短时盐胁迫对盐芥和拟南芥抗氧化物酶的影响

本文测定了24h盐胁迫下盐芥(6周)和拟南芥(3周)中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性,分析了盐胁迫下3种抗氧化物酶在两种植物中的响应特征.结果表明,拟南芥叶片中3种酶活性的变化特征为随盐处理浓度增加,SOD呈逐渐上升趋势,CAT呈逐渐下降趋势,POD活性上升幅度较大,且在200mM NaCl处理条件下,SOD和POD活性达到最大;盐芥根中的SOD、POD、CAT本底活性皆高于叶片.随着盐处理浓度增加,SOD活性基本无变化,叶片中的POD活性逐渐降低,CAT活性逐渐增加.而根中的POD活性却出现递增、CAT为先增加后降低现象.盐芥中的SOD本底含量水平高于拟南芥.     

芦荟超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化研究

采用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析和DEAE-52柱层析,分离纯化了芦荟(A.vera L.)超氧化物歧化酶,纯化倍数为56倍,回收率为54%,比活力为643(U/mgpro),酶的最适pH值为8.2,最适温度在40~55℃,KCN和H2O2能抑制酶活性。实验表明:芦荟中的SOD属Cu、Zn-SOD。     

低温胁迫对高山离子芥试管苗渗透调节物质及保护酶系的影响

本研究以高山离子芥试管苗为材料,研究了渗透调节物质和保护酶系对其低温胁迫的响应机制.结果表明:渗透调节物质脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白分别以各自不同的响应方式在冷冻胁迫下增强高山离子芥的抗寒性.保护酶系中,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)在减轻低温胁迫下高山离子芥试管苗膜脂过氧化伤害作用中协同互补作用;过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化酶(APX)在低温胁迫下高山离子芥试管苗清除过氧化氢机制中发挥主要作用,且CAT对低温胁迫的响应强度远高于APX,说明保护酶系在抵制低温胁迫和保护高山离子芥免受低温伤害方面具有重要的生物学功能.     

四种邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性方法的比较

邻苯三酚自氧化法(420nm法)与邻苯三酚/DTT终止法测定SOD酶活力,结果基本一致,其转换系数(CC)为1.03;改进的邻苯三酚自氧化法(325nm法)、微量邻苯三酚/Vc终止法测定SOD酶活力与420nm法差别较大,其转换系数分别为2.51、5.51.在测定SOD酶活力时,可根据不同的测定方法采用转换系数进行校正;实验表明:终止剂维生素C(Vc)和二硫苏糖醇(DTT)对SOD酶活力的测定无影响;325nm法与Vc法灵敏度较高,可用于SOD活力较低的样品.     

鲍鱼内脏β-葡萄糖苷酶中试规模制备研究

采用胶体磨匀浆、高速管式离心、陶瓷复合膜过滤、超滤、DEAE-琼脂糖离子交换层析和CM-琼脂糖离子交换层析的中试制备工艺,从鲍鱼内脏中分离纯化得到β-葡萄糖苷酶.研究发现:胶体磨匀浆所得匀浆液总酶活为12 174.21 U,比活力为0.158 U·mg~(-1);高速管式离心两次后得到粗酶液,酶比活力为0.247 U·mg~(-1);陶瓷复合膜过滤后所得清液的酶比活力为0.133 U·mg~(-1);超滤浓缩脱盐后所得浓缩液的酶比活力为0.249U·mg~(-1);DEAE-琼脂糖阴离子交换层析洗脱缓冲液的最佳pH值为7.5,CM-琼脂糖阳离子交换层析洗脱缓冲液的最佳pH值为6.0;DEAE-琼脂糖阴离子交换层析后收集酶活性组分的酶比活力为0.492 U·mg~(-1),CM-琼脂糖阳离子交换层析收集酶活性组分的酶比活力为1.709 U·mg~(-1),纯化倍数为10.78,收率为5.0%.     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶分离纯化研究

对产白地表茅孢杆菌(B.licheniformis)的碱性蛋白酶通过乙醇沉淀、盐析、DEAE阴离子交换层析,凝胶层析4步纯化.以酶比活力为指标,对碱性蛋白酶分离纯化条件进行了优化.结果发现:提纯酶的比活力达62098U/mg,纯化倍数为23.7,活性回收率为15.7%.     

鄂尔多斯高原碱湖钝顶螺旋藻SOD的纯化与性质研究

以鄂尔多斯高原碱湖特有的钝顶螺旋藻为材料,经超声破碎、硫酸铵分步盐析、离子交换层析及凝胶过滤,纯化得到SOD酶,经PAGE检测为1条带,所得酶液平均比活为2078U/mg,(总活力)回收率为19.9%.对SOD酶的PAGE电泳条带进行活性染色,亮斑清晰整齐; H2O2处理对照显示该酶活性明显受到抑制,KCN处理对照显示酶活性不受影响,初步判断为Fe-SOD; 又经金属元素分析,确认为Fe-SOD.经SDS-PAGE测定,亚基相对分子量为20kD,经PG-PAGE测定,全酶分子量为54kD,据分子量推断全酶应为三聚体分子.该酶在紫外区275.5nm有最大光吸收.在磷酸缓冲液中酶活力的最适pH为8.1,最适温度为25℃; 酶活性的pH稳定范围为5～10,40℃以上酶活力开始明显下降.酶在室温下存放9d后活力仍保持不变.     

Cu2+、Zn2+对罗氏沼虾鳃中SOD同工酶影响

采用生态学单因子梯度试验方法,研究了水环境中添加0.01mg/L,0.08mg/L,O.64mg/L,5.12mg/L的Cu2+,Zn2+对罗氏沼虾鳃中超氧化物歧化酶(SOD)同工酶活力和酶谱的影响.结果显示:随着Cu2+,Zn2+浓度的增加鳃中SOD酶活力均呈先增加后减少的变化趋势,分别在O.64 mg/L Cu2+和O.08 mg/L Zn2+时SOD酶活力达到最大(73.57±O.12 U/mg和53.63±0.17 U/mg),且均与对照组有显著差异(P相似文献   

花(鱼骨)血清免疫酶活力对水温耐受性的研究

通过控制暂养水体温度,测定花(鱼骨)对温度的耐受性,以及在不同水温条件下,抗氧化酶(SOD和CAT)和水解酶(ACP和AKP)的变化.结果表明:花(鱼骨)的生存温度和适宜温度较广,其生存温度为4～32℃,适宜温度为8～24℃.水温胁迫对SOD酶活力影响显著,SOD酶活力随水温升高而不断增强,而对CAT酶活力无显著影响.血清AKP活性随着温度的不断升高呈现出先升后降的变化,而血清ACP活性随水温升高也呈现出明显的上升趋势.     

苯酚污染对蚯蚓抗氧化酶系活性及同工酶组分的影响

采用滤纸接触法,研究了不同质量浓度、不同时间苯酚污染胁迫对赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性及同工酶组分的影响,为研究酚类化合物对土壤污染的生物学诊断和风险评价提供科学依据.结果表明,苯酚对蚯蚓SOD、POD和CAT活性及同工酶组分具有显著的影响,不同质量浓度苯酚可显著提高蚯蚓CAT活力,改变蚯蚓SOD、POD同工酶组分,低质量浓度苯酚可提高蚯蚓SOD和POD活力,高质量浓度则会降低其活力.     

用柱色谱纯化牛红血球超氧化物歧化酶

比较了几种初步纯化超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的方法,并进行了优化组合。研究了用软基质阴离子交换柱（ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ）和凝胶柱（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ）分离纯化ＳＯＤ的工艺条件。利用建立的方法纯化了来自牛血的超氧化物歧化酶,整个工艺过程总活性回收率为６５％,比活为５４２９Ｕ／ｍｇ,纯化倍数提高至６１倍。     

猪肝胆绿素还原酶的纯化及某些性质的研究

通过高速离心(105,000×g),硫酸铵分级分离、NADP—agaxose层析和SephadexG—100层析,从猪肝的胞浆中分离获得胆绿素还原酶.经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,该酶达到均一程度,分子量约为47,000道尔顿.酶被纯化4200倍,回收率为38%.这种酶利用NADPH和NADH作为电子供体,对巯基试剂特别敏感.如DTNB、NEM、pCMB及IDA等,都能不同程度地抑制该酶的活性.由HgCl_2处理,该酶活性的抑制是不可逆的.该酶用NADPH或NADH作电子供体时的最适pH分别是pH7.4和pH7.0.     

蚯蚓钙调素结合蛋白的研究

以赤子爱胜蚓(Eisenia Foetida)为材料,通过DEAE-Fast Flow离子交换层析、CaM-Sepharose亲和层析,分离纯化得到蚯蚓钙调素结合蛋白(CaMBPs)。纯化的CaMBPs对CaM激活的环核苷酸磷酸二酯酶活性有抑制作用,而且这种抑制作用可通过加入过量的CaM达到完全恢复。SDS-PAGE显示CaMBPs有3条明显主带,在EGTA存在时表现分子量分别为62, 49和30kD。紫外扫描测定含量分别为7.17%,7.31%和51.8%。用生物素-CaM覆盖法检测到3种CaM结合蛋白,与SDS-PAGE结果一致。酶活性测定实验表明在蚯蚓CaMBPs中有Ca²⁺-ATPase活性,但无NAD激酶活性。     

硫酸软骨素酶的分离纯化及部分性质

通过细胞破碎、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose FF和Sephacryl S-200柱层析，首次从粘质沙雷氏菌中提取出硫酸软骨素酶.纯化倍数11.46,比活为81.23 U/mg蛋白.提取液经PAGE和SDS-PAGE检测，呈现一条带.该酶相对分子质量为71.2 KD,亚基分子质量为35 KD,该酶为2个相同亚基组成.等电点为7.19，最适pH值7.5，最适温度为40 ℃，以4-硫酸软骨素为底物测得Km值为3.98×10^-4 mol/L.     

Phaseolus lunatus Linn vel aff的种子中A型血专一性凝集素的研究

用亲和层析法从Phaseolus lunatus Linn vel aff的种子中纯化出一种对人类A型血专一的凝集素.该凝集素的粗浸提液都只对A型血细胞凝集,而对B、O型绝不凝集.当纯化的凝集素浓度为0.98μg/mL时,即能凝集A型血细胞,GalNAc、对硝基苯酚-β-D-吡喃半乳糖苷能抑制其凝集作用;酚—硫酸法测得凝集素含有3.8％的中性糖;该凝集素是一个促有丝分裂原,其细胞转化为67.9％;它的分子量为56500,有两种亚基,分子量分别为17200和14600.凝集素分子中亮氨酸和缬氨酸含量较高,分别为9.83和9.64,而酸性氨基酸含量远比碱性氨基酸为高.     

野花生豆凝集素半胱氨酸残基的研究

将野花生豆经浸取、硫酸铵分级沉淀、猪胃粘蛋白-Sepharose4B亲和层析和SephacrylS-200HR分子筛层析后,可得到对人类A型血专一凝集的野花生豆凝集素（Crotalaria mucronata Lectin,CML),纯化的CML在PAGE和SDS-PAGE中均显示单一蛋白带,在含8mol/L,脲和不含脲的缓冲体系中,分别用NEM修饰CML中的半胱氨酸残基,经计算被修饰巯基数目分别为3.1个和3.2个,且修饰后的CML的活性仍不丧失,通过NR/R单向SDS-PAGE和NR/R双向对角线SDS-PAGE研究,发现CML不含二硫键,表明CML中的半胱氨酸残基既与CML的凝集活性无关,也不形成稳定蛋白质结构的二硫键。     

对生玉米5-氨基酮戊酸脱水酶的简单快速纯化

以聚乙二醇６０００分级沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ,ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析和制备电泳初步纯化了对生玉米的５－氨基酮戊酸脱水酶,它在ｐＨ８．５时比活为３１Ｕ／ｍｇ蛋白,酶纯化了１１２倍,得率为１２％,其亚基分子量为４１ＫＤ,它可以用于酶促合成胆色素原,也可用于联合法测定胆色素原脱氨酶的酶活     

北京鸭红细胞超氧化物歧化酶—分离纯化和性质

采用氯仿—乙醇分级分离,丙酮沉淀以及DE-32纤维素柱层析的方法,从北京鸭红细胞中分离得到纯的铜锌超氧化物歧化酶(Cu·Zn-SOD)。4升鸭血红细胞的SOD制品总活力为375,400u,比活力为13,410u/mg蛋白,回收率为64％。 铜锌超氧化物歧化酶制品呈淡蓝绿色,最大紫外吸收波长为258nm。测得该酶分子量为32,000,亚基分子量为16,000。该酶亚基由150个氨基酸残基组成,不含色氨酸,并测得它的N—末端氨基酸为丙氨酸。     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.