P-5m八肽对肝癌HepG2细胞中MMP-2和MMP-9表达的抑制作用

目的探讨P-5m八肽对肝癌HepG2细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,以及P-5m八肽的抗肿瘤作用机制.方法用终浓度为10μmol/L和100μmol/L的P-5m八肽分别对处于对数生长期的HepG2细胞进行处理,药物作用时间为36 h,36 h后将细胞裂解.采用Real-time PCR方法检测给药后细胞中MMP-2和MMP-9 m RNA表达水平的变化;Western blot方法测定MMP-2和MMP-9蛋白表达水平的变化.结果Real-time PCR检测显示终浓度为10μmol/L和100μmol/L的P-5m八肽对HepG2细胞刺激后,MMP-2和MMP-9的m RNA表达均受到抑制,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05);Western blot检测结果表明:用10μmol/L和100μmol/L的P-5m八肽对HepG2细胞刺激后,MMP-2和MMP-9的蛋白表达均受到抑制,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05).结论 P-5m八肽可明显抑制HepG2细胞中MMP-2和MMP-9的表达.     

大鼠脑缺血-再灌注损伤时MMP-9的表达

目的观察大鼠脑缺血-再灌注后基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,探讨其与脑缺血-再灌注损伤的关系.方法应用明胶酶谱法(SDS-PAGEenzymograph)测各组大鼠脑组织不同时间点MMP-9的表达.结果MMP-9的动态变化:模型组缺血-再灌注6h后,大鼠缺血部位脑内可见少量的MMP-9的表达,24h明显升高,48 h达高峰,3 d时有所下降,5 d时水平更低.假手术组大鼠脑内未见MMP-9的表达,24 h和48 h组与模型组相比有显著性差异.结论脑缺血-再灌注可引起MMP-9表达异常,并且呈动态变 ;MMP-9的表达与大鼠脑缺血后的炎性病理损害及脑水肿有关系.     

哮喘患者血清基质蛋白酶的测定及临床意义

探讨了发作期哮喘患者血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的水平及其在哮喘病机制中的作用.使用ELISA法分别测定了发作期门诊哮喘患者40名、健康对照20名的血清MMP-9的浓度并测定了外周血嗜酸粒细胞计数(Eos).哮喘患者血清MMP-9的浓度(160.57士76.17ng/mL)明显高于健康对照组(107.51±70.85ng/mL)(t=2.523,p＜0.05),哮喘患者的血清MMP一9水平与Eos(r=0.253,0.10＞p＞0.05)成较弱的相关关系.哮喘发作期血清MMP-9水平明显增高,MMP-9参与了哮喘的气道炎症及气道重构.     

Ⅰ型骨质疏松山羊骨髓基质细胞体外成脂、成骨分化的研究

观察体外定向诱导Ⅰ型骨质疏松山羊骨髓基质细胞（BMSCs）分化为脂肪细胞和成骨细胞.建立去卵巢骨质疏松山羊动物模型,全骨髓法分离培养其骨髓基质细胞.第二代细胞分别成脂、成骨诱导培养,油红O染色、碱性磷酸酶染色、茜素红染色判定其分化结果.成脂诱导21 d,油红O染色有脂滴形成;成骨诱导14 d,碱性磷酸酶染色阳性;连续诱导35 d,茜素红染色证实有钙化结节形成.Ⅰ型骨质疏松山羊骨髓基质细胞在体外可以定向诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞.     

中药喘可治注射液对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制.方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20 μL/mL)孵育4 h后, 加入过氧化氢(H2O2)、放线菌酮(CHX)、环磷酰胺(CTX)诱导细胞凋亡,荧光酶标仪结合Sytox Green染色检测细胞凋亡;加药孵育4 h后,加入细菌脂多糖(LPS,终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后Grass试剂盒检测巨噬细胞NO的量;加药孵育4 h后,加入LPS(终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后流式细胞仪结合Cytometric Bead Array(CBA)技术检测细胞因子的释放.结果:CKZ能抑制H2O2、CHX、CTX诱导的细胞凋亡;促进非刺激状态下巨噬细胞NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α 5种细胞因子的产生, 抑制LPS和IFN-γ刺激的NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生.结论:CKZ可抑制巨噬细胞凋亡,并对巨噬细胞NO的分泌和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的生成具有双向调节作用.     

Ι型骨质疏松山羊骨髓基质细胞体外成脂、成骨分化的研究

观察体外定向诱导Ι型骨质疏松山羊骨髓基质细胞(BMSCs)分化为脂肪细胞和成骨细胞。建立去卵巢骨质疏松山羊动物模型,全骨髓法分离培养其骨髓基质细胞。第二代细胞分别成脂、成骨诱导培养,油红O染色、碱性磷酸酶染色、茜素红染色判定其分化结果。成脂诱导21d,油红O染色有脂滴形成;成骨诱导14d,碱性磷酸酶染色阳性;连续诱导35d,茜素红染色证实有钙化结节形成。Ι型骨质疏松山羊骨髓基质细胞在体外可以定向诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞。     

肺癌A549细胞COX-2与MMP-2表达的关系

目的:探讨肺癌A549细胞环氧化酶-2(COX-2)表达和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达之间可能潜在的关系.方法:①用Western blot法检测对照组和干预组(5、10、15μg/mL脂多糖(LPS)干预12 h,10 μg/mL的LPS干预6、12、24 h)A549细胞MMP-2蛋白质表达;②用ELISA法检测对照组和干预组A549细胞培养上清液COX-2活性产物前列腺素E2(PGE2)及MMP-2的变化.结果:①在5、10、15μg/mL的LPS 12 h诱导下,肺癌A549细胞MMP-2蛋白表达及MMP-2和PGE2的分泌增加;②10 μg/mL的LPS干预肺癌A549细胞6、12、24 h后MMP-2蛋白表达及MMP-2和PGE2的分泌增加;③肺癌A549细胞PGE2与MMP-2正相关(r1=0.980,r2=0.975).结论:①肺癌A549细胞PGE2与MMP-2密切相关;②肺癌A549细胞可能通过激活肺癌A549细胞MMP-2,参与肺癌的侵袭与转移.     

机械牵拉对角膜成纤维细胞氧化应激、炎性因子和MMP-9表达的影响

探讨机械牵拉对人角膜成纤维细胞氧化应激水平、抗氧化能力、炎性因子及基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响。对体外培养的正常人(NC)及圆锥角膜患者(KC)角膜成纤维细胞进行周期性机械牵拉(幅度15%,频率0.1 Hz,时间12 h).采用荧光染色法检测活性氧自由基(ROS)水平;采用实时荧光定量PCR检测抗氧化酶基因表达;采用酶联免疫吸附试验方法检测炎性因子和MMP-9表达。结果发现:静态培养条件下, KC细胞ROS水平、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、MMP-9均明显高于NC细胞;与静态培养组比较,机械牵拉显著增加了NC和KC细胞ROS、炎性因子和MMP-9蛋白表达水平;并使NC细胞部分抗氧化酶基因表达上调,但不同KC患者细胞牵拉后抗氧化酶表达不同。结果提示力学刺激可能通过处于较高氧化应激状态的圆锥角膜成纤维细胞释放更多的炎性因子,进而上调MMPs的表达,加速角膜细胞外基质降解,促进圆锥角膜的发生与发展。     

红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌NF-κB p65与MMP-9表达的影响

目的:观察红芪多糖(HPS)对db/db小鼠心肌组织核转录因子(NF-κB p65)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白与mRNA表达的影响,探讨其防治心肌间质纤维化可能的作用机制.方法 :将60只雄性db/db小鼠随机分为5组:HPS高、中、低剂量组,罗格列酮组与模型组;12只雄性db/m小鼠为正常组.干预组小鼠连续灌胃8周,于干预前后每2周测空腹血糖、体质量各1次.第8周末心脏取血后,取心脏左室心肌组织,分别用于Masson染色、电镜观察心脏超微结构以及Western blotting、逆转录-免疫酶联反应(RT-PCR)法检测其NF-κB p65、MMP-9的蛋白与mRNA表达情况.结果:HPS干预8周后,与模型组比较:HPS高、中剂量组与罗格列酮组小鼠血糖下降明显(P0.05),干预组小鼠体质量变化无明显差异(P0.05);Masson染色可见亮绿色胶原纤维在心肌细胞间及血管周围明显增多且呈堆积状分布;电镜观察可见HPS高剂量组与罗格列酮组小鼠心肌组织内线粒体数量与破坏程度、糖原颗粒及脂滴沉积现象均有明显改善;Western blotting、RT-PCR检测结果显示,HPS高剂量组、罗格列酮组小鼠心肌组织中NF-κB p65、MMP-9的蛋白与mRNA表达量均明显降低(P0.05).结论:HPS可降低db/db小鼠心肌组织中NF-κB p65、MMP-9蛋白与mRNA的表达水平,减轻其炎症反应状态,对心肌的间质纤维化病变具有一定的防治作用.     

量子点（CdTe）诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡与线粒体膜电位的影响

为了探讨量子点(CdTe)诱导小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)凋亡及对线粒体膜电位的影响,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖状况;Hoechst染色进行细胞形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化.结果表明,小鼠腹腔巨噬细胞抑制率随着量子点作用时间延长和浓度增高而增加;形态学观察可见明显的凋亡特征;流式细胞仪检测结果显示剂量组细胞线粒体膜电位均较阴性对照组有所下降且细胞凋亡率显著增高,并呈现一定的剂量依赖关系,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05).因此1.45～5.8 μg/mL剂量范围的量子点(CdTe)能抑制小鼠腹腔巨噬细胞的生长,导致细胞线粒体膜电位显著下降,引起小鼠腹腔巨噬细胞凋亡,从而认为这种凋亡可能是依赖线粒体途径的.     

伴CSM改变的结直肠腺瘤基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的表达

目的:探讨伴鸡皮样粘膜(chicken-skin mucosa,CSM)改变的结-直肠腺瘤、腺癌中MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA的表达及临床意义.方法:采用免疫组化S-P法检测37例伴CSM结-直肠腺瘤、24例腺癌标本中MMP-2、MMP-9蛋白,原位杂交法检测MMP-2、MMP-9 mRNA的表达.结果:MMP-2在腺瘤伴轻、中度不典型增牛组(AD1)、腺瘤伴重度不典型增生组(AD2)的表达与正常肠粘膜相比不具有统计学意义(P>0.05),在腺癌(CA)中其表达高于正常肠粘膜(P<0.05);MMP-9的表达在AD1、AD2与CA组高于正常肠粘膜(P<0.05),在CA中其表达并不进一步增强.结论:MMP-2可能是伴CSM腺瘤向腺癌转变途径中的早期事件,其表达在腺癌中并不进一步增强;MMP-9在腺癌中开始表达,这可能是腺瘤细胞获得浸润能力、腺癌细胞获得转移能力的机制之一.     

C-erbB-2、MMP-1、MMP-2、MMP-7和MTA1在哈萨克族食管癌中的表达及其临床意义

通过观察C-erbB-2、MMP-1、MMP-2、MMP-7和MTA1 5个基因在哈萨克族食管癌组织中的表达,探讨其侵袭转移相关因子在新疆哈萨克族食管癌组织的表达和临床意义.采用RT-PCR方法检测75例哈萨克族食管癌标本中这5个基因的mRNA表达水平,分析它们与临床病理特征的关系.结果显示,5个基因在哈萨克族食管癌组织中表达较正常组织增高,达到差异显著(P<0.05);MMp-2、MMP-7、MTA1基因的表达与淋巴结转移相关(P<0.05),MMP-1、MMP-7基因的表达与临床分期正相关(P<0.05):C-erbB-2与MTA1、MMP-2与MTA1、MMP-7与MTA1、MMP-7与MMP-1、MMP-1与MTA1基因的表达差异高度一致(P<0.01).由此得出,这5个基因表达上调在哈萨克族食管癌的发生发展过程中协同发挥作用;MMP-2、MMP-7、MTA1可能是哈萨克族食管癌发生侵袭、转移的主导因素.     

MMP-2、MMP-9及其抑制剂在肺癌中的表达与临床意义

目的探讨肺癌组织中MMP2、MMP9及其抑制剂的表达与肺癌的生长、转移等临床特征及预后的关系.方法采用免疫组织化学法SP法检测45例肺癌组织中MMP2、MMP9及其抑制剂的表达,观察它们与肺癌的生长、TMN分期的关系.结果MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP2在45例肺癌组织中的阳性表达率分别为57.78%(26/45)、37.78%(17/45)、35.56%(16/45)及51.11%(23/45);它们的表达与肺癌的原发灶范围、淋巴结转移、远处转移、TNM分期及平均生存时间有统计学意义(P<0.05).结论MMP2、MMP9及其抑制剂的表达与肺癌的TNM分期及平均生存时间关系密切,它们在组织中的高表达是判断肺癌预后的独立因素.     

基于MMP-2DPCA 的人脸识别方法

提出了一种基于二维小波分解和融合多特征的2DPCA(简称MMP-2DPCA)人脸识别方法.该方法对于人脸表情变化不敏感,能够很好地压缩和表征原始人脸图像;融合图像既能反映人脸的全局特征,又能反映人脸的局部特征,具有更强的表达能力和判别能力.在ORL人脸库上的实验表明:MMP-2DPCA方法具有有效性.     

肝再生过程中肾desmin和GFAP的表达以及MMPs的变化

采用免疫组织化学法和明胶酶谱电泳法研究大鼠肝部分切除(PH)后再生过程中肾结蛋白(desmin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2),-9(MMP-9)的活性变化.免疫组织化学结果显示,肝再生过程中肾小球系膜细胞、足细胞和间质细胞表达desmin和GFAP,而且二者的表达在PH后均经历了先减少后恢复的过程.明胶酶谱电泳结果显示,在对照组,检测到1条92 kD(pro MMP-9,MMP-9酶原形式)蛋白酶带,具有强的活性.在PH后8 d到14 d检测到了92 kD,86 kD(MMP-9),72 kD(pro MMP-2,MMP-2酶原形式)和66 kD(MMP-2)4条蛋白酶带.从第10 d到14 d,pro MMP-9和MMP-9活性逐渐增强,pro MMP-2和MMP-2活性逐渐降低.     

磷酸钙法将MMP-2，MMP-3双基因干扰载体转入HEK293T细胞的效率观察

检测用磷酸钙法能否将修饰后用于沉默MMP-2,MMP-3基因的慢病毒载体有效地转入到HEK293T细胞。利用磷酸钙法,MMP-2,MMP-3双基因干扰载体（MMP组）与对照质粒（对照组）被分别转染HEK293T细胞,在转染后的第24,48及72h,通过计算绿色荧光蛋白（GFP）阳性细胞数的百分比来判断转染效率。转染24h后,两组细胞均生长状况良好,荧光显微镜下观察,已有大量绿色荧光出现,计算MMP组转染效率为（91．5±6．2）％,对照组转染效率为（80．3±4．7）％;转染后48—72h,两组感染效率均未见明显下降。与对照相比,插入了MMP-2,MMP-3 shRNA模板序列的慢病毒载体没有降低磷酸钙法转染HEK293T细胞效率,反而有所增高。     

人脑胶质瘤中MMP-9的表达及意义

目的：探讨MMP-9在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法：采用免疫组化S-P法检测45例人脑胶质瘤及32例瘤旁正常脑组织中MMP-9蛋白的表达。结果：MMP-9在正常脑组织、低度恶性及高度恶性脑胶质瘤组织中的阳性表达率分别为15.6%,45.8%,81.0%。结论：MMP-9蛋白表达与胶质瘤的发生和恶性进展有关。     

MMP-2 PEX结构域的最佳表达条件

为研究MMP-2 PEX结构域在大肠杆菌BL21(DE3)中的最佳表达条件,直接从构建好的表达载体PET-MMP2 PEX中高效表达MMP-2 PEX结构域蛋白.经SDS-PAGE与软件分析,确定其最佳表达时间为2 h,菌液密度值为0.6时,所表达的蛋白含量最高,而IPTG在一定浓度范围内对表达含量不产生影响.     

Activation of proteinkinase ERK mediates induction of macrophage MMP-12 by OxLDL

The present study was undertaken to investigate the effect of oxidized low density lipoprotein (oxLDL) on the expression of maerophage matrix metalloproteinase-12 (MMP-12), and the possible mechanisms. Activation of extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) was detected by Western blot analysis.Enzymatic activity of MMP-12 was determined by β-casein zymography. RT-PCR analysis was used to measure the mRNA expression level of MMP-12. OxLDL-stimulated macrophages produced increased casein-degrading activities and oxLDL also significantly increased the mRNA level of MMP-12 in a dose-dependent manner.OxLDL stimulated the phosphorylation of ERK1/2 in macrophages. The use of the specific inhibitor indicated that the ERK1/2 signaling pathway was required for the induction of MMP-12.These data demonstrated that oxLDL induced MMP-12 expression in macrophages through an ERK1/2-dependent pathway.