板蓝根粗提液抑制流感病毒的实验研究

对板蓝根凝聚粗提液的抗流感病毒作用进行了研究。用丙酮脱脂提取板蓝根生药的凝集素，并分别测定各样品的血凝活性，并用45.3mg/mL的样品对流感病毒（A1／京防／97－53H1N1，A1／京防／262／95）进行了体外抑制试验。结果表明：板蓝根凝集素对流感病毒具有显著的直接杀灭作用和预防作用及较好的治疗作用，而且得出抑制流感病毒的效果与板蓝根凝集素血凝活性的高低有关。     

中药复方板蓝根颗粒抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药复方板蓝根颗粒进行了体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:中药复方板蓝根颗粒对CVB4无直接灭活作用,但能抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成和阻止CVB4的吸附,其半数抑制浓度(IC50)分别为1129.00和1130.44μg/mL,治疗指数(TI)均为2.78.在100～1600μg/mL范围内复方板蓝根颗粒与CVB4抑制率呈明显的量效关系(P<0.01),在1600μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖>50%.研究表明中药复方板蓝根颗粒能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用发生在阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

板蓝根生药中蛋白质提取方法的比较

分别以40％乙醇、20％乙醇和0．02mol／L盐酸3种提取液来提取生药板蓝根中的蛋白质，并以Tris-HCl缓冲液为对照，用752紫外分光光度计测定各样品提取液的O．D值，计算蛋白质的含量：蛋白质浓度(mg／mL)=1．45D280-0．74D260，同时测定各样品的血凝活性，并对板蓝根中蛋白质含量与血凝活性的相关性进行了分析．实验结果表明：3种提取液对同一种板蓝根生药中蛋白质的提取量存在显著差异，其中以40％乙醇为提取液所测得的蛋白质含量最高，但蛋白质含量多少与血凝活性之间并无明显相关性．     

多糖部分降解产物在板蓝根颗粒多糖成分分析中的应用

板蓝根多糖的药理活性与板蓝根的功效一致,其部分降解产物的毛细管区带电泳(CZE)图谱特征性强,可用于板蓝根颗粒中多糖类成分的定性分析.首先采用酶法去除板蓝根颗粒中糊精等辅料的干扰,所得板蓝根多糖在盐酸浓度0.5 mol/L,温度80 ℃条件下部分降解4 h,以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为衍生试剂,采用毛细管区带电泳法测定其部分降解产物图谱.电泳条件:未涂层弹性石英毛细管柱(70 cm×50 μm, i.d,有效长度61 cm),运行缓冲液为40 mmol/L硼砂缓冲液(pH 10.1),检测波长245 nm,运行电压17 kV,室温下重力进样10 cm×15 s,进而运用聚类分析(CA)对该产物的CZE谱图进一步探讨.结果表明:CZE图谱在低聚糖部分具有差异,而单糖组成相对稳定,均含木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖和半乳糖等,结合板蓝根药材相应谱图,从低聚糖和单糖上进行比对可达到鉴别目的,且发现不同厂家产品之间多糖含量存在较大差异.板蓝根颗粒中多糖部分降解产物CZE图谱的建立完善了该药品的质量控制,同时也为其药效物质研究及其他相关中药制剂中多糖的质量控制提供参考.     

板蓝根枸杞提取液对小鼠免疫机能影响的比较

对板蓝根和枸杞提取液对小鼠免疫能力的影响进行比较实验研究．实验用板蓝根及枸杞提取液灌胃．灌胃的剂量为0．2mL／ADI（含量为45mg／mL），连续灌胃35d，末次灌胃后2h，以脱颈椎法死小鼠，取出小鼠脾脏、胸腺及血样进行相关数据的测定．将实验数据与对照组小鼠的各项指标进行比较，并进行t检验．结果显示，板蓝根用药组和枸杞用药组小鼠的各项指标均高于对照组．实验证明，板蓝根和枸杞提取液在一定条件下能提高小鼠的免疫能力．     

热加工降低板蓝根对狗肾上皮细胞的毒性

调查不同热加工阶段板蓝根样品对狗肾上皮细胞的毒性.选用常用于流感病毒检测和抗流感药物的狗肾上皮细胞作实验模型,采用MTT比色法研究菘蓝新鲜根、板蓝根、板蓝根煎剂三种样品对MDCK细胞的细胞毒性情况.结果显示:菘蓝新鲜根、板蓝根和板蓝根煎剂三种样品的细胞半数致死浓度分别为3.74、39.55和61.95 mg·mL-1.该结果表明,热加工可降低板蓝根对狗肾上皮细胞的细胞毒性,这可能与热加工过程中发生的美拉德反应相关.     

南板蓝根化学成分及药理作用研究

该文对南板蓝根的研究进进展作了综述.从南板蓝根中分离出的主要化学成分有:生物碱、黄酮、有机酸、苷类、甾醇类、五环三萜类、蒽醌类、氨基酸、糖类化合物.药理研究表明其具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗炎等方面药理活性.     

预防流感蜡烛对流感病毒抑制杀灭作用做试验

为测定预防流感蜡烛对流感病毒的抑制和杀灭作用,本试验采用了对流感病毒敏感的鸡胚细胞和鸡胚最适部位接种病毒。以细胞病变(CPE)、红细胞吸附试验和红细胞凝集试验做检测指标。结果表明:该蜡烛对流感病毒具有较强的抑杀作用。故用于群体预防具有流行病学意义。     

KPC-rg1抗H1N1流感病毒活性研究初探

为了研究肉桂提取物KPC-rg1对H1N1流感病毒的抗病毒活性.本研究以C57BL/6近交系小鼠为研究对象,并将小鼠分为3组,分别是健康空白组、对照组和实验组,分别对应给予磷酸缓冲盐(PBS)溶液、H1N1流感病毒溶液和H1N1流感病毒+KPC-rg1混合溶液,饲养28 d,观察实验过程中各组小鼠的存活率,通过红细胞凝集抑制实验(HI)分析KPC-rg1抗H1N1流感病毒的血凝抑制效价,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法定量检测病毒载量.与健康空白组相比,对照组小鼠接受H1N1病毒攻击后,体质量急剧下降,并在第3天出现死亡,而实验组小鼠给药后2 d内体质量略微下降,之后恢复到正常增长水平,且无小鼠死亡;小鼠感染28 d后,对照组和实验组小鼠血清中均检测出高滴度的血凝抑制效价(128 HAV);病毒攻击后3 d,对照组和实验组小鼠肺部病毒载量均达到1×10~7 copies/50 mg(1 IU≈5.6 copies);实验终点所有攻毒存活小鼠的肺组织病毒均得到了有效的清除.由此可知,KPC-rg1可有效地灭活H1N1流感病毒,对小鼠有显著的保护预防作用;被灭活的病毒保留了完整的抗原性,形成"原位固化灭活"效应;KPC-rg1可促使小鼠产生强烈的免疫应答反应,使机体产生高滴度的抗病毒抗体.     

应用定点突变技术进行流感病毒NS1蛋白功能的研究

目的流感病毒NS1基因敲除毒株(delNS1毒株)的获得可以使我们建立更有效的生物学关系,主要表现在流感病毒繁殖周期和致病的过程中,流感病毒NS1蛋白和双链RNA活性蛋白激酶(PKR)之间的生物学关系.资料表明,缺少功能性的PKR可以使delNS1毒株在其他非允许宿主中繁殖,这表明流感病毒NS1蛋白的主要功能是对抗或阻止PKR调解抗病毒效应.因此,本实验为了证明流感病毒NS1蛋白对其复制和毒力的影响.方法应用定点突变技术进行流感病毒NS1基因的第38位和第41位氨基酸残基位点的定点突变;然后进行细胞转染包装成新的缺陷病毒;再对其进行转染后产量的测定,如TCID50和PFU.结果包装成的缺陷病毒与包装成的非缺陷病毒相比,缺陷病毒的TCID50和PFU明显下降.结论本实验证明了流感病毒NS1蛋白在流感病毒复制过程中,使其产量和毒力下降.     

50味中药与8种抗生素对变形假单胞菌的体外抑菌作用

用牛津杯法选择诃子、大黄、黄连等50种单方中药对变形假单胞菌、金黄色葡萄球菌进行体外抑菌试验,并选用抑菌作用较好的药物组成复方二联、三联中药,药物质量浓度为60,240 mg/mL。结果表明:单方中药中,诃子对变形假单胞菌抑菌作用明显,为极敏感;复方二联中药中,240 mg/mL的诃子+白芍等4种对变形假单胞菌的抑菌作用明显,为极敏感;复方三联中药中,60 mg/mL的黄连+板蓝根+黄柏等5种对变形假单胞菌的抑菌效果为极敏感,240 mg/mL的黄连+连翘+黄芪等6种对变形假单胞菌的抑菌作用为极敏感;变形假单胞菌对恩诺沙星、盐酸多西环素、硫酸新霉素及硫酸庆大霉素4种药物高度敏感。由此认为黄连+板蓝根+黄柏等11个复方三联中药与恩诺沙星对变形假单胞菌抑菌作用最强,同时筛选出多个抑菌作用效果良好的复方三联中药和抗生素,可用于鱼病防治研究。     

不同产区板蓝根药材质量考察

对内蒙古、陕西、甘肃、河北、河南、山东、黑龙江7个产地板蓝根进行质量比较，测定了水分、灰分、浸出物和(R, S)-告依春含量。结果表明，不同产区的板蓝根水分含量在8.86%~11.72%，陕西产地的含量最低；总灰分含量在3.55%~7.00%，山东产地的含量最低；酸不溶性灰分含量0.14%~0.62%，山东产地的含量最低；醇溶性浸出物含量在29.99%~43.71%，陕西产地的含量最高；HPLC含量测定结果显示(R, S) 告依春含量在0.444~1.042 mg/g，河南产地的含量最高。各产地的板蓝根药材的水分、灰分、浸出物和(R, S)-告依春含量均符合标准，实验结果对于农业生产和临床用药有一定的指导意义。     

27种中药提取物抑制血管生成活性的评价

对27种中药分别采用石油醚、乙酸乙酯、水进行系统提取,利用转基因斑马鱼对提取物进行血管生成抑制活性检测。提取物处理斑马鱼胚胎24 h后,统计斑马鱼节间血管(ISV)的生长情况,并计算抑制率;部分有活性的提取物进一步采用鸡胚尿囊膜（CAM）实验进行验证。实验结果显示,川芎水提物、白芍乙酸乙酯提取物、竹黄水提物、鬼箭羽乙酸乙酯提取物和水提物、乳香水提取物、大青叶乙酸乙酯提取物显示出抑制血管活性现象;其中川芎水提取物、鬼箭羽乙酸乙酯和水提物、乳香水提取物对鸡胚尿囊膜血管生成具有明显的抑制作用。从27种中药中发现了7种提取物具有抑制转基因斑马鱼节间血管生长的作用,这种作用与血管内建生长因子受体2(VEGFR2)表达有关。     

基于白色念珠菌体外抑菌效果的复方苦参洗剂抑菌作用评价

观察复方苦参洗剂中君、臣、佐各药组联合抑菌性质以及协同增效作用。采用加热回流水提法提取各药组获得相应提取液,采用二倍稀释法测得相应各药组单用及联合对白色念珠菌的最低抑菌浓度(ρMIC)，采用联合抑菌指数（IFIC）判定两药组联合抑菌作用性质。结果显示，8味中药水提液的ρMIC范围为7.50 ~30.00 mg/mL,君、臣、佐各药组的 ρMIC范围为4.01 ~21.00 mg/mL，复方组ρMIC为2.22 mg/mL，黄柏+苦参、黄柏+白矾、花椒+白矾的IFIC≤0.5，黄柏+花椒、苦参+花椒、苦参+白矾3组0.5＜IFIC≤1；君药组+臣药组IFIC=0.375 0，君药组+佐药组IFIC=0.750 0，臣药组+佐药组IFIC=1.000 0。复方组及君药组的联合抑菌效果明显强于单味中药的抑菌效果，黄柏、苦参、花椒、白矾4味君药对白色念珠菌抑菌活性较强，复方苦参洗剂抑菌效果的增强与各药组抑菌作用的协同和相加有关。     

基于网络药理学和分子对接研究丹参治疗浆细胞性乳腺炎的作用机制

利用网络药理学初步分析丹参治疗浆细胞性乳腺炎的作用机制,应用分子对接辅助研究丹参中活性化合物与浆细胞性乳腺炎主要靶点的亲和力,以证明筛选出的活性物质确实可与疾病靶点结合。基于中药系统药理学数据库与分析平台筛选丹参中的有效活性成分及这些成分的相关作用靶点,构建中药-成分-靶点网络,利用GeneCard数据库和DisGeNET数据库筛选浆细胞性乳腺炎的高相关性基因靶点,将药物成分靶点与疾病基因靶点相互映射,得到药物-成分-靶点-疾病网络,分析网络得到潜在药物活性化合物及潜在作用基因靶点,将此潜在作用靶点导入STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络。利用DAVID数据库对潜在作用靶点进行生物功能及代谢通路分析。对筛选到的高相关性活性成分和靶点进行分子对接,选择浆细胞性乳腺炎相关度最高的靶点IL-6、ICAM1和PGR,在PDB数据库中找到其三维蛋白结构,后在Zinc数据库中找寻丹参活性成分的分子结构,利用autodock4.0软件将蛋白与分子相对接。得到中药有效活性物质59个及其相关作用靶点132个,疾病相关靶点125个,映射后得到BCL2L1、EDNRA、ERBB2、ICAM1、IFNG、IL-4、IL-6、NR3C1、PGR、STAT3等10个潜在作用靶点,基因本体富集分析后找到潜在作用靶点共14个生物过程,京都基因与基因组百科全书分析后筛选得到16条信号转导通路,以乳腺癌通路、癌症信号通路、库欣综合征通路、NF-κB信号通路等通路为主。分子对接表明筛选出的药物活性成分与潜在作用靶点确有较大的亲和力。该研究初步筛选出了丹参治疗浆细胞性乳腺炎的物质基础,并揭示了丹参治疗该病症是通过多成分、多靶点、多途径共同调控。     

毛脉酸模体外抗菌及抗病毒作用的实验研究

研究毛脉酸模体外抗菌抗病毒的活性.采用二倍稀释法,体外测试毛脉酸模不同提取方法下对常见几种细菌的最低抑制浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)采用CPE法进行体外抗病毒(流感甲型病毒HA)实验,按Reed-Muench法计算各提取部位的药物半数有毒质量浓度(TC50)、半数抑制浓度(IC50)和选择指数(SI).毛脉酸模水煎液和70%乙醇冷浸液均显示有明显的体外抑菌和杀菌活性.毛脉酸模水提物和75%乙醇提取物对流感甲型病毒的抑制较强,半数抑制量质量浓度分别为(IC50)6.2 mg/mL和0.4 mg/mL,治疗指数(TI)分别为16和16.毛脉酸模醇提液是抗菌抗病毒活性较高的活性部位,值得进一步开发利用.     

基于网络药理学的猫爪草治疗结核病作用机制研究

通过网络药理学方法探讨猫爪草治疗结核病的作用机制。运用中药系统药理学数据库与分析平台筛选猫爪草的活性成分和相关作用靶点;借助GeneCards数据库检索疾病靶点,活性成分靶点与疾病靶点作交集得到猫爪草作用于结核病的预测靶点;运用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络图;将交集基因进行基因本体分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析;最后应用AutoDock软件进行活性成分及潜在靶点之间的分子对接验证。筛选得到猫爪草的活性化合物12个,其有效活性成分主要作用于结核病的关键靶点有CASP3、CASP8、CASP9、BCL2和BAX。KEGG结果表明,猫爪草可能通过调节细胞凋亡信号通路从而对结核病进行干预。分子对接得到猫爪草的主要成分是豆甾-4,6,8、维太菊苷、豆甾醇、豆甾醇葡萄糖苷、谷甾醇乙酸酯和β-谷甾醇,对BAX、CASP3和CASP9作用明显。本研究从分子水平探讨了猫爪草治疗结核病的活性成分与潜在靶点,初步验证了其作用机制。     

一种与核黄素合酶α亚基具有结构相似性的板蓝根多肽的分离纯化与表征

利用离子交换色谱SP-5PW和疏水色谱POROS HP2从板蓝根鲜根水相抽提物中分离纯化多肽组分,并对其进行生化表征.获得一种达到电泳纯的多肽RIP2,其相对分子质量约为6.87 ku,等电点约为7.73,N端氨基酸序列依次为QIGEFATAPF.经数据库搜索比对,发现该多肽与核黄素合酶α亚基具有一定的同源性.细胞毒性实验表明该多肽具有一定抗病毒作用.     

中药续断的化学成分研究

利用大孔树脂、MCI柱色谱、制备液相等对续断化学成分进行研究,通过NMR、HR-ESI-MS等波谱方法鉴定分离得到的化合物结构。从续断药材中分离得到13个化合物,分别鉴定为5个三萜皂苷:川续断皂苷Ⅵ(1)、威严仙皂苷A(2)、续断皂苷A(3)、3-O-(2-O-乙酰基)-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元-28-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(4)、3-O-(4-O-乙酰基)-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元-28-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(5),6个环烯醚萜苷:马钱苷酸(6)、马钱子苷(7)、当药苷(8)、续断苷A(9)、续断苷B(10)、林生续断苷I(11),以及2个其他类成分:5-羟甲基-2-呋喃甲醛(12)、α-亚麻酸(13),其中化合物4、12、13为首次从续断药材中分离得到,也是首次从川续断属植物中分离得到。该研究进一步丰富了续断药材化学成分组成,对于建立以质量标志物为药材优劣评价依据的续断药材质量标准提供了物质基础,同时为进一步阐释续断“发汗”加工前后化学成分及其含量的变化、化学成分转化机制研究提供了更丰富的化学物质基础。