活菌作为抗肿瘤制剂和肿瘤基因治疗载体的研究

随着细菌生物学和分子生物学的发展，细菌抗癌治疗的应用更为广泛，其可增加化疗药物的敏感性，增强抗癌药物作用，并作为基因治疗的载体，细菌毒素本身就可以用来攻克肿瘤，而最有应用前景的是，经遗传修饰的细菌作为自杀基因载体选择性地破坏肿瘤细胞，保护正常组织不受损坏。文章就活菌作为抗肿瘤制剂和肿瘤基因治疗栽体的研究进展进行综述。     

sPLA_2cDNA表达载体的选择和亚克隆

目的：选择适当的载体,启动Ca~(2 )依赖分泌型磷脂酶A2（SecretaryphospholipaseA2sPLA2）cDNA的表达,为进一步研究各种因素对该酶活性的影响奠定基础。方法：首先从sPLA2-pGEM7重组体（这一重组体不能在转染的真核细胞中表达）获得人sPLA2cDNA,克隆该片断进入中间载体BSSK（使aPLA2cDNA两端出现XbaI、Hind3酶切位点）,选择antisensesPLA3-BSSK重组体进行扩增,双酶消化上述重组体及PRC／CMV,电洗脱回收aPLA2片断及线性化的载体PRC／CMV,定向连接sPLA2-PRC/CMV,重组体转染鼠巨噬细胞,筛选,扩增阳性克隆;提取RNA,Northem杂交法检测sPLA22mRNA。结果：应用定向克隆方法,成功地制备了sPLA2-PRC/CMV重组体。用这一重组质粒转染鼠巨噬细胞后,Northem杂交检测到了sPLA2－mRNA的表达。结论：SPLA_2－PRC／CMV是一有效的表达系统。     

脑内免疫炎症的发生机制

中枢神经系统神经元退行性变过程中表达主要组织相容性分子、黏附分子和补体受体,并产生多种细胞因子,从而引发脑内的免疫炎症反应。     

胞内型磷脂酶A2基因亚克隆与基因表达

目的 研究花生四稀酸在细胞中的释放及前列腺素的合成,构建与花生四稀酸释放相关的表达系统。即胞内型磷脂酶Ａ２（ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ ｃＰＬＡ２）ｃＤＮＡ－ｐＲＣ／ＣＭＶ。方法 从克隆载体ｐＭＴ２用Ｓａｌ１制备ｃＰＡＬ２ｃＤＮＡ;平末端连接ｃＰＡＬ２－ｐＲＣ／ＣＭＶ;转染鼠巨噬细胞及筛选正向阳性克隆;ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｃＰＬＡ２ ｃＤＮＡ基因表达。结果 人ｃＰＬＡ     

应用定点突变技术进行流感病毒NS1蛋白功能的研究

目的流感病毒NS1基因敲除毒株(delNS1毒株)的获得可以使我们建立更有效的生物学关系,主要表现在流感病毒繁殖周期和致病的过程中,流感病毒NS1蛋白和双链RNA活性蛋白激酶(PKR)之间的生物学关系.资料表明,缺少功能性的PKR可以使delNS1毒株在其他非允许宿主中繁殖,这表明流感病毒NS1蛋白的主要功能是对抗或阻止PKR调解抗病毒效应.因此,本实验为了证明流感病毒NS1蛋白对其复制和毒力的影响.方法应用定点突变技术进行流感病毒NS1基因的第38位和第41位氨基酸残基位点的定点突变;然后进行细胞转染包装成新的缺陷病毒;再对其进行转染后产量的测定,如TCID50和PFU.结果包装成的缺陷病毒与包装成的非缺陷病毒相比,缺陷病毒的TCID50和PFU明显下降.结论本实验证明了流感病毒NS1蛋白在流感病毒复制过程中,使其产量和毒力下降.     

反义人端粒酶催化亚单位基因转染对人结肠癌细胞恶性表型的逆转作用

利用基因重组技术,人端粒酶催化亚单位基因反向插入真核表达载体pcDNA3.0,获得重组体pcDRTRT,通过脂质体法导入人结肠癌细胞株SW-111C,获得稳定转染细胞系,即反义细胞.该细胞易脱落,出现明显生长抑制现象;失去叠落生长能力;流式细胞仪(FCM)证实导入反义hTRT后,G0/1期细胞增加,G2M和S期细胞减少,增殖指数(PI)降低;且不能在软琼脂中形成集落.说明反义hTRT基因体外导入结肠癌细胞株SW-111C可以明显降低端粒酶活性,抑制结肠癌细胞的增殖且能使其恶性表型发生逆转.     

桂枝浸出物对小鼠巨噬细胞内α-TNF基因表达的影响

目的：检测小鼠应用桂枝浸出物后腹腔巨噬细胞内TNFα-mRNA含量的变化。方法：雌雄小鼠随机分组，口服给药后制备巨噬细胞涂片。克隆人TNF－DNA的PGEM-1质料转化EcoliJM103，选择培养扩增。随机引物法制备地高辛标记的探针，利用原位杂交技术检测巨噬细胞内TNFα-mRNA的表达。结果：抗肿瘤中草药桂枝等浸出物可增强小鼠腹腔巨噬细胞内TNFα－mRAN－mRAN表达。结论：分子生物学的方法与手段可用于揭示抗肿瘤中草药的作用机理。     

Northern杂交法分析转染的胞苷酶

目的：研究人胞苷转移酶（CitidyltransferaseCT）cDNA在鼠巨噬细胞中的表达。方法：按照T．Mainiatis等人[1]的方法从转染的巨噬细胞中提取总RNA,电泳分离RNA,转移BNA至尼龙膜并固定,制备32p标记的胞苷转移酶DNA探针,杂文及放射性自显影。结果：对照组无表达,同类转染的细胞均有不同程度的表达。结论：制备探针前应用电泳法确定CTcDNA片段的浓度比紫外光吸收法更准确适用。Quickspin柱（SephedexG-25）用于回收标记的探针,有利于提高探针的纯度,增加杂交的灵敏度。     

吉林市秋白菜冬贮期硝酸盐含量变化及食用对策

对吉林市郊秋白菜冬贮期硝酸盐含量变化,进行了动态研究,结果表明贮存一个月后,硝酸盐含量大为降低,可达食用标准,并对食用对策进行了探讨。     

载脂蛋白E基因多态性与血脂和冠心病相关性研究

探讨载脂蛋白E（apoE)基因多态性与血脂水平及冠心病之间的关系。