柱层析法纯化且人肿瘤坏死因子α及其抑瘤作用

半合成人肿瘤坏死因子ＴＮＦ－α在大肠杆菌中高表达，发酵后收集菌体经超声破碎，然后在１２０００ｒ／ｍｉｎ４℃离心１０ｍｉｎ，上清经６０℃热处理３０ｍｉｎ，离心上清用６０％饱和度的硫酸铵沉淀，再依次经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５，ＤＥＡＥ－５２纤维素和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－７５柱层析，得到的纯化ｒｈＴＮｆ－ａ比活性为２×１０＾７ｕ／ｍｇ，回收率为２４％，经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和ＨＰＬＣ鉴定，纯度达９５     

饭豆铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

饭豆种子粗提液中有６条Ｃｕ·Ｚｎ—ＳＯＤ活性谱带，经氯仿－乙醇混合液处理，硫酸铵盐析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析被分离，获得了两组ＳＯＤ同工酶组分（ＳＯＤ—１，ＳＯＤ—２）．它们在酶分子结构上可能存在一定差异．ＳＯＤ－１含与粗提液相对的、电泳迁移率较小的活性谱带，它在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）图谱上的活性染色带和蛋白染色带相互对在；在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳图谱上均呈现单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．该酶分子量为３１３００，亚基分子量为１６５００，等电点为４．２，在紫外区的吸收值为２６４．０ｎｍ．该必在０—７５℃范围内稳定．纯化的ＳＯＤ—１比活性为１７８９Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ—２比活性为２８４Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ活力回收率为３２％．     

黑曲霉胞外葡萄糖淀粉酶的纯化及特性

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ７２８）的粗酶液，经硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤脱盐，ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换柱层析和ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－１００凝胶层析纯化，经ＰＡＧＥ鉴定为一条带ＳＤＳ凝胶电泳测定分子量为７００００．金属离子Ｆｅ３＋对该酶有一定的抑制作用，该酶的等电点为３．７，最适ｐＨ为４，最适温度为６０℃．Ｅ２８０１％为１５．７２，Ｋｍ值为０．１１２×１０－３ｍ．     

EXPRESSION OF HUMAN TUMOR NECROSIS FACTOR α IN ANABAENA SP.PCC7120

通过三亲结合转移方式，将含人肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ＿α）ｃＤＮＡ和ｐｓｂＡ启动子的鱼腥藻－大肠杆菌穿梭质粒ＰＤＣ＿ＴＮＦ导入单细胞丝状鱼腥藻７１２０中．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，人肿瘤坏死因子αｃＤＮＡ在鱼腥藻７１２０细胞中能以自主复制形式存在于ＰＤＣ＿ＴＮＦ质粒上．ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ和免疫印迹分析结果显示，转ＰＤＣ＿ＴＮＦ的鱼腥藻７１２０可表达分子量约为１７ｋｕ的人ＴＮＦ＿α，其表达量约占藻体蛋白的１６％左右．转ＰＤＣ＿ＴＮＦ的鱼腥藻７１２０粗提液的ＴＮＦ生物学比活性约为２５×１０４ｕ／ｍｇ．     

气相色谱法测定癸脂组成

阐述了癸脂的预处理方法以及气相色谱最佳操作条件：采用Φ４ｍｍ×３０００ｍｍ不锈钢柱，填充８％ＤＥＧＳ／１０１硅烷化担体（６０～８０目）进行色谱分离，载气Ｎ２流速为４０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温为１８０℃：，使用ＳＰ－２３０５型气相色谱仪、ＦＩＤ检测器，获得了满意的定性定量分析结果。     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的性质

对短小芽孢杆菌ｃ１７２（ｐＢＸ９６）转化子发酵淀粉产生的碱性蛋白酶,采用硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５脱盐、ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等方法进行纯化,并对纯化酶的性质进行了研究．结果表明,酶反应的最适ｐＨ值为１１．０;在ｐＨ８．０～１１．０之间稳定;最适反应温度为４０℃;热稳定性较好,４５℃下处理３０ｍｉｎ酶活性不变,６０℃下处理３０ｍｉｎ活力保留６５％．对甲基苯磺酰氟（ＰＭＳＦ）能完全抑制该酶活性,洗涤剂中的三聚磷酸钠对酶有较大钝化作用．     

人肿瘤坏死因子穿梭表达载体的构建

应用ＤＮＡ重组技术,将人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）ｃＤＮＡ插到质粒ＰＲＬ４３９的ＰｐｓｂＡ启动子下游,得到中间载体ＰＲＬ＿ＴＮＦ;再把ＰＲＬ＿ＴＮＦ上含ＰｐｓｂＡ和（ｒｈＴＮＦ）ｃＤＮＡ的片段连到穿梭载体ＰＤＣ＿８上,构建成穿梭表达载体ＰＤＣ＿ＴＮＦ．转化大肠杆菌ＴＧ１后,进行发酵培养．ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ分析和免疫印迹检测结果显示ｒｈＴＮＦ获稳定表达,分子量为１７ｋｕ．本研究结果为ｒｈＴＮＦ在蓝藻中的表达提供了技术基础．     

移植瘤株冷冻保护的实验研究

本文介绍了人肝癌细胞析细胞及其移植瘤组织经冻存，复苏后检测琥珀酸脱氢酶（ＳＤＥ）活性，成瘤率和电镜检查，选择１０％ＤＭＳＯ或１０％甘油作为冷冻保护剂来冻存细胞，它们先在冰箱里缓慢降温冷却（－０．８℃／ｍｉｎ），后在液氮罐口的液氮气中冷冻（－１０℃／ｍｉｎ）１天，最后置入液氮内，冷并保护后的冻存或组织复苏后显示高的ＳＤＥ活性，１０％ＤＭＳＯ冻存的细胞ＳＤＥ活性比１０％甘油者高，两者相比有显著差别（Ｐ     

竹叶青（Trimeresurus stejnegeri）蛇毒

用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－５－分离竹叶青粗毒，再经ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－ＣＬ－６Ｂ、ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－５０和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００纯化，得到一个５－核苷酸酶，对血小板聚织要具有强抑制作用，在ＳＤＳ－聚丙烯酰谘电泳图谱上为一单一蛋白带，分子量为８２５００，是一个糖蛋白，含６．７％中性糖和０．７％唾液酸。     

猪血超氧化物歧化酶纯化与分析─—一种铜盐沉淀新工艺

本文建立铜盐沉淀、选择热变性、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—１００层析方法从猪血中提纯超氧化物歧化酶，纯化倍数１８６．５．该酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈一蛋白带．纯酶的比活性为９３２５ｕ／ｍｇ—ｐｒ（邻苯三酚—３２５法）．通过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ法测出分子量为３００００．该酶对热稳定，纯酶液的最大吸收波长为２６０ｕｍ．     

猪血超氧化物歧化酶纯化与分析─—一种铜盐沉淀新工艺

本文建立铜盐沉淀、选择热变性、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—１００层析方法从猪血中提纯超氧化物歧化酶，纯化倍数１８６．５．该酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈一蛋白带．纯酶的比活性为９３２５ｕ／ｍｇ—ｐｒ（邻苯三酚—３２５法）．通过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ法测出分子量为３００００．该酶对热稳定，纯酶液的最大吸收波长为２６０ｕｍ．     

小鼠集落刺激因子（CSFs）的体外诱导研究

用体外淋巴细胞培养系统，对一些非淋巴因子诱导小鼠脾细胞产生集落刺激因子（ＣＳＦｓ）进行研究的结果发现，静止的小鼠脾细胞对原激酶（ＵＫ）不产生应答，只有当ＣｏｎＡ刺激后才能产生ＣＳＦｓ；表皮生长因子（ＥＧＦ）与ＣｏｎＡ协同作用能明显诱导ＣＳＦｓ的产生．人绒毛膜促性腺激素（ＨｃＧ）可直接作用于静止的脾细胞，使其产生ＣＳＦＳ．剂量依赖试验表明当ＵＫ为１６００ＩＵ／ｍｌ，ＥＧＦ为２０ｎｇ／ｍｌ，ＨＣＧ为４００ＩＵ／ｍｌ时所诱导的ＣＳＦｓ活性达到最高值．此外，ＣＳＦｓ的诱导还具有时间依赖关系．ＵＫ作用６０ｈ，ＥＧＦ和ＨＣＧ作用４８ｈ诱导产生的ＣＳＦｓ活性达到最高值．ＨＣＧ抗体中试验进一步说明ＨＣＧ可直接作用于脾细胞．联苯胺染色结果表明ＵＫ．ＥＧＦ和ＨＣＧ诱导的条件培养液中均不含红系集落刺激因子．     

花椰菜凝集素的纯化及部分性质的研究

花椰菜凝集素由花蕊组织经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ凝胶层析纯化获得．ＰＡＧＥ鉴定和高碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂反应均显单一条带，说明该凝集素为纯化的糖蛋白．经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱过滤分析，其相对分子质量约为９４０００．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明该凝集素含有４个亚基，其相对分子质量分别约为２８０００、２５０００、２２０００和２００００．花椰菜凝集素经５０℃处理５分钟仍保持高的凝集活性，该凝集素对酸处理较碱处理稳定．     

孕妇尿液表皮生长因子的分离,纯化及活性检测

孕发尿液蛋白丙酮粉粗提液经Ｂｉｏ－ｇｅｌＰ－１０凝胶层析获得五个组分，经免疫点印渍分析后，证明其中组分Ⅲ的活性最高，该组分再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５凝胶层析，又得到Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ四个组，ｈＥＧＦ活性主要分布在组分Ａ中。本文建立了免疫点印渍方法并应用于ｈＥＦＧ的活性检测。     

猪心肌细胞质苹果酸脱氢酶的制备

用匀浆提取，９０％硫酸铵沉淀和ＣＭ－纤维素、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｂｅｘＡ－５０、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析的方法从猪心肌中分离纯化了细胞质苹果酸脱氨酶。酶制品达到了ＩＦＣＣ规定的标准。     

猪凝血酶的分离纯化与鉴定

本文报导以猪血为材料，制备凝血酶，血浆在低离子强度下经等电沉淀得优球蛋白，从该沉淀中采用稀盐溶液提取，氢氧化镁吸附和二氧化碳解吸等步骤获得凝血酶原粗品。后者经脑提取液激活，再经乙醇分级、ＤＥＡＥ－纤维素与磷酸纤维素离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤，得凝血酶制品，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，制品呈单一条带，分子量约为３９ｋＤ，比活达１６１０ＮＩＨＵ／ｍｇ蛋白，以活化的粗品活性为１００％，活性回收率为４８％，纯化倍数约为１０。     

衍生气相色谱法分析中草药中的草酸

本文将极性强的草酸用甲醇一盐酸酯化，衍生成易挥发且极性低的草酸二甲酯的方法，对部分中草药中的草酸进行了分析，并对酯化条件进行了探讨。本法使用ＦＩＤ检测器，５％ＰＥＧ—２０Ｍ涂渍在ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｂＷＡ，Ｗ—ＤＭＣＳ（６０～８０目）的色谱柱（３ｍ×４ｍｍ），Ｎ＿２为载气，柱温１０５℃，草酸二乙酯为内标物。本法灵敏度高，草酸衍生物出峰单一，选择性强，操作简单。回收率在９２．８５％～１０３．５％之间。     

气相色谱法测定鱼油中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸含量

本文研究了甲酯化的鱼油中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸组分的气相色谱分析方法。在载气Ｎ＿２：１０ｍｌ／ｍｉｎ，柱温：１９４℃，１０％ＤＥＧＳ／ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｂＷＡＷＤＭＣＳ（８０～１００目）柱上，对二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸组分进行了实验检查。二十碳五烯酸检出限为１×１０￣（－８）ｇ；二十二碳六烯酸为１×１０￣（－７）ｇ。灵敏度、重现性较好，此方法可用于定量。并用该方法测定了鱼油中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸组分的含量。     

MET对油菜幼苗活性氧代谢的影响

试验采用质量比值分别为１００×１０－６，１５０×１０－６，２００×１０－６的ＭＥＴ喷施二叶一心期油菜幼苗，于第７，１４，２１（或２３）和４５天随机取功能叶．以比色法测定ＰＯＤ活性，滴定法测ＣＡＴ活性及ＧＳＨ含量，抗坏血酸过氧化物酶活性采用紫外吸收法测定．结果表明，喷施多效哇的油菜幼苗叶中ＰＯＤ和抗坏血酸过氧化物酶活性增高，ＣＡＴ活性降低，ＧＳＨ含量增加．从而说明了ＭＥＴ提高作物的抗逆性，可能是由于提高某些保护酶活性及增加非酶类自由基净化剂含量所致．     

背角无齿蚌酸性磷酸酶的分离、纯化及部分性质研究

从背角无齿蚌外套膜中,经盐析,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０离子交换柱层析及Ｓｅｐｈａｄｅｘ,Ｇ－１５０凝胶过滤等步骤,分离提纯到一种酸性磷酸酶,提纯倍数８８．２５酶液比活力为２４．７Ｕ／ｍｇ,通过动力学方法测得其最适ｐＨ值为４．８,最适温度为５０℃,同样以对硝基苯磷酸二钠作底物测得其Ｋｍ值为０．７３ｍｍｏｌ／Ｌ ,Ｚｎ＾２＋对酶有激活作用,而Ｆ＾－,Ｐｂ＾２＋和Ｂａ＾２＋则对酶有一定的抑制