饭豆铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

饭豆种子粗提液中有６条Ｃｕ·Ｚｎ—ＳＯＤ活性谱带，经氯仿－乙醇混合液处理，硫酸铵盐析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析被分离，获得了两组ＳＯＤ同工酶组分（ＳＯＤ—１，ＳＯＤ—２）．它们在酶分子结构上可能存在一定差异．ＳＯＤ－１含与粗提液相对的、电泳迁移率较小的活性谱带，它在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）图谱上的活性染色带和蛋白染色带相互对在；在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳图谱上均呈现单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．该酶分子量为３１３００，亚基分子量为１６５００，等电点为４．２，在紫外区的吸收值为２６４．０ｎｍ．该必在０—７５℃范围内稳定．纯化的ＳＯＤ—１比活性为１７８９Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ—２比活性为２８４Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ活力回收率为３２％．     

短裙竹荪子实体酸提水溶性多糖的研究：Dd—2DE的分离纯化和？…

短裙竹荪（Ｄｉｃｔｙｏｐｈｏｒａ ｄｕｐｌｉｃａｔａ）子实体干品的３％三氯乙酸提取液经乙醇分级、ＤＥＡＥ－纤维素等进一步纯化得到水溶性多糖Ｄｄ－２ＤＥ．经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，Ｄｄ－２ＤＥ为均一级份。纸层件和气相层析表明，Ｄ－葡萄糖、Ｄ－半乳糖、Ｄ－甘露糖、Ｌ－岩灌糖和Ｄ－木糖为多糖的组份，其单糖尔比为０．４７：１．７２：１．００：０．１８：０．２１．Ｄｄ－２Ｄ     

非小细胞肺癌CD44v6,VEGF与C—erbB—2和nm23基因蛋白 …

应用链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶（ＳＰ）法染色技术测定６５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织标本的ＣＤ４４ｖ６、ＶＥＧＦ、Ｃ－ｅｒｂＢ－２和ｎｍ２３基因蛋白的表达水平。显示ＣＤ４４ｖ６、ＶＥＧＦ、Ｃ－ｅｒｂＢ－２及ｎｍ２３在ＮＳＣＬＣ组织中表达的阳性率分别为６６．２％、７８．５％、６３．１％及７３．８％,均显著高于癌旁组织;上述四项指标阳性率与ＮＳＣＬＣ的病理类型无明显关系;区域性淋巴结转移组ＣＤ     

用铜盐法纯化牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶（Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ），经溶血，ＣｕＣｌ２处理及离子交换柱层析等步骤被纯化到高度均一程度．纯化酶在聚丙烯酰胺梯度凝胶图谱上的活性染色带与蛋白染色带相对应，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现单一区带．元素分析表明该酶含有２个锌原子和多于２个的铜原子．分子量和亚基分子量分别为３３５００和１７８００．在紫外区酶有４个明显吸收峰，分别为２７４．６ｎｍ，２６６．２ｎｍ，２５８．８ｎｍ和２４５．４ｎｍ．该酶对热稳定，纯化后酶比活性为１４５２５ｕ／ｍｇ，活力回收率为４５％．本文对经ＣｕＣｌ２处理与氯仿－乙醇处理纯化的牛血Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ进行比较，结果表明，氯仿－乙醇对酶的某些性质有影响     

人免疫缺陷病毒2型（HIV—2）穿膜蛋白基因片段克隆表达

以人免疫缺陷病毒２（ＨＩＶ－２）的原病毒基因组为模板,通过套式ＰＣＲ扩增得到了ＨＩＶ２的一段特异性膜抗原蛋白基因片段;随后将此片段克隆入诱导表达载体ｐＧＥＸ－５Ｘ－１,获得了重组表达质粒ｐＧＥＸ３６－ＥＮＶ．ＩＰＴＧ对重组表达菌株诱导后,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示重组菌株有特异性表达蛋白带产生。     

双核铜（I）配合物与二氧的反应性

两种Ｎ,Ｎ,Ｎ＇,Ｎ＇－四（２＇－苯并咪唑甲基）－１,４－二乙氨基乙二醚（ＥＧＴＢ）铜（Ｉ）双核配合物［Ｃｕ＿２（ＥＧＴＢ］Ｘ＿２（Ｘ＝Ｃｌ￣－ＢＦ￣－＿４）已合成．电子光谱和荧光发射谱表明它们可与分子氧结合,氧合－脱氧循环可重复多次;ＣＶ法测得配合物氧化还原电势,表明ＣＵ（Ⅱ）配合物（氧化型）有超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性,定性检测还表明氧化型有过氧化氢酶（ＣＡＴ）性质,能分解Ｈ＿２Ｏ＿２放出Ｏ＿２气．首次发现和证明了同一配体不同氧化态配合物分别具有载氧、ＳＯＤ及ＣＡＴ活性．     

N-2,4-二羟基苯甲醛氨基葡萄糖希夫碱配合物对O_2~和DNA的作用

采用比色法、荧光和吸收光谱法研究了Ｎ－２，４－二羟基苯甲醛氨基葡萄糖希夫碱（ＤＧ）的铜（Ⅱ）、锌（Ⅱ）、钴（Ⅲ）、铁（Ⅲ）配合物（ＭＤＧ）对超氧阴离子自由基和ＤＮＡ的作用．结果表明：ＣｕＤＧ，ＦｅＤＧ和ＣｏＤＧ能显著抑制超氧离子自由基的生成，抑制能力ＣｕＤＧ＞ＦｅＤＧ＞ＣｏＤＧ＞ＺｎＤＧ．此外，配合物ＣｕＤＧ和ＣｏＤＧ可与ＤＮＡ有效结合，结合常数（Ｋ。）值分别为３．０３×１０４ｍｏｌ－１·Ｌ和１．０８×１０６ｍｏｌ－１·Ｌ，每１００个核苷酸的片段可提供结合位置数分别是１．７和０．６．     

基因工程菌E.Coli2426／pMN表达产物的纯化

用基因工程菌Ｅ．Ｃｏｌｉ２４２６／ｐＭＮ高效表达了麦芽糖结合蛋白—人神经生长因子（β）融合蛋白，菌体经超声波破碎后，上清液经Ａｍｙｌｏｓｅ亲和柱一步即可获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯蛋白质，回收率为１０％左右，按标准分子量计，该融合蛋白（５５ＫＤａ）确是麦芽糖结合蛋白（４２ＫＤａ）与人神经生长因子（β）（１３ＫＤ）的络合物     

粉被虫草菌丝体多糖的分离纯化及其性质

粉被虫草菌丝体经沸水浸提，醇析，透析，Ｓｅｖａｇｅ法脱蛋白，再经ＤＥＡＥ－纤维素和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－１００柱层析纯化，得菌丝体纯多糖ｐｓ１和ｐｓ２．高效液相色谱（ＨＰＬＣ）检测ｐｓ１和ｐｓ２的为单一物质，凝胶过滤法测得ｐｓ１和ｐｓ２的分子量分别为２４０００和１３０００Ｄａｌ，气相色谱分析表明ｐｓ１的单糖组分有Ｄ－甘露糖，Ｄ－葡萄糖和Ｄ－半乳糖，ｐｓ２的单糖组分有Ｄ－甘露糖和Ｄ－葡萄糖，ＩＲ分析     

中国鲎血蓝蛋白研究

应用超离心和柱层析结合聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）及电镜技术，研究中国鲎血蓝蛋白的结构特点．结果表明，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００纯化的血蓝蛋白在ＰＡＧＥ电泳中出现４条带．纯化的血蓝蛋白再经ＤＥＡＥ－３２纤维素柱层析得到５个洗脱峰，每个峰在ＰＡＧＥ电泳下可分辨出４条带．在电镜下，血蓝蛋白分子出现环形、五角形、十字形和蝴蝶结形等构型并与其他解离的中间的构型同时存在．     

扁豆几丁质酶基因的克隆及表达

以扁豆总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增到长度为885 bp的扁豆几丁质酶基因cDNA,其编码294个氨基酸,目的蛋白的分子量为28.429 kDa.以该基因构建pET-21a-chi表达载体并在E.coli BL21(DE3)中表达.30℃下,用0.1 mmol.L-1IPTG,诱导5 h,表达产物的酶活力为36.25 U.mL-1.通过常压Sephadex G-50凝胶过滤色谱,DEAE-650C常压与高效离子交换色谱对表达产物进行纯化.目标蛋白达到电泳纯(SDS电泳一条带),几丁质酶的比活力108.42 U.mg-1.表达的蛋白质产物主要以可溶性形式存在.     

中国白兔IL-6基因的分子克隆及其表达研究

运用RT-PCR技术对用ConA刺激的中国白兔外周血淋巴细胞(PMBCr)进行了扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定.结果中国白兔IL-6基因全长726 bp,编码242个氨基酸,其中前26个氨基酸残基构成信号肽序列.与不同物种IL-6基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异.在推导的中国白兔IL-6氨基酸序列中,在108-110位存在1个潜在的N-联糖基化位点,同时存在9个Cys残基.将pTIL-6双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中构建了重组质粒pETIL-6,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行了诱导.结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为29.5kDa的重组目的蛋白.经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的16.2%.     

梅花鹿抗病毒蛋白的生物信息学分析

通过在线生物软件分析梅花鹿四种抗病毒蛋白A3Z2、BST-2A、BST-2B和SAMHD1蛋白的生物信息学特性。从转录组中获得四种蛋白的基因序列,应用Prot Param、Protscale、SOPMA、TMHMM、Target P、Signal P、Motif Scan、Interproscan以及BLAST等在线软件分析蛋白的理化性质、二级结构、穿膜域、结构域等等。首次获得了四种抗病毒因子的基因和蛋白序列,梅花鹿A3Z2基因编码393个氨基酸,相对分子质量为47.59 k Da,碱性,不稳定性亲水蛋白,无信号肽和跨膜结构域,胞内定位,具有糖基化和磷酸化位点,两个胞嘧啶脱氨酶结构域。梅花鹿BST-2A和2B基因编码159个氨基酸,相对分子质量为17.69 k Da和18.12 k Da,酸性,不稳定性亲水蛋白,无信号肽,BST-2A有两个跨膜结构域,BST-2B有一个跨膜结构域,膜定位,具有糖基化和磷酸化位点。梅花鹿SAMHD1基因编码613个氨基酸,相对分子质量为70.51 k Da,碱性,不稳定性亲水蛋白,无信号肽和跨膜结构域,胞内定位,具有磷酸化位点,d NTP磷酸水解酶活性结构域。梅花鹿A3Z2、BST-2A、BST-2B和SAMHD1蛋白具有潜在的抗病毒能力。     

拟松材线虫两个HSP基因的克隆与分析

采用RACE(快速扩增cDNA末端)技术从拟松材线虫中克隆了HSP70蛋白编码基因mc2和HSP90蛋白编码基因mc19,两个基因的全长cDNA分别为2 067和1 222 bp。生物信息学分析结果表明：mc2基因的ORF为1 926 bp,推测的编码蛋白包含642个氨基酸,分子质量为170.85 ku,等电点为4.69。mc19基因的ORF为1 083 bp,推测的编码蛋白包含361个氨基酸,分子质量为97.70 ku,等电点为4.83。多序列比对和系统进化树结果分析都表明,拟松材线虫的mc2、mc19基因的编码蛋白与植物寄生线虫HSP70和HSP90蛋白具有较高的同源性,拟松材线虫和松材线虫之间的亲缘关系尤其密切。     

β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

利用PCR方法从一株短小芽孢杆菌H9克隆了编码葡聚糖内切酶的基因（该序列已经被已收录于GeneBank,登录号为EF620915）,序列分析表明该基因读码框为1980bp,编码659个氨基酸。预测的酶由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,第二个结构域为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成。将基因构建在大肠杆菌表达载体pET20b中得到重组质粒pET20b-EglA,将重组载体转化至大肠菌株BL21(DE3)菌株,基因在大肠杆菌中得到了良好的分泌表达, SDS-电泳图谱表明酶的分子大小约为73KD。     

中国多年生野生大豆Glycine亚属rbcS基因的结构和系统发生的研究

用PCR法从我国多年生野生大豆Glycine亚属的烟豆 (GlycinetabacinaBenth .)和多毛豆 (短绒野大豆GlycinetomentellaHayata)的总DNA中扩增到Rubisco小亚基基因 (rbcS) ,2个基因的顺序分析结果表明它们包含了 5 37bp长的编码区 ,其编码的 178肽的Rubisco小亚基前体由 5 5个氨基酸组成的前导肽和 12 3个氨基酸组成的成熟肽组成 .基因内有 2个内含子 .比较Glycine亚属内烟豆和多毛豆之间的rbcS间碱基同源性为94 5 % ,差别主要存在于内含子中 ;Soja亚属的G .soja和G .max之间该基因同源性高达 99 7% ,而Glycine亚属和Soja两亚属之间rbcS同源性则为 84 8% .从这 2个亚属内 4个种的rbcS成熟肽 12 3个氨基酸顺序可知 ,同一亚属内 2个种之间仅有 2～ 3个氨基酸不同 ,而Glycine亚属和Soja亚属之间差异增大至 5～ 6个氨基酸 .系统进化树分析也表明Glycine亚属与Soja亚属在进化过程中分离较早 ,这从分子水平上为大豆属的分类研究提供了科学的依据 .     

Molecular cloning of a full-length cDNA for ECBP21 from Angelica dahurica

ECBP21 is an extracellular calmodulin-binding protein which was first detected and purified from extracellular extracts of suspension-cultured cells of Angelica dahurica. The purified protein was electroblotted onto PVDF membrane and the amino acid sequences from 1 to 20 were determined. Using degenerate oligonucleotides of the sequence, a full-length cDNA coding for ECBP21 was isolated by a combination of RT-PCR and 5′-RACE cloning. The cDNA contains 947 nucleotides and codes for a precursor protein of 216 amino acids. The N-terminal 1-25 amino acid sequence is a predicted signal peptide and the other 26-216 amino acid sequence is a mature peptide. The 26-45 amino acid sequence shows identity with the N-terminal amino acid sequence of purified ECBP21 from Angelica dahurica. The fragment of encoding the mature protein was cloned into pET-28b(+) and transformed into E. coli BL21(DE3). A protein with relative molecular mass 21 ku was expressed in E. coli. Using a biotinylated-CaM gel overlay technique, the expression protein was tested for its ability to bind CaM. The results indicated that the expression protein is a Ca2+- dependent CaM-binding protein. Thus, these results further defined the cDNA clone for ECBP21. This work laid a foundation for elucidating biological functions of ECBP21 by using molecular biological means.     

大肠杆菌caiE基因的克隆与高效表达

用聚合酶链反应（PCR）从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱代谢相关酶基因cai E,将其克隆到克隆载体pBluescripy SK中，测序表明：该基因有612bp，与文献报道相比，有10个核苷酸不同，相应的翻译氨基酸有6个相异，将该基因重组到ColE1为复制子，T7为启动子控制下的分泌型表达载体pET-22b( )中，构建表达质粒pETCaiE，重组到载体pACYC184中构建以p15A为复制子，Lac为启动子的表达质粒pACYC-CaiE；重组到载体pWSK129中，构建以pSC101为复制子，T7为启动子的表达质粒pSC-CaiE。上述表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经1mmol/L异丙基硫代－β－D－半乳糖苷（IPTG）诱导后，均可表达，SDS－PAGE分析表明表达蛋白分子质量约26ku，表达量占菌体总蛋白质的比例分别为pETCaiE30%,pACYC-CaiE8%,pSC-CaiE5%。     

燕麦分离蛋白消化特性和消化产物对STC-1细胞分泌胆囊收缩素的影响

为研究燕麦分离蛋白的消化特性及其消化产物对肠内分泌细胞分泌胆囊收缩素(CCK)的影响,以燕麦为原料,采用碱提酸沉法得到燕麦分离蛋白,分析燕麦分离蛋白在模拟胃肠道消化过程中的分子质量变化、氮释放规律、消化产物的氨基酸组成,计算氨基酸评分、化学评分和必需氨基酸指数,并以STC-1细胞为肠内分泌细胞模型评价消化产物对STC-1细胞分泌CCK的影响。实验结果表明:燕麦分离蛋白经胃肠消化后,消化产物的分子质量小于10kDa,释放的可溶性氮的比例为90.11%,消化产物可溶性部分中游离氨基酸的比例为22.8%,肽的比例为67.31%,并且肽的分子质量主要在1000Da以下(约74%);燕麦分离蛋白消化产物中必需氨基酸总量占38.75%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为0.63,且必需氨基酸指数(0.95)大于0.90。燕麦分离蛋白消化产物对STC-1细胞影响的实验结果表明,燕麦分离蛋白消化产物对STC-1细胞生长具有显著的促进作用,且能够增加CCK的合成和分泌。研究结果表明,燕麦分离蛋白作为一种优质的蛋白质原料,不仅具有优良的营养功能,而且具有促进肠内分泌细胞分泌CCK的生物活性,在食品领域具有较大的应用潜力。     

扩展青霉碱性脂肪酶的纯化及N-端氨基酸序列分析

扩展青霉PF898的发酵液经硫酸铵沉淀、DE52纤维素离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤等步骤，其碱性脂肪酶的活性被纯化了79．3倍，回收率约15％，此活为76．9U／mg。纯化蛋白经SDS－PAGE和HPLC TSK－GEL G3000SW凝胶过滤分析显示其分子量约为28kDa。纯化蛋白经氨基酸序列测定仪分析表明，其N－端12个氨基酸的序列为：A－T－A－D－A－A－A－F－P－D－L－H。