汾酒大曲根霉糖化酶的研究——Ⅱ、酶学性质

我们已报导了汾酒大曲根霉菌株选育与产酶条件的初步探讨。经UV初步诱变、获得一株产糖化酶活力为2500U/g麸曲的变异株。为了更好地了解该株根霉所产糖化酶的性质、我们研究了该酶的一些酶学性质及各种因素对糖化酶活性的影响。     

Co（Ⅱ）对青霉素酰化酶的激活作用

文中报道Ｃｏ（Ⅱ）对巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶的激活作用。并用荧光光谱法对其可能的机理进行了研究。结果表明：Ｃｏ（Ⅱ）对青霉素酰化酶具有荧光猝来作用，但并没有引起整个酶分子空间构象的变化，而是与活性部位的某些基团发生了络合作用，有利于底物的诱导契合从而引起酶活力的提高。     

酶工程的一项新技术—固定化细胞

酶是一种具有特殊催化活性的生物催化剂。它的最显著特点是催化高效性和高度专一性。但是酶具有不稳定,难分离和价格贵等缺点。在60年代发展了固定化酶新技术,为弥补酶的某些缺点作出了重大贡献,并大大地推动了酶的实际应用和理论研究。固定化酶就是将液态酶通过物理     

用海藻酸钠为载体固定化产二氢嘧啶酶菌体细胞的研究

近年来,固定化微生物细胞及其在工业上的普遍应用,越来越引起人们重视。这是因为微生物细胞被某一载体固定化后、显著增加了靶酶的稳定性,有利于固定化细胞对底物的催化转化和连续作用。同时细胞固定化后,增加了酶——细胞膜——细胞壁——载体——底物之间的反应复杂性。因此固定化细胞的催化性质是一个值得探讨的问题。     

用酵母双杂交检测BAR与PDZ结构域的相互作用

用酵母双杂交系统探索P ICK 1分子中BAR结构域与PDZ结构域的相互作用.分别构建了pGAD-PDZ和pGBK-BAR重组子,共转入酵母细胞后,涂布于SD(L eu-,T rp-,H is-)固体平板培养基,经滤纸复印和显色反应,在8 h内观察到只有pGAD-PDZ/pGBK-BAR的表达产物呈阳性,而其它对照pGADT 7/pGBKT 7、pGAD-PDZ/pGBKT 7和pGADT 7/pGBK-BAR均呈阴性反应,说明BAR与PDZ结构域具有相互作用.     

D-海因酶基因重组子的构建和酶的表达活性

以中华根瘤菌(Sinorhizobium morelense)SS—ori总DNA为模板，用PCR法扩增D-海因酶基因，分别克隆到5种不同的载体，并转入5种不同的Escherichia coli菌株，获得25株工程菌，进行培养与诱导表达．细胞经超声处理后，通过SDS—PAGE和酶活性两种指标比较表达产物．结果表明，除3株工程菌具有D-海因酶活性外，其它均为无酶活性的不溶性包涵体，包涵体经变性、复性后，可部分获得有活性的D-海因酶，其比活为0．90U／mg，复性率约为20％．此外，对包涵体产生的原因及可能解决办法也进行了讨论．     

一株海因酶产生菌形态特征与培养条件

报道了一株假单胞杆菌(Pseudomonas putida Yz-Ⅱ6)的形态特征及产海因酶的发酵条件．结果表明该菌为杆状，菌落圆形光滑，革兰氏染色阴性，单根极生鞭毛．该菌产海因酶最佳发酵条件为起始pH值7.0的YCG培养基，并用0.1％海因诱导，25℃摇床培养20h，酶活力可达到1.3U／mL菌液．     

Pyrococcus sp.DNA聚合酶内蛋白子突变体的剪切性质

将含麦芽糖结合蛋白－嗜热菌ＤＮＡ聚合酶内蛋白子基因的ｐＭＩ８４、ｐＭＩ９４、ｐＭＩ９５三个重组突变体质粒转入Ｅ．ｃｏｌｉ２４２６经发酵及ＩＰＴＧ低温诱导表达,直链淀粉糖亲和纯化获得ＭＩ８４（ｓｅｒ１／Ｓｅｒ５３８Ｓｔｏｐ）、ＭＩ９４（Ｓｅｒ１→ＣｙｓＨ１／Ｓｅｒ５３８Ｓｔｏｐ）、ＭＩ９５（Ｓｅｒ１→Ａｌａ１／Ｓｅｒ５３８Ｓｔｏｐ）三种蛋白质前体。研究了ＰＨ温度、巯基试剂对内蛋白子Ｎ末端的剪切影响。     

非天然D-型氨基酸生物转化中酶的纯化及其基因序列

D-海因酶 (D- Hydantoinase,HDTase )和 N -氨甲酰基 - D-氨基酸酰胺水解酶 (D- Carbam oylase,DCase )是医药和食品工业上用于生物转化 D-型氨基酸的酶。为了用人工酶替代现用的天然酶转化工艺 ,我们用热变性、硫酸铵分级及 Q - Sepharose、Phenyl- Sepharose、Superose12等多步柱层析 ,从现用菌株 No.2 2 6 2中纯化了 HDTase和 DCase,二酶均达到 SDS- PAGE纯 ,经 N -端序列分析 ,HDTase和 DCase的 N -末端氨基酸序列分别为 :MDKL IKNGTI和 MTRQKIL AF。首先 ,根据酶的 N -末端氨基酸顺序推论并合成了正向多核苷酸简并引物 ,然后按蛋白质数据库资料 ,在比较不同菌株氨基酸残基同源性基础上 ,化学合成了数对反向多核苷酸引物 ,以菌株 No. 2 2 6 2基因组 DNA为模板 ,经 PCR扩增获得了 HDTase的部分基因序列 (～ 70 0 bp )和 DCase的全部基因序列 (912 bp ) ,为使人工酶用于非天然 D-型氨基酸的生物转化奠定了基础。     

多孔性甲基丙烯酸树脂的合成及葡萄糖淀粉酶的固定化

用悬浮聚合法合成了多孔性甲基丙烯酸树脂。用此载体比较了保护戊二醛法，重氮化法和叠氮法固定化葡萄糖淀粉酶的效果，并研究了二乙醇胺保护戊二醛活化载体，树脂多孔结构多数及不同悬臂长度等方面对固定化葡萄糖淀粉酶活力的影响。结果表明，用保护戊二醛法活化的树脂固定化酶效果较好。当戊二醛与二乙醇胺为４∶１（摩尔比），树脂孔径为５５２．１，比表面为２８．３ｍ￣２／ｇ孔容为０．６３５ｃｍ￣３／ｇ时，固定化酶的相对活力为５５．６％，而酶活回收率为２４．７％。