连花清瘟胶囊抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药连花清瘟胶囊进行了体外抗柯萨奇病毒B4（CVB4）的研究.通过观察病毒引起的细胞病变效应（CPE）、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明：中药连花清瘟胶囊对CVB4有直接灭活作用,并能阻止CVB4的吸附细胞和抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度（IC50）分别为410.00,343.13和410.32μg/mL,治疗指数（TI）分别为2.67,3.20和2.66.其中抗病毒吸附作用最强（P〈0.01）.在100～1600μg/mL范围内连花清瘟胶囊与CVB4抑制率呈明显的量效关系（P〈0.05）,在500μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖大于50%.研究表明中药连花清瘟胶囊能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用表现为直接灭活病毒,阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

中药大黄抗柯萨奇病毒作用的实验研究

采用大黄1～4#有效提取部位进行了体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的研究.通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:大黄1～4#有效提取部位对CVB3无直接灭活作用,也不能阻止CVB3的吸附,而能抑制CVB3在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度(IC50)分别为34.7、33.0、33.9、34.3 mg/L,治疗指数(TI)分别为7.2、7.6、7.6、7.2.与病毒唑(IC50=30.6 mg/L,TI=6.6,P＞0.01)相当,优于大黄提取液(IC50=48.5 mg/L,TI=4.7,P＜0.01).在2.5～120 mg/L范围内1～4#部位与CVB3抑制率呈明显的量效关系(P＜0.01),120 mg/L时能完全抑制CVB3在Hep-2细胞内的增殖.所以大黄1～4#有效提取部位安全高效地抑制CVB3在Hep-2细胞中的增殖.     

大黄素体外抗柯萨奇病毒B_4的实验研究

为研究大黄素的体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)作用,以病毒唑为阳性对照药,用MTT法从药物抑制病毒增殖、直接杀灭和抗吸附3种方式评价了大黄素抗CVB4效果,并用实时定量PCR检测了大黄素对CVB4基因mRNA表达的影响,用空斑法测定了大黄素对病毒感染细胞不同时间空斑形成率的影响.结果表明:大黄素不能直接杀灭病毒或阻断病毒吸附细胞,但能显著抑制病毒在细胞内的生物合成,其IC50=(14.10±0.74)μM,TI=(4.35±0.60),能显著降低细胞内CVB4基因mRNA表达(p0.05),其抑制作用发生在病毒进入细胞0~4 h.故大黄素主要通过抑制CVB4穿入细胞后复制环节发挥抗病毒作用,并具有时间依赖性和剂量依赖性.     

补肾和解复方对再障患者CD34+细胞造血干/祖细胞调节作用的实验研究

目的:探索补肾和解方对再障患者CD34 造血干/祖细胞的刺激增殖和诱导分化作用.方法:采用免疫磁珠法(MACS)分离纯化再障患者骨髓CD34 细胞,造血细胞半固体和液体培养体系加入不同度补和解方制剂,检测对CD34 造血干/祖细胞增殖,形成祖细胞集落的提高率,并用流式细胞仪检测液体培养后细胞表面标记的变化.结果:补肾和解复方制剂(5～100μg.mL)能提高BFU-E、CFU-E、CFU-GEMM集落产率,补肾和解复方制剂50μg/mL是液体培养刺激CD34 细胞体外增殖的最佳浓度.补肾和解复方制剂诱导细胞14天后,细胞表面表达CD334 细胞随补肾和解复方制剂的浓度升高而增加,在补肾和解复方制剂的浓度升高而增加,在补肾和解复方制剂100μg/mL时以CD15 细胞数最高,CD71 细胞和G-A 细胞数仅在50μg/mL高于未加补肾和解复方制剂的对照组.结论:补肾和解复方制剂不但能促进再障患者CD34 造血干/祖细胞的增殖,并且能诱导定向分化,具有类生长因子和协同生长因子的作用.     

中药大青叶有效单体抗流感病毒作用

采用中药大青叶有效单体进行体外抗流感病毒(H1N1)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、 MTT法检测细胞活性,红细胞凝集实验检测病毒血凝滴度,考核药物的抗病毒作用.结果表明:大青叶有效单体1#, 2#, 3#, 4#对流感病毒无直接灭活作用,也不能阻止流感病毒的吸附,而能抑制流感病毒在MDCK细胞内的的生物合成.其半数抑制浓度(IC50)分别为30.80, 29.74, 27.56, 25.85 mg/L,治疗指数(TI) 分别为6.33, 9.30, 10.77, 15.05. 其抗流感病毒效果优于病毒唑(IC50=101.05 mg/L, TI =5.25),和抗病毒口服液(IC50=104.41 mg/L, TI=5.03), P<0.01.在160 mg/L时能抑制流感病毒在MDCK细胞内的增殖达90 %左右.在40～160 mg/L内大青叶1#, 2#, 3#, 4#单体能明显降低流感病毒血凝滴度(P<0.05).大青叶有效单体1#, 2#, 3#, 4#能安全高效地抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖.     

复方黄柏颗粒对养殖场常见致病菌的体外抑菌实验

本研究的目的是为了探讨新型复方中兽药复方黄柏颗粒对养殖场中常见致病菌的体外抑菌效果,结果表明:复方黄柏颗粒对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、甲型副伤寒沙门氏菌和多杀性巴氏杆菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为15.625 μg/mL、125μg/mL、125μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)分别为＞1000μg/mL、250μg/mL、250μg/mL、250μg/mL、1000μg/mL,抑菌圈直径呈浓度依赖关系,与MIC结果基本吻合.复方黄柏颗粒具有明显的抑菌效果,同时也为其使用提供了理论依据.     

MTT法检测复方大果木姜子软胶囊抗肿瘤作用

目的:研究复方大果木姜子软胶囊对S180和Hep-2肿瘤细胞株的增殖抑制作用.方法:MTT法评价复方大果木姜子软胶囊抗肿瘤效果.结果:实验证明复方大果木姜子软胶囊对S180细胞的IC50为37.44±1.021ug/mL,对Hep-2细胞的IC50为83.84±0.952ug/mL.结论:一定浓度的实验药物对肿瘤细胞S180和Hep-2的增殖具有抑制作用.     

中药大青叶有效单体抗柯萨奇病毒作用

采用中药大青叶有效单体进行体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:大青叶有效单体1     

合欢花水提物对大鼠脑胶质瘤C6细胞株的增殖抑制与凋亡诱导作用

采用MTT法检测合欢花水提物对C6细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测该水提物对C6细胞的诱导凋亡作用.结果表明:合欢花水提物能抑制C6细胞的增殖,且具有剂量和时间依赖性,其在24 h、48 h、72 h时对C6细胞的半数抑制率(LD50)分别为:305 μg/mL、50 μg/mL、15 μg/mL.流式细胞术结果显示:200 tμg/mL、300μg/mL合欢花水提物均可诱导C6细胞发生早期凋亡,与对照组细胞相比,早期凋亡率分别由对照组的0.7％增加到了4.3％、14.3％.提示合欢花水提物抑制C6细胞增殖机理与诱导细胞凋亡途径有关.     

复方中药的体外抗病毒效果评价

根据中兽医理论选择具有清热解毒作用的黄芩、黄柏等十四味中药组方, 经水提(1#、2#)和醇提(3#、4#)制备了4种提取物, 以致病变型牛腹泻粘膜病病毒(BVDV)为模式病毒, 在犊牛睾丸细胞上评价其体外抗病毒活性. 首先在犊牛睾丸细胞上测定4种提取物的最大无毒浓度, 再按此无毒浓度和BVDV(200 TCID50)共同感染犊牛睾丸细胞, 设立BVDV病毒对照和空白对照组. 通过观察细胞形态的变化来判断结果. 结果显示4种提取物的最大无毒浓度均为1:64, 与病毒对照组相比1#提取物能使犊牛睾丸细胞出现细胞病变(CPE)的时间推迟48h, 2#、3#提取物推迟72h, 4#提取物推迟120h. 本试验证实这4种复方中药提取物在犊牛睾丸细胞上均有抑杀BVDV的效果, 为今后筛选有效的抗病毒中药复方奠定了基础.     

鸡胚尿囊膜法评价板蓝根提取液抗H1N1流感病毒活性作用

 为探讨板蓝根药材、板蓝根颗粒提取液及板蓝根活性组分对流感病毒活性的影响作用,应用鸡胚尿囊膜法评价了板蓝根药材及板蓝根颗粒提取液对流感病毒的预防、治疗和病毒中和作用;评价了板蓝根活性组分对流感病毒的中和应用。研究结果表明,板蓝根药材、板蓝根颗粒提取液及板蓝根活性组分对流感病毒活性具有良好的抑制作用。板蓝根药材提取液对流感病毒具有预防和中和病毒的作用,板蓝根颗粒提取液和板蓝根活性组分具有中和流感病毒的作用。     

不同产区板蓝根药材质量考察

对内蒙古、陕西、甘肃、河北、河南、山东、黑龙江7个产地板蓝根进行质量比较，测定了水分、灰分、浸出物和(R, S)-告依春含量。结果表明，不同产区的板蓝根水分含量在8.86%~11.72%，陕西产地的含量最低；总灰分含量在3.55%~7.00%，山东产地的含量最低；酸不溶性灰分含量0.14%~0.62%，山东产地的含量最低；醇溶性浸出物含量在29.99%~43.71%，陕西产地的含量最高；HPLC含量测定结果显示(R, S) 告依春含量在0.444~1.042 mg/g，河南产地的含量最高。各产地的板蓝根药材的水分、灰分、浸出物和(R, S)-告依春含量均符合标准，实验结果对于农业生产和临床用药有一定的指导意义。     

中药中速灭威残留量的酶联免疫检测方法

建立了直接竞争酶联免疫法(ELISA)测定金银花、枸杞、人参、板蓝根、大青叶和圆弧止痛片为代表的中药中速灭威的残留量.金银花等经过粉碎,加入甲醇提取、旋蒸、PBS复溶等简单前处理之后,再经过适度的稀释可以达到消除基质影响,用ELISA进行测定.中药样品添加回收率为64.00%～91.30%,变异系数均小于30.12%.结果表明,该方法可以简单、快速、灵敏、准确地检测出金银花、枸杞、人参、板蓝根、大青叶和圆弧止痛片等中药中速灭威的残留量.     

50味中药与8种抗生素对变形假单胞菌的体外抑菌作用

用牛津杯法选择诃子、大黄、黄连等50种单方中药对变形假单胞菌、金黄色葡萄球菌进行体外抑菌试验,并选用抑菌作用较好的药物组成复方二联、三联中药,药物质量浓度为60,240 mg/mL。结果表明:单方中药中,诃子对变形假单胞菌抑菌作用明显,为极敏感;复方二联中药中,240 mg/mL的诃子+白芍等4种对变形假单胞菌的抑菌作用明显,为极敏感;复方三联中药中,60 mg/mL的黄连+板蓝根+黄柏等5种对变形假单胞菌的抑菌效果为极敏感,240 mg/mL的黄连+连翘+黄芪等6种对变形假单胞菌的抑菌作用为极敏感;变形假单胞菌对恩诺沙星、盐酸多西环素、硫酸新霉素及硫酸庆大霉素4种药物高度敏感。由此认为黄连+板蓝根+黄柏等11个复方三联中药与恩诺沙星对变形假单胞菌抑菌作用最强,同时筛选出多个抑菌作用效果良好的复方三联中药和抗生素,可用于鱼病防治研究。     

靶向基因疫苗pcDNA3/MDC-VP1的构建及免疫效果

用RT-PCR扩增小鼠巨噬细胞源趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)基因,与柯萨奇病毒B组3型(CVB3)VP1基因通过一个编码10个氨基酸残基的接头序列(Gly4Ser)2相连,形成融合基因MDC-VP1,构建真核表达质粒pcDNA3/MDC-VP1,作为疫苗免疫BALB/c小鼠.3次免疫后,pcDNA3/MDC-VP1组小鼠血清中和抗体滴度明显高于pcDNA3/VP1组;而病毒滴度低于pcDNA3/VP1组.用10 LD50CVB3攻击,pcDNA3/MDC-VP1组小鼠生存率为50%,用Kaplan-Meier法进行生存分析,生存率高于其他各组.     

板蓝根及其制剂中精氨酸和脯氨酸的配位毛细管电泳检测

以配位作用毛细管电泳为手段,采用非衍生直接紫外吸收检测,对板蓝根注射液中各组分进行分析.考察运行缓冲液的浓度和酸度、运行电压、进样时间以及毛细管内径等因素对分离和检测的影响.在优化条件下,即运行缓冲液为30 mmol/L CuSO_4水溶液,pH=3.26,分离电压22 kV,位差进样40 S,毛细管内径50.0μm,检测波长254 nm,对其中含量最多的2种氨基酸--精氨酸和脯氨酸进行定量分析.分别考察其线性范围、检测限以及重现性.结果测得板蓝根注射液中精氨酸的含量为0.63 mmol/L,脯氨酸的含量为25.7 mmol/L.并在相同的优化条件下,对天然产物板蓝根提取物进行分析.结果测得其中精氨酸的质量分数为0.027,脯氨酸的质量分数为0.054.     

27种中药提取物抑制血管生成活性的评价

对27种中药分别采用石油醚、乙酸乙酯、水进行系统提取,利用转基因斑马鱼对提取物进行血管生成抑制活性检测。提取物处理斑马鱼胚胎24 h后,统计斑马鱼节间血管(ISV)的生长情况,并计算抑制率;部分有活性的提取物进一步采用鸡胚尿囊膜（CAM）实验进行验证。实验结果显示,川芎水提物、白芍乙酸乙酯提取物、竹黄水提物、鬼箭羽乙酸乙酯提取物和水提物、乳香水提取物、大青叶乙酸乙酯提取物显示出抑制血管活性现象;其中川芎水提取物、鬼箭羽乙酸乙酯和水提物、乳香水提取物对鸡胚尿囊膜血管生成具有明显的抑制作用。从27种中药中发现了7种提取物具有抑制转基因斑马鱼节间血管生长的作用,这种作用与血管内建生长因子受体2(VEGFR2)表达有关。     

Preventive effects of Xin-Kang oral liquid on viral myocarditis in mice

To investigate the preventive effects of Xin-Kang oral liquid on myocarditis induced by Coxsakie virus B ( CVB) > the medicine was given to mice two days prior to the challenge of mice with the CVB to induce myocarditis. The oral liquid was continuously given to mice for 20 days and quantitative histological changes at various stages of the myocarditis were observed. The pathological changes on the cardiac surface were significantly reduced in Xin-Kang treated mice compared to those in control group (P<0. 01). and the occurrence of severe myocardium damage ( massive cardiac tissue death and degradation) was less in the Xin-Kang group than the groups either challenged with CVB or treated with interferon. The group treated with 0. 015g per gram body weight per day showed significant improvement over the viral group (P<0.01). The results proved that Xin-Kang could protect the cardiac muscle from viral infection and accelerate recovery of damaged cardiac tissue.