牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶经氯仿－乙醇混合液处理，丙酮沉淀，凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等步骤提取和纯化．纯化酶在聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＰＡＧＥ）图谱上的两条蛋白染色带和活性染色带相互对应，在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈现单一区单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．此酶分子量为３４０００，亚基分予量为１７０００，在紫外区最大吸收值为２５８ｎｍ．该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２均敏感，在０～７５℃温度范围内对热稳定．纯化酶的比活性为７４６３Ｕ／ｍｇ，纯化１００９倍，酶的回收率为７９％．     

饭豆铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

饭豆种子粗提液中有６条Ｃｕ·Ｚｎ—ＳＯＤ活性谱带，经氯仿－乙醇混合液处理，硫酸铵盐析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析被分离，获得了两组ＳＯＤ同工酶组分（ＳＯＤ—１，ＳＯＤ—２）．它们在酶分子结构上可能存在一定差异．ＳＯＤ－１含与粗提液相对的、电泳迁移率较小的活性谱带，它在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）图谱上的活性染色带和蛋白染色带相互对在；在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳图谱上均呈现单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．该酶分子量为３１３００，亚基分子量为１６５００，等电点为４．２，在紫外区的吸收值为２６４．０ｎｍ．该必在０—７５℃范围内稳定．纯化的ＳＯＤ—１比活性为１７８９Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ—２比活性为２８４Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ活力回收率为３２％．     

B甸羧端去三肽（B28—B30）与去四肽（B27—B30）胰岛素的制备及去三肽 …

双突变的胰岛素原基因在Ｅ．ｃｏｌｉ温度诱导表达体系中直接高密度发酵表达，表达产物形成的包含体经变复性处理及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０纯化后，再由胰酶及羧肽酶Ｂ联合酶切，ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ Ｑ纯化，最终得到Ｂ链羧端去三肽胰岛素（Ｂ２８－Ｂ３０）（ＤＴＲＩ）和去四肽（Ｂ２７－Ｂ３０）（ＤＴＩ）胰岛素的纯品。应用悬滴气相扩散法在含丙酮的柠檬酸钠缓冲体系中培养出可供Ｘ射线衍射用ＤＴＲＩ单晶，空间群为Ｐ２１２     

用铜盐法纯化牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶（Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ），经溶血，ＣｕＣｌ２处理及离子交换柱层析等步骤被纯化到高度均一程度．纯化酶在聚丙烯酰胺梯度凝胶图谱上的活性染色带与蛋白染色带相对应，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现单一区带．元素分析表明该酶含有２个锌原子和多于２个的铜原子．分子量和亚基分子量分别为３３５００和１７８００．在紫外区酶有４个明显吸收峰，分别为２７４．６ｎｍ，２６６．２ｎｍ，２５８．８ｎｍ和２４５．４ｎｍ．该酶对热稳定，纯化后酶比活性为１４５２５ｕ／ｍｇ，活力回收率为４５％．本文对经ＣｕＣｌ２处理与氯仿－乙醇处理纯化的牛血Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ进行比较，结果表明，氯仿－乙醇对酶的某些性质有影响     

酵母菌Y—216SOD的提纯及其性质研究

用筛选的高产ＳＯＤ酵母Ｙ－２１６进行发酵培养，分离提纯出ＳＯＤ，并对其性质进行了初步的研究。确定了酵培养后的ＳＯＤ提取过程；甲苯破壁法裂解酵母Ｙ－２１６得ＳＯＤ粗提液，并通过ＤＥＡＥ－纤维素－３２柱层及超滤等方法，得纯化的超氧化物歧化酶，此酶部分等电点为４．５、最大紫外光吸收波长为２６０ｎｍ，耐热性较好，Ｍｎ６２＋可能是其金属辅基。     

大豆（G.max）胰蛋白酶抑制剂SBTi—A2新类型Ti^x的纯化及其…

用丙酮脱脂、稀酸处理、硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析等方法从大豆中分离纯化得一种新类型胰蛋白酶抑制剂Ｔｉ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉ＾ｘ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉ＾ｘ与已知的大豆蛋白酶抑制剂Ｔｉ＾ａ的相分对分子质量均为２１０００，且Ｎ－末端均为Ａｓｐ；亲和电泳分析显示Ｔｉ＾ｘ与Ｔｉ＾ａ；两者经ＣＮＢｒ裂解后电泳分析得到相同带型；纯化样品的氨基酸组成分析显示Ｔｉ＾ｘ比Ｔｉ＾ａ多了两个碱     

大豆（G．max）胰蛋白酶抑制剂SBTi－A_2新类型Ti~x的纯化及其性质研究

用丙酮脱脂、稀酸处理、硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析等方法从大豆（Ｇ．ｍａｘ）中分离纯化得一种新类型胰蛋白酶抑制剂Ｔｉｘ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉｘ与已知的大豆蛋白酶抑制剂Ｔｉａ的相对分子质量均为２１０００，且Ｎ－末端均为ＡｓＰ；亲和电泳分析显示Ｔｉｘ与Ｔｉａ均可与胰蛋白酶完全结合；ＢＡＥＥ法测定显示出Ｔｉｘ对胰蛋白酶活性的抑制略小于Ｔｉａ；两者经ＣＮＢｒ裂解后电泳分析得到相同带型；纯化样品的氨基酸组成分析显示Ｔｉｘ比Ｔｉａ多了两个碱性氨基酸，因而Ｔｉｘ带有更多的正电荷．研究结果初步证明Ｔｉｘ是Ｋｕｎｉｔｚ类型中一种新的胰蛋白酶抑制剂．     

大蒜鳞茎SOD的分离纯化

利用（ＮＨ４）２ＳＯ４分级沉淀，透析后经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析和ＤＥＡＥ－３２柱层析从大蒜鳞茎中分离并纯了ＳＯＤ，最大比活为９６ｕ／ｍｇ蛋白，最高纯化倍数为４８。     

黑曲霉胞外葡萄糖淀粉酶的纯化及特性

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ７２８）的粗酶液，经硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤脱盐，ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换柱层析和ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－１００凝胶层析纯化，经ＰＡＧＥ鉴定为一条带ＳＤＳ凝胶电泳测定分子量为７００００．金属离子Ｆｅ３＋对该酶有一定的抑制作用，该酶的等电点为３．７，最适ｐＨ为４，最适温度为６０℃．Ｅ２８０１％为１５．７２，Ｋｍ值为０．１１２×１０－３ｍ．     

解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质

通过ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅＰｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析等提纯步骤，对解脂假丝酵母胞外脂肪酶进行了纯化，得到了层析纯样品，比活提高２７．４倍，得率１１％．该酶反应最适温度为４０℃；最适ＰＨ为７．５；等电点约在ＰＨ４．５～５．０之间；８℃以下存放，酶活力损失较少，３０℃以上存放，酶活力有明显损失．金属离子Ｓｒ２＋，Ｂａ２＋，Ｚｎ２＋和Ｍｇ２＋对该酶的激活作用为Ｓｒ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｇ２＋．Ｃｕ２＋和Ｎａ＋对酶活性有抑制作用．ＮａＮ３对保持酶活性有重要作用．     

牛血超氧化物歧化酶(bovine superoxide dismutase)生产工艺研究

将红细胞连续分离、热变性以及超滤技术应用在牛血SOD生产制备中，使SOD生产成本大幅降低，实现牛血SOD生产工业化，实现表明，冷冻血球和新鲜血球在酶的收率、纯度以及比活等方面无明显差别；热变性、超滤、丙酮沉淀等各工艺步骤酶的活性以及收率基本稳定；通过重组SOD技术使失去铜锌离子失活的酶蛋白恢复酶的催化活性。     

互花米草（Spartina alterniflora L.）对重金属Cd胁迫的生理响应

以盐生植物互花米草幼苗为试材,研究了其抗氧化酶体系活性（超氧化物歧化酶,SOD;过氧化物酶,POX;过氧化氢酶,CAT）对不同浓度Cd胁迫的响应变化,并利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对SOD及CAT进行了同工酶分析.结果表明,抗氧化酶活性与Cd处理浓度关系密切,0.1-2.0 mmol/L Cd浓度范围内SOD活性显著增加;POX活性在Cd浓度较低时相对稳定,高浓度下降低显著;而CAT酶活性在Cd浓度较高时被诱导升高.SOD同工酶谱受到Cd胁迫的显著影响,4.0 mmol/L处理下酶活性明显降低.CAT同工酶活性呈现先降后升的变化趋势,与酶总活性的检测结果基本一致.表明互花米草对重金属Cd具有一定程度的耐受性,可以通过提高酶促过氧化体系活性来应答Cd导致的氧化胁迫;而Cd浓度超过一定阈值后（4.0 mmol/L）,互花米草即遭受较严重的不可逆损伤.     

大蒜SOD的分离纯化及其低温胁迫下的酶活性

在低温条件下用CaCl₂浸种处理蒜瓣，通过“热击法”、“等电点法”、“丙酮分级沉淀法”的串联使用分离纯化SOD，并运用邻苯三酚的自氧化法测SOD的酶活性，研究钙对低温条件下大蒜SOD酶活性的影响.结果表明：上述3种方法串联能够有效地纯化超氧化物歧化酶，且其纯化程度比使用单一方法高.在低温胁迫条件下，钙离子浸种处理过的大蒜SOD酶活性下降的程度较未经处理的轻.说明钙离子对低温胁迫条件下的大蒜SOD酶活性有一定的保护作用，能够提高其抗冷性.     

芥篮叶超氧化物歧化酶的分离提纯

本文建立硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100层析,DEAE 纤维素(DE-52)拄层析方法从芥篮(B.alboglabra Baileg)叶肉中提纯超氧化物歧化酶,纯化倍数45.2,比活力97.3u/mg-pr(肾上腺素测定).南 DEAE-DE52层折获得的 SOD 活性部分,按 Weber与 Osborn 法作 SDS-PAGE,呈现单一斑带,分子量为13,000.此酶对热稳定性不高,70℃保温90min,活力全部丧失.纯酶液的最大吸收波长为204nm,芥篮叶中有四种 SOD同工酶.     

猪血超氧化物歧化酶纯化与分析─—一种铜盐沉淀新工艺

本文建立铜盐沉淀、选择热变性、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—１００层析方法从猪血中提纯超氧化物歧化酶，纯化倍数１８６．５．该酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈一蛋白带．纯酶的比活性为９３２５ｕ／ｍｇ—ｐｒ（邻苯三酚—３２５法）．通过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ法测出分子量为３００００．该酶对热稳定，纯酶液的最大吸收波长为２６０ｕｍ．     

猪血超氧化物歧化酶纯化与分析─—一种铜盐沉淀新工艺

本文建立铜盐沉淀、选择热变性、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—１００层析方法从猪血中提纯超氧化物歧化酶，纯化倍数１８６．５．该酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈一蛋白带．纯酶的比活性为９３２５ｕ／ｍｇ—ｐｒ（邻苯三酚—３２５法）．通过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ法测出分子量为３００００．该酶对热稳定，纯酶液的最大吸收波长为２６０ｕｍ．     

槲皮素对运动训练大鼠肝组织自由基代谢及运动能力影响实验研究

通过对大鼠在安静状态、非力竭运动状态及力竭运动状态下肝组织中总超氧化物歧化酶(T—SOD)、铜锌超氧化物歧化酶(CuZn—SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的测定，分析了槲皮素对运动训练大鼠肝组织自由基代谢及运动能力的影响．结果表明，槲皮素对运动训练大鼠肝组织产生的自由基具有清除效果和保护作用，可减少运动后因脂质过氧化产生的内源性自由基对机体的损伤，保护细胞膜的完整性，从而增强抗氧化酶活力．提高大鼠运动能力．     

钝顶螺旋藻分离纯化SOD的中试生产

以钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）干粉为实验原料，经过超滤、两步盐析、DEAE离子交换色谱柱层析和SuperdexTM200凝胶过滤柱层析，逐步纯化超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）。结果表明，在90 L粗藻液的中试放大体系中，所得酶液的平均比活力为4 131 U/mg，纯化倍数为238.96，回收率为8.3%。进一步利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）实验，确定所得的SOD蛋白质分子质量约为18.4 ku。此外，3次重复实验获得的SOD酶活力均大于4 000 U/mg。     

PEG-磷酸盐双水相体系纯化Cu.Zn-SOD研究

利用聚乙二醇（PEG）与磷酸盐的合理配比组成的双水相体系能够使猪血超氧化物歧化酶（SOD）粗酶得到进一步纯化,研究结果表明,6％PEG-6000与24％磷酸盐（pH7,0）组成的双水相体系一次成相萃取,使猪血SOD粗酶的纯度提高3-5倍,活力回收70～95％,而且发现SOD在PEG／磷酸盐双水相体系中的分配行为有一定规律,使用双水相处理粗酶能有效、快速、大量使样品达到一定纯度．     

TB过敏蛋白对小鼠体内几种酶活性的影响

研究了注射苦荞麦过敏蛋白TB前后小鼠体内的几种酶活性变化.以小鼠的心脏、肝脏、肾脏为实验材料,对其体内的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及同工酶进行分析.测活结果显示:注射TB过敏蛋白后小鼠心脏和肝脏中SOD、POD、CAT的活性明显提高,而肾脏中几种酶活性均有所下降.电泳结果表明:SOD、POD的同工酶谱均发生了变化,谱带的酶活性不同程度的增加或减弱.