土荆芥残渣腐解液对大豆根尖抗氧化系统的影响

以入侵植物土荆芥未去精油残渣和去精油残渣为材料,分析了土荆芥通过残株腐解途径释放的化感物质对大豆根尖细胞抗氧化系统的影响.结果表明:在土荆芥未去精油残渣腐解液作用下,大豆根尖抗氧化系统受到显著抑制,随着处理时间延长和腐解液浓度增大,根尖中超氧岐化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)呈现先升高后降低的趋势,O2.-产生速率增大,MDA含量增加;在土荆芥去精油残渣腐解液的作用下,随着处理时间延长和腐解液浓度增大,大豆根尖中O2.-产生速率增大,SOD活性和CAT活性先升高后降低,但MDA含量降低,POD活性高于对照,在一定程度上可以减轻活性氧造成的氧化损伤.因此,土荆芥通过残株腐解释放的化感物质在一定程度上破坏了大豆根尖抗氧化酶系统,并打破了活性氧产生和清除的平衡.土荆芥未去精油残渣腐解液的化感效应大于去精油残渣腐解液的化感效应.     

产色链霉菌SY20-2与龟裂链霉菌SY20-4的种间原生质体融合

利用卡那霉素(250μg/mL)、链霉素(1 000μg/mL)和罗红霉素(150μg/mL)标记亲本菌株SY20-2、SY20-4,进行种间原生质体融合.试验结果表明,培养基中加入0.5%~1%甘氨酸可以提高菌丝体对溶菌酶的敏感度,有利于原生质体的释放.溶菌酶不仅影响原生质体的形成,而且影响原生质体的再生率,因此在35℃水浴条件下,SY20-2选择酶浓度2 mg/mL,作用时间30 min;SY20-4选择酶浓度4 mg/mL,作用时间40 min,最适于原生质体的再生.以45%PEG(分子量1 000)作助融剂,融合频率为0.124%,选出153个融合子,其中3株重组子的稳定性及抑菌活性较好,重组子C对烟草野火病菌的抑菌活性比对照要好.     

酸性铝诱发蚕豆根尖细胞的遗传损伤效应

采用蚕豆根尖细胞染色体畸变实验,研究酸性铝对蚕豆体细胞染色体稳定性的影响.以不同酸度(pH 5.8和pH 4.5)和不同浓度铝溶液处理蚕豆,结果表明:在pH 5.8时,用浓度30μm o l/L~50 000μm o l/L的铝处理,能诱发蚕豆根尖细胞染色体畸变,畸变率随铝浓度的升高而增加;pH 4.5时,用浓度30μm o l/L~300μm o l/L的铝处理组诱发的染色体畸变同样随铝浓度的升高而增加,但铝浓度为1 000μm o/L~50 000μm o l/L时抑制根尖细胞分裂,几乎没有中期相.比较不同pH的铝处理结果可知,相同铝浓度(30μm o l/L~300μm o l/L)时pH 4.5组比pH 5.8组的染色体畸变率高,其中30μm o l/L的两组差异较小,300μm o l/L两组差异较大.研究结果表明,环境铝对植物的遗传损伤与植物生存环境中可溶性铝的浓度有关,铝离子浓度增高会导致其毒性作用增强,酸度降低在一定程度上加剧了铝的毒性作用.     

西兰花中异硫氰酸盐诱导HepG-2凋亡的研究

探讨西兰花中异硫氰酸盐(isoth iocyanates,ITCS)诱导HepG-2细胞凋亡作用及其可能机制.用不同质量浓度ITCS处理肝癌HepG-2细胞,通过SRB法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜实验,观察ITCS对HepG-2细胞的抑制率和细胞凋亡的影响.结果:1、10、50和150μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞72 h后,ITCS可抑制HepG-2细胞的增殖,其IC50为15.824μg/mL;120μg/mL的ITCS作用HepG-2细胞24 h后,细胞出现早期凋亡细胞的形态;60、120、240μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后,可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%、(21.9±4.4)%和(70.2±5.3)%;15、30、60μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内的Ca2 质量浓度升高,且随着ITCS给药剂量的增加而升高(P<0.05).ITCS能够促进人肝癌细胞系HepG-2细胞的凋亡,其作用机制可能与ITCS升高细胞内Ca2 质量浓度有关.     

苹果原花青素对成骨细胞氧化损伤的保护作用

观察苹果原花青素对过氧化氢(H2O2)引起的成骨样细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用。培养成骨样细胞MC3T3-E1,加入不同浓度的原花青素(20,30,40,50μg/mL),及H2O2(100,200,300,400μmol/L),采用MTT比色试验法观察MC3T3-E1的增殖情况;以40μg/mL的原花青素预处理细胞30 min,后加入300μmol/L H2O24 h,采用EdU试剂盒,碱性磷酸酶(ALP)活性检测法,活性氧(ROS)检测法,超氧化物歧化酶(SOD)活性检测法以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的ELISA检测法,观察原花青素对H2O2引起的成骨样细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用。H2O2作用后,MC3T3-E1细胞的增殖受到抑制,其所产生的碱性磷酸酶(ALP)活性、SOD活性降低,而ROS与TNF-α浓度明显升高,但预先30 min给予细胞原花青素,就可以有效逆转这一趋势,苹果原花青素可有效减轻过H2O2引起的成骨样细胞MC3T3-E1氧化损伤。苹果原花青素有潜在的治疗骨质疏松症作用。     

茶多酚诱导卵巢癌COC1细胞凋亡的研究

卵巢癌是女性生殖系统恶性肿瘤之一,而茶多酚具有抗肿瘤和抗氧化的作用,作者研究茶多酚对体外培养的卵巢癌COC1细胞凋亡的影响.采用不同浓度茶多酚处理卵巢癌COC1细胞,24h后分别采用AO/PI双染法和琼脂糖凝胶电泳法(DNA Ladder),观察和分析茶多酚对COC1细胞凋亡的影响.结果显示,低浓度茶多酚(≤500μg/mL)处理24h后,出现早起凋亡现象;而高浓度的茶多酚(2 000μg/mL)后,出现了明显的晚期凋亡现象;过高浓度(4 000μg/mL)处理,细胞出现死亡现象.不同浓度的茶多酚处理后,细胞均可检测到DNA Ladder,且随着茶多酚浓度的增加,DNA裂解程度加深,电泳中DNA Ladder更明显.实验结果表明,不同浓度茶多酚处理均可以诱导卵巢癌细胞株COC1产生细胞凋亡,研究结果为筛选新型的抗癌药物提供参考.     

铁棍山药多糖对PC12及Hepa1-6细胞在体外增殖的影响

采取闪式提取法从铁棍山药中提取山药多糖,利用胰蛋白酶去除多糖中的杂蛋白,冷冻干燥获得山药多糖制品.分别以10μg/mL、100μg/mL、500μg/mL、1 000μg/mL浓度添加于生长良好的PC12及Hepa1-6细胞中,再分别二次培养12h、24h、36h,研究山药多糖在体外对PC12及Hepa1-6两种细胞增殖的影响.结果显示:在培养24h后,当山药多糖浓度为10μg/mL、100μg/mL时,对PC12细胞增殖的影响没有差异性(P>0.05),但当浓度进一步提高到500μg/mL、1 000μg/mL时,则对PC12细胞的增殖体现出显著影响(P<0.05);对于Hepa1-6,在培养12h且山药多糖浓度在10μg/mL、500μg/mL时,对Hepa1-6细胞增殖的影响差异性显著(P<0.05),同时在100μg/mL浓度下,山药多糖对Hepa1-6细胞的增殖抑制更加明显(P<0.01).但当浓度达到1 000μg/mL时,对Hepa1-6细胞增殖呈现促进作用.在培养24h时,各浓度的山药多糖对Hepa1-6细胞增殖的影响均没有差异性(P>0.05).当培养36h后,在山药多糖浓度为10μg/mL、100μg/mL、500μg/mL下,统计显示对Hepa1-6细胞增殖的影响差异性显著(P<0.05).上述结果说明,山药多糖在一定的浓度范围内具有明显的抗肿瘤作用.     

酵母酶解物对HUVEC细胞氧化损伤的保护机制

为探讨酵母酶解物(YH)对H2 O2引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护机制,研究了YH的抗氧化活性.结果显示:YH对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除的半数效应浓度(EC50)为1.85 mg/mL,具有良好的抗氧化活性;高剂量(500μg/mL)的YH可以极显著地减轻H2 O2对HUVEC...     

牛轮状病毒的分离与细胞培养特性

探讨牛轮状病毒(BRV)的细胞培养方法,为研发诊断试剂盒和疫苗提供依据.将RT-PCR阳性样品在MA-104细胞及Vero细胞上进行培养,盲传4代后MA-104细胞出现病变(CPE),主要表现为细胞脱落,出现拉网现象,部分出现死亡.这表明轮状病毒能够在MA-104细胞上生长,并引起细胞病变;而Vero细胞无病变.用胰酶处理的病毒接种MA-104细胞,用含2μg/mL、3μg/mL和5μg/mL三种(A、B和C)不同浓度胰酶的培养液在MA-104和Vero细胞对犊牛轮状病毒传代培养.将分离培养的病毒经聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果表明BRV在C组培养液中分离培养最好,聚丙烯酰胺凝胶电泳图显示病毒核酸呈4∶2∶3∶2排列,与参考株NCDV相似,呈典型A群轮状病毒的特征.     

刺参多糖对星形胶质细胞活化作用机制研究

目的探讨刺参多糖对星形胶质细胞的活化作用机制.方法选取新生Wistar大鼠24只,经胰酶消化分离可得星形胶质细胞;采用MTT法检测HS-4对细胞的毒副作用;采用伊红染色与免疫荧光染色检查细胞的形态学变化;采用Western blot法检测细胞特征蛋白GFAP和细胞周期调控蛋白Cyc DI的表达;采用BrdU法检测细胞的增殖;采用Transwell法检测细胞的迁移.结果 HS-4浓度在0.1～100μg/mL,作用时间为3,5 d时,细胞数量与对照组差异不显著,HS-4浓度在100μg/mL,作用时间为7 d时,细胞存活率明显低于对照组,差异显著;体外培养的细胞与HS-4单独作用,细胞形态无明显改变,HS-4与FGF-2联合作用后,细胞形态发生明显改变;星形胶质细胞的特征蛋白GFAP表达水平显著升高,HS-4在1μg/mL和5μg/mL时,GFAP表达升高了169%和183%;对照组细胞周期调控蛋白Cyc DI表达最低,FGF-2单独作用后,Cyc DI表达略有升高,当HS-4与FGF-2联合作用后,Cyc DI表达明显升高;对照组BrdU阳性率最低,占细胞总数的12.9%,FGF-2单独作用后,BrdU阳性率略有升高,占细胞总数的16.4%,与对照组差异不显著,HS-4浓度为1μg/mL和5μg/mL时与FGF-2联合作用,BrdU阳性率明显升高,占细胞总数的28.5%和56.1%,与对照组相比差异显著;静息状态星形胶质细胞无迁移,HS-4与FGF-2作用下星形胶质细胞迁移明显.结论 HS-4与FGF-2能有效诱导星形胶质细胞的活化,其活化机制主要是强化细胞增殖与迁移.     

富硒大球盖菇抗氧化能力研究

对大球盖菇(Stropharia rugoso-annulata)进行液体富硒培养,结果表明,培养基中硒添加浓度为150μg/mL时,菌丝体生物量达0.811g/100mL,富硒量为4727.68μg/g,富硒率达24.68%,有机化程度为96.27%。与对照组、无机硒(Na2SeO3)组、大球盖菇菌粉液组相比,富硒大球盖菇菌粉液组小鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidsade,GSH-Px)活性和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性明显增加,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量明显减少,结果表明富硒大球盖菇具有较强的抗氧化能力。     

丹酚酸B对马兜铃酸干预作用的研究

为建立马兜铃酸(Aristolochic acid,AA)肾病大鼠模型以及研究丹酚酸B(Salvianolic acid B,SalB)对于马兜铃酸的干预作用,本实验分别采用了体内灌胃SD大鼠的方法并测定尿肾功能生化指标以及体外小鼠淋巴瘤细胞试验(Mouse Lymphoma Assay,MLA)微孔法.结果表明用5 mg/kg.d剂量的马兜铃酸灌胃大鼠及用10mg/kg.d的丹酚酸B治疗所得到的β2-微球蛋白、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、血清肌酐和血清尿素氮生化指标都有相应变化,与理论结果一致;而MLA实验结果表明丹酚酸B在100μg/mL和200μg/mL对于马兜铃酸100μg/mL均具有干预作用,可减小细胞毒性,降低突变频率,且200μg/mL丹酚酸B效果更好.     

文蛤抗癌活性多肽的生理活性研究

以新鲜文蛤为材料,经有机溶剂萃取,分子筛凝胶层析,得到一种具有抗癌生物活性的文蛤多肽,SDS PAGE电泳测得该多肽的分子量约为18kD.用该多肽处理人胃腺癌细胞BGC 823,结果表明,当多肽浓度为10μg/mL,细胞生长的抑制率达到50%.此外,探讨了该活性多肽在体外对几种与肿瘤代谢相关的酶的效应,实验结果显示,该活性多肽能够激活碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶,当其浓度为10μg/mL时,可以使这两种酶活力分别提高150%和93%;该活性多肽对酪氨酸酶则是起到了抑制的效应,测定导致酶活力下降50%所需的效应物浓度(IC50)为1.50μg/mL,其抑制类型为混合型抑制,其抑制常数KI和KIS分别为4.37mg/mL和6.09mg/mL.     

GW1929对小鼠腹腔巨噬细胞源泡沫细胞的形成及MMP-2、MMP-9分泌的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂(GW1929)对小鼠腹腔巨噬细胞源泡沫细胞的形成及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)分泌的影响.方法:氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)(50μg/mL),过氧化酶体增殖物激活受体γ激动剂1929(GW1929)(20 μmol/L)作用于小鼠腹腔巨噬细胞24 h后,油红O染色观察各组泡沫细胞的形成.并用ELISA法测定各组培养液上清中MMP-2、MMP-9的浓度.结果:对照组及GW1929组细胞几乎未被油红O染色,oxLDL组大量细胞胞质被油红O染成暗红色,而oxLDL+GW1929组细胞胞质染色明显浅于oxLDL组细胞.oxLDL组MMP-9的浓度明显高于对照组及GW1929组(P<0.05).而oxLDL+GW1929组MMP-9的浓度明显低于oxLDL组(P<0.05).而各组间MMP-2的浓度并没有差别(P>0.05).结论:GW1929可能具有稳定粥样斑块的作用,其机制可能与其抑制泡沫细胞的形成及MMP-9的生成有关.     

伴刀豆球蛋白ConA体外诱导口腔鳞癌细胞Tca8113凋亡的机制初探

分别用0 μg/mL到100 μg/mL的伴刀豆球蛋白ConA加入人口腔鳞癌Tca8113细胞,采用MTT法检测ConA对Tca8113细胞的增殖抑制作用,并利用形态学观察、乳酸脱氢酶活力测定法(LDH)和流式细胞仪测定细胞凋亡,最后进行了caspase活性检测.加入25μg/mL的ConA培养24 h后,细胞的生长抑...     

LR—98对肝癌细胞增殖的抑制性效应

利用在体和离体实验相结合 ,以动物接种肿瘤细胞后的生存时间、瘤重与体重比值、肝癌细胞生存率、超氧化物歧化酶 (SOD)活性及肝癌细胞凋亡为指标 ,研究了不同剂量榄仁树叶提取物 (LR 98)对肝癌细胞增殖的抑制性效应及可能机制 .在体实验结果表明 ,5× 10 - 3g/mLLR 98处理组动物的生存时间较对照组明显延长 (P <0 .0 1) ,不同剂量处理组 (5× 10 - 3g/mL ,2× 10 - 2 g/mL ,5× 10 - 2 g/mL)的瘤重与体重比值均较对照组明显减小 (P <0 .0 5) .体外培养的细胞经不同剂量LR 98(1× 10 - 5g/mL ,5× 10 - 5g/mL ,1× 10 - 4 g/mL)作用后 ,生存率及SOD活性均显著下降 (P <0 .0 1) .流式细胞仪分析表明 ,不同剂量LR 98作用于肝癌细胞 8h后 ,在G1 期前均出现一亚二倍体峰 ,表明均能诱导肝癌细胞发生凋亡 ,凋亡率分别达 2 9.4 4 % ,2 4 .4 5%和 2 5.2 2 % .以上结果说明LR 98可显著抑制肝癌细胞增殖 .降低SOD活性 ,诱导肝癌细胞凋亡可能是LR 98抑制肝癌细胞生长的机理之一 .     

中药复方板蓝根颗粒抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药复方板蓝根颗粒进行了体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:中药复方板蓝根颗粒对CVB4无直接灭活作用,但能抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成和阻止CVB4的吸附,其半数抑制浓度(IC50)分别为1129.00和1130.44μg/mL,治疗指数(TI)均为2.78.在100～1600μg/mL范围内复方板蓝根颗粒与CVB4抑制率呈明显的量效关系(P<0.01),在1600μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖>50%.研究表明中药复方板蓝根颗粒能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用发生在阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

慢性阻塞性肺疾病患者低氧血症对血清肌钙蛋白Ⅰ的影响

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者低氧血症对血清肌钙蛋白I(CTnI)的影响.方法对137例急性发作期的COPD患者的血氧分压p(O2)和血清CTnI及心肌酶谱进行检测,按氧分压的水平分成3组,观察CTnI及心肌酶谱的变化,并分析COPD患者p(O2)与CTnI及各种心肌酶的相关关系.结果轻、中、重度低氧血症组的CTnI分别为(0.15±0.08)μg/L,(0.87±0.92)μg/L和(2.24±0.97)μg/L,3组间均有显著差异(P＜0.05).而3组p(O2)水平与相对应的CTnI水平呈显著的负相关关系(r=0.968 1,P＜0.05).死亡患者8例,平均CTnI为(3.62±1.08)μg/L,与存活病例比较显著升高(P＜0.05).结论低氧血症可导致COPD患者血清CTnI显著升高,且与氧分压p(O2)呈显著负相关关系.当CTnI明显升高时,提示患者病情危重.     

昆布多糖对结肠癌LoVo凋亡中Caspase-8、3、7作用

探讨昆布多糖对人结肠癌LoVo细胞增殖的影响以及凋亡相关的Caspase-8、Caspase-3、Caspase-7活性的变化.分别以不同质量浓度的昆布多糖处理LoVo细胞,采用Hoechst 33258染色在荧光倒置显微镜下观察细胞形态变化;Caspase-8、Caspase-3、Caspase-7活性检测试剂盒检测Caspase-8、Caspase-3、Caspase-7活性.昆布多糖作用LoVo细胞72 h后,随着昆布多糖质量浓度的增高(400,800,1 600μg/mL),凋亡的细胞数也随之增加.昆布多糖作用LoVo细胞24 h后,随着昆布多糖质量浓度的增高(400,800,1 600μg/mL),Caspase-8、Caspase-3、Caspase-7的活性逐渐升高并存在剂量依赖性(P0.05).昆布多糖具有明显的诱导细胞凋亡的作用,且伴随Caspase-8、Caspase-3、Caspase-7活性升高通过Caspase信号传导通路诱导LoVo细胞凋亡.     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的观察

观察龙葵碱对3种消化系统肿瘤细胞株人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞SGC-7901、人大肠癌细胞Ls-174的细胞毒作用.并从细胞凋亡角度揭示龙葵碱对敏感细胞株的作用机制.采用MTT法观察龙葵碱对3种肿瘤细胞株的细胞毒作用;采用AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微术(confocal)观察龙葵碱对HepG2肿瘤细胞形态的影响;PI单染,流式细胞仪测定龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响.龙葵碱作用于HepG2、SGC-7901、LS-174的IC50分别为14.47μg/mL、(50μg/mL、(50μg/mL;在形态学观察实验中,阴性对照组细胞形态正常,0.003 2μg/mL、0.016μg/mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变,0.08、0.4、2μg/mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态.凋亡率测定结果表明5个剂量龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡率分别为6.0%、14.4%、17.3%、18.9%、32.2%,0.08μg/mL喜树碱诱导HepG2细胞的凋亡率为21.9%.细胞周期观察发现龙葵碱各组G2/M期均消失,S期明显升高.龙葵碱对HepG2人肝癌细胞株比较敏感,能够诱导HepG2细胞凋亡,并将HepG2细胞阻止在S期,影响肿瘤细胞DNA合成.