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1.
提取肺结核分枝杆菌基因组DNA,PCR扩增RipB基因并将其连接到表达载体pET-21a上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,用IPTG诱导表达重组蛋白.SDSPAGE表明:重组RipB表达蛋白量约占菌体总蛋白量的40%,而其在37℃表达时主要为包涵体,在15℃表达时主要在可溶上清内;Ni柱一步亲和层析获得重组RipB;100 pmol/L重组RipB可显著促进藤黄微球菌生长.  相似文献   
2.
为获得重组SOD2/3杂合酶,以及观察SOD2/3能否转导入宫颈癌细胞,抑制肿瘤细胞的增殖,构建了原核表达载体pET—SOD2/3,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达获得N端带有6个组氨酸标签的sOD2/3杂合酶;用Ni柱金属螯合亲和层析纯化重组SOD2/3;利用肝素柱层析验证SOD2/3的肝素靶向性;将...  相似文献   
3.
大肠杆菌caiE基因的克隆与高效表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱代谢相关酶基因cai E,将其克隆到克隆载体pBluescripy SK中,测序表明:该基因有612bp,与文献报道相比,有10个核苷酸不同,相应的翻译氨基酸有6个相异,将该基因重组到ColE1为复制子,T7为启动子控制下的分泌型表达载体pET-22b( )中,构建表达质粒pETCaiE,重组到载体pACYC184中构建以p15A为复制子,Lac为启动子的表达质粒pACYC-CaiE;重组到载体pWSK129中,构建以pSC101为复制子,T7为启动子的表达质粒pSC-CaiE。上述表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,均可表达,SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约26ku,表达量占菌体总蛋白质的比例分别为pETCaiE30%,pACYC-CaiE8%,pSC-CaiE5%。  相似文献   
4.
钝顶螺旋藻Fe-SOD的纯化及性质   总被引:2,自引:0,他引:2  
以螺旋藻中分离纯化的Fe-SOD平均比活为4576U/mg,总活力回收率50%,纯度达电泳纯,SDS-PAGE测定纯化的Fe-SOD亚基相对分子质量为21ku,每分子亚基含0.7个Fe原子;在Tris-盐到缓冲液中的最适pH为8.2,最适温度为25℃,在紫外区279nm有最大光吸收,酶的pH稳定范围为6~11,65℃以上迅速的失活,该酶对H2O2敏感,在5mmol/L H2O2中迅速失活,而在Ψ=0.1的乙腈和5mmol/L叠氮化钠中稳定。  相似文献   
5.
氨基葡萄糖因具有丰富的生物活性而被广泛应用,但目前其工业化生产均需利用浓酸在高温条件下进行脱乙酰反应;因此,需要寻找一种环境友好的生物催化法来取代酸水解法脱乙酰基。筛选并得到了来源于卡西氏菌Cyclobacterium qasimii的脱乙酰酶(CqCBDA),并将其成功地在大肠杆菌表达系统中进行了异源表达,且其具有较高水平的可溶性蛋白表达量。纯化后重组的CqCBDA具有N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶活性,比酶活力为11.5U/mg,最适温度为40℃,最适pH值为7.6,在低于40℃的条件下展现出较高的热稳定性。CqCBDA在酶解法生产氨基葡萄糖过程中具有较大的应用潜力,研究结果可为酶法绿色制备氨基葡萄糖提供理论参考。  相似文献   
6.
研究胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)的肝素结合域(HBD)在HeLa细胞中的转导活性,并证实HBD具有运载药物蛋白(凋亡素)进入细胞并诱导肿瘤细胞凋亡的能力。通过克隆表达的HBD-EGFP融合蛋白经Ni2+-NTA纯化后,观察其转导活性;并利用HBD-凋亡素融合蛋白表达纯化后,用噻唑蓝(MTT法)检测肿瘤细胞的凋亡。结果表明:用荧光显微镜可观察到HeLa细胞内有绿色荧光;MTT法检测表明凋亡素融合蛋白能诱导HeLa细胞的凋亡;HBD具有转导活性,能携带药物蛋白(凋亡素)进入细胞并能诱导HeLa细胞的凋亡。  相似文献   
7.
8.
生物质木炭用于鲕状高磷铁矿除磷   总被引:1,自引:0,他引:1  
针对难处理的鲕状高磷铁矿,提出了首先采用高气化性生物质木炭制备含碳球团,然后通过直接还原--高温熔分的方法,成功实现了该铁矿的除磷提铁.直接还原实验采用管式炉.考察了还原温度、生物质木炭加入比例(碳氧摩尔比)和气氛等条件对样品还原行为的影响,并确定了适宜的还原条件为温度1373K、配碳量0.9、时间15~25min以及气氛PCO2/PCO=1∶1.在此条件下,样品的金属化率和残碳质量分数分别在75%~80%和0.69%~0.11%的范围内.通过对该金属化球团的X射线衍射和扫描电镜--能谱分析发现:还原后样品中的主要物相为金属铁、磷灰石和硅酸三钙;磷没有被还原而仍以磷灰石的形式存在于脉石中.高温熔分实验采用Si--Mo棒高温箱式炉.实验结果得到磷质量分数为0.4%的铁样.在熔分体系中进一步添加相对质量为2%~4%的Na2CO3,可以得到磷质量分数在0.3%以下的铁样.基于以上分析,证明了采用生物质木炭用于高磷铁矿的除磷提铁是可行的.  相似文献   
9.
为研究肾脏雄激素调节蛋白杂合启动子Kap147/HAGT-Kpn的细胞特异性,将HAGT-Kpn片段克隆到pGL3-Kap147载体质粒上,通过细胞转染和荧光素酶活性测定,证实Kap147/HAGT-Kpn杂合启动子只在肾小管上皮细胞来源的OK、LLC-MK2细胞中具有活性,经20nmol/L DHT处理后其活性增加了7~8倍。依据雄激素应答原件的保守性,将不同长度的HAGT-Kpn亚片段克隆到pGL3-Kap147载体质粒上,经20nmol/L DHT处理后,KpnI-StuI和MscI-KpnI两个片段能够使Kap147活性增强1~2倍,由此表明Kap147/HAGT-Kpn杂合启动子依然具有组织细胞特异性且受雄激素调控,KpnI-StuI和MscI-KpnI两个片段承担了雄激素的调控作用。  相似文献   
10.
响应面优化假单胞杆菌降解咖啡因培养基   总被引:1,自引:1,他引:0  
利用已筛选出的菌株Pseudomonas putida ECUST5-2降解咖啡因,并对其培养基组分进行优化。首先采用单因子试验从多个因素中寻找出可参考的因素。在此基础之上,利用Plackett-Burman试验筛选出显著影响咖啡因降解率的主要因素为:咖啡因、Na2HPO4、MgSO4和酵母粉。随后用最陡爬坡试验逼近降解菌最大降解率区域。然后利用中心组合设计试验对相关显著因素进行优化,得到咖啡因、Na2HPO4、MgSO4和酵母粉的最佳浓度分别为:3.409 1 g·L-1,0.056 4 g·L-1,0.1611g·L-1和3.570 7 g·L-1。在优化后培养基条件下,咖啡因的降解率(0.105 g·h-1)比其初始咖啡因降解率提高了3.28倍。  相似文献   
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