度较好,下一步需扩展研究规模以指导生产应用.     

钙处理对金针菇采后4种氧化酶活性变化的影响

采用不同浓度的CaCl2溶液真空浸渗金针菇采后子实体,以蒸馏水和0.005 mo1/L的钙抑制剂EGTA处理为对照,探讨Ca2+处理对金针菇采后过氧化氢酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶的活性变化的影响.实验结果表明1)0.005、0.01、0.03、0.06和0 09mol/L的CaCl2处理能显著提高金针菇采后过氧化氢酶活性,显著抑制金针菇采后过氧化物酶、多酚氧化酶和抗坏血酸氧化酶的活性,其中尤以0.01、0.03和0.06 mo1/L的CaCl2处理效果较好;2)0.12和0.15mo1/L的CaCl2处理对金针菇采后4种氧化酶活性变化的影响与对照差异不显著;3)0.005mol/L的EGTA处理能显著抑制金针菇采后过氧化氢酶活性,刺激过氧化物酶、多酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶的酶活性变化.     

马尾松毛虫和荔蝽体内多酚氧化酶的初步研究

为了寻找不污染环境的“生物合理途径”新型杀虫剂，研究了马尾松毛虫和荔蝽体内的多酚氧化酶。发现马尾松毛虫幼虫的多酚氧化酶活力与虫龄大小成正相关。多来宝（ｅｔｏｆｅｎｐｒｏｘ）处理１００ｍｉｎ后，５龄幼虫的多酚氧化酶为正常虫体的３．６倍。荔蝽３龄若虫经乙醇处理１０ｍｉｎ后，多酚氧化酶活力为正常虫体的２．７倍；荔蝽３龄若虫经菟丝子（Ｃｕｓｃｕｔａｊａｐｏｎｉｃａ）和夹竹桃（Ｎｅｒｉｕｍｉｎｄｉｃｕｍ）的混合醇提液处理６０ｍｉｎ，多酚氧化酶活力为正常虫体的２．４倍、经乙醇单独处理荔蝽３龄若虫后多酚氧化酶活力为正常虫体的２．７倍。     

菜豆鲜荚中菜豆凝集素的提取与分离纯化工艺研究

以Bean Saint esprit a oeil rouge菜豆鲜荚为试验材料,优化了菜豆凝集素的提取和分离纯化工艺,研究了提取剂、料液比、p H值和提取时间对菜豆凝集素活性的影响,建立了硫酸铵分级沉淀、DEAE-52阴离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析的组合方法用于分离纯化菜豆凝集素。研究结果表明:以磷酸盐缓冲溶液为提取剂,料液比1∶25,p H值6~8,浸提时间8 h,菜豆植物凝集素的提取效果适宜。菜豆凝集素浸提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-52阴离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析,冷冻干燥后可获得纯度较高的菜豆凝集素。纯化的样品经非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳检测为单一条带,血凝法检测有血凝活性。     

Inhibitory Kinetics of p-Substituted Benzaldehydes on Polyphenol Oxidase from the Fifth Instar of Pieris Rapae L.

Polyphenol oxidase (PPO) is the enzyme responsible for enzymatic browning during the growth of insects. It is also involved in defense reactions and is related with immunities in insects. PPO, a metalloenzyme oxidase, catalyzes the oxidation of ο-diphenol to ο-quinone. The present paper de- scribes the effects of benzaldehyde and its p-substituted derivatives on the activity of PPO from the fifth instar of Pieris rapae L. PPO from the fifth instar of Pieris rapae L. was purified using ammonium sulfate fractionation and chromatography on Sephadex G-100. The enzyme kinetics was characterized using L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) as substrate. The results show that benzaldehyde, p- hydroxybenzaldehyde, p-chlorobenzaldehyde, and p-cyanobenzaldehyde can inhibit the PPO activity for the oxidation of L-DOPA. The inhibitor concentration leading to 50% activity lost, IC50, was esti- mated to be 5.90, 5.62, 2.83, and 2.91 mmol/L for the four tested inhibitors, respectively. Kinetic analy- ses show that the inhibitory effects of these compounds are reversible. Benzaldehyde, p- hydroxybenzaldehyde, and p-chlorobenzaldehyde are noncompetitive inhibitors while p-cyano- benzaldehyde is a mixed-type inhibitor. The inhibition constants were determined for all four inhibitors. p-chlorobenzaldehyde and p-cyanobenzaldehyde were more potent inhibitors than the other com- pounds. These results provide a basis for developing PPO inhibition-based pesticides.     

十二烷基硫酸铵对烟草多酚氧化酶的激活作用

本文对从新鲜烟叶中分离纯化了两种多酚氧化酶,分别命名为多酚氧化酶(PPO )和多酚氧化酶(PPO ),并对其活性做了深入研究,发现对大多数蛋白质有抑制作用的十二烷基硫酸钠(SDS)对其有激活作用。在SDS浓度为0.5mM的条件下,PPO 和PPO 的活性分别提高了50%和86%。在pH值为6.5,T=50℃时PPO 的活性达到最大,在此条件下加入SDS后PPO 的活性提高了29.6%。SDS与PPO 的物质的量比在1.2时,PPO 的活性达到最大。     

生物信息学法筛选催化茶黄素合成的天然多酚氧化酶

利用生物信息学方法从天然植物中筛选天然PPO酶源. 用PPO保守序列从Uniport中检索到529条植物源PPO,除去重复的和不完整的序列后,得到178条PPO序列. 用同源建模法,以甘薯PPO晶体结构（1BUG）为模板,构建各PPO的三维结构模型,经Procheck和Verify3D评价后,获得163个优质的PPO三维结构. 用TM-score(空间拓扑)和RMSD（结构叠合）对163个PPO与茶PPO（A6N8J4）的三维结构进行了相似性比较. 用Autodock Vina将 163个PPO与茶中四种主要儿茶素进行分子对接,根据酶与底物结合的亲和力（binding affinity）预测各PPO的活性,发现酶与底物的亲和力与酶的一级结构序列同源性和酶的三维结构的重叠度之间无直接关系. 从潜在的10种高PPO活性的植物材料中提取PPO、测定其茶黄素转化活性. 10种植物材料中均有PPO活性,其中沙梨和甘薯的PPO活性最高,且高于茶叶PPO活性. 甘薯资源极其丰富,可用于茶黄素的工业合成. 本研究表明,利用生物信息学法可以从大量酶的序列信息中成功筛选出高活性的酶,与传统的酶活性筛选法比,可大大提高筛选范围和效率.     

甘薯淀粉加工废水中生化成分回收的新方法研究

本研究在实验室前期研究的基础上,对甘薯生产淀粉的废水中各生化成分的分离回收方法和工艺进行了系统的研究、改进和优化,开发了一种甘薯可溶性生化成分分离回收的新方法,可简单地从甘薯废水中成功回收多酚氧化酶（PPO）、-淀粉酶、储藏蛋白和小分子物质。通过等电点沉淀（pH 3.8）分离PPO,超滤（10 kDa）浓缩和絮凝沉淀（0.1%海藻酸钠,pH 3.6）回收-淀粉酶,纳滤膜浓缩回收小分子物质,获得了PPO粗酶制剂、-淀粉酶粗酶制剂和小分子物质分离制备的最佳工艺。两种粗酶制剂经50%乙醇沉淀可获得纯化的PPO和-淀粉酶,上清液浓缩干燥获得甘薯储藏蛋白。利用该工艺,可从每公斤甘薯的水溶液中回收PPO 3.2 g（1.2105 U/g,回收率38.7%）,-淀粉酶 1.2 g（3.4107 U/g,回收率 97.5%）,储藏蛋白 13.6 g,小分子物质 7.2 g。本研究为提高甘薯的开发利用价值、资源综合开发利用和解决甘薯淀粉生产业对环境的污染提供了新的可行途径。     

富士苹果中多酚氧化酶活性的中心必需基团与抑制动力学

以源于苹果的多酚氧化酶(PPO)为对象,选取溴乙酸、乙酰丙酮、N-溴代琥珀酰亚胺、1,4-二硫代苏糖醇和对氯汞苯甲酸等具有相对专一性的氨基酸基团修饰剂,研究PPO的酶活性中心必需基团,并确定乙醇对PPO的抑制动力学特性.结果表明:富士苹果中的PPO蛋白结构中酶活性中心必需基团有组氨酸的咪唑基、精氨酸的胍基与色氨酸残基.抑制动力学实验表明:乙醇通过与PPO酶活中心基团的结合抑制PPO酶活性,其对PPO的半抑制浓度(IC50)为0.14mmol.L-1,抑制类型为可逆的竞争性抑制.     

黄花梨多酚氧化酶特性及防褐变处理

从黄花梨中提取多酚氧化酶,并对其特性进行研究.以邻苯二酚为底物采用分光光度法测定了不同pH值、温度、底物浓度、酶浓度及抑制剂对PPO活性影响.结果表明:黄花梨PPO具有同工酶.黄花梨PPO的最适pH值为6.0,最适温度为25℃,并在此基础上考察了抗坏血酸、柠檬酸、亚硫酸氢钠和L-半胱氨酸对PPO的褐变抑制效果.     

苯甲酸及其衍生物对菜青虫多酚氧化酶抑制作用

以菜青虫五龄虫为材料,分离提取多酚氧化酶,研究苯甲酸及其衍生物:p 羟基苯甲酸、p 氰基苯甲酸、p 环已基苯甲酸等对该酶催化L 多巴(L DOPA)氧化活力的影响.测定抑制作用的IC50分别为14.2、11.3、16.1和2.1mmol/L.研究了抑制剂作用的动力学,结果表明:苯甲酸和p 环已基苯甲酸对酶的抑制作用表现为非竞争性类型,其抑制常数分别为14.25和2.21mmol/L;p 羟基苯甲酸对酶的作用表现为竞争型抑制,抑制常数KI为7.21mmol/L;p 氰基苯甲酸对酶的作用表现为混合型抑制,抑制常数KI和KIS分别为14.31和27.34mmol/L.     

凡纳滨对虾病虾体内SOD和PPO同工酶表型的变化

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,显示了健康和患病毒性疾病的凡纳滨对虾(Litopenae-us vannamei)其复眼、肝脏、心脏、鳃和肌肉等5种组织的SOD和PPO同工酶酶谱,其中健康对虾体内的SOD和PPO在各组织中表达的同工酶酶带少,但组织特异性明显.SOD和PPO分别在心脏和肝脏中表达最强,各有3条酶带;复眼和肌肉中最弱,均只有1条酶带.感染病毒后,这两种同工酶的酶谱发生了明显变化,尤其在肝脏和心脏组织中变化显著,表现为病虾心脏中SOD和肝脏中PPO酶带缺失和染色变浅,即酶活性明显下降,而肝脏SOD和心脏中PPO酶活性却明显增强.     

营养液对油松生长初期酶活性影响的研究

以两年生油松为实验材料,分析研究了0.52g·L^-1,1.30g·L^-1,2.60g·L^-1 3种营养液处理及清水对照对油松生长初期酶活性的影响。结果表明：处理2可明显增加根和叶SOD酶活性以及根和茎PPO酶活性的水平;处理3可明显增加根SOD,PPO酶活性和叶PPO酶活性的水平;处理4可明显增加茎SOD酶活性的水平。总之,营养液处理可增大油松苗木体内SOD,PPO酶活性作用的整体水平。     

水杨酸对锦绣杜鹃叶片中PAL、PPO及POD活性的影响

用不同浓度的水杨酸（SA）处理锦绣杜鹃植株,分析不同的SA处理时间杜鹃叶片苯丙氨酸解氨酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）等主要防御酶活性的变化。结果表明：水杨酸处理杜鹃叶片可明显诱导PAL、PPO、POD等防御酶活性的提高,其中50～100μg／mL浓度的SA对诱导杜鹃PAL、PPO、POD酶的活性影响最为显著,但受SA诱导的影响各不同,主要是在对防御酶活性的提高和表达时间上存在着差异,其中PAL受SA诱导后,活性提高最大,持续时间最长。