GHRP-scu-PA-32K突变体的构建、表达及纯化产物的部分性质研究

在scu-PA-32K的cDNA分子基础上经定点突变,在N端紧接Leu¹之前引入编码GHRP四肽的寡核苷酸序列(GGTCATAGGCCT),构建了GHRP-scu-PA-32K的突变体cDNA。将它克隆到表达载体pCM-βneo中,与pCMβ-dhfr共转染CHO/DHFR-细胞。筛选到的稳定表达株在无血清培养基的表达量为580IU/(106细胞·24h)。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物,SDS-PAGE显示为单一蛋白条带,分子量为33kD,质谱法测定分子量也为33kD。经血纤维蛋白平板法测定比活为150000IU/mg蛋白。对血纤维蛋白的亲和性,突变体为scu-PA-32K的4.5倍。     

单克隆抗体亲和层析法纯化人尿激酶

含抗人尿激酶单克隆抗体的腹水经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ柱纯化得到ＩｇＧ纯品,分子量为１５０ｋＤ（重链５５ｋＤ,轻链２０ｋＤ）,与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成抗人尿激酶单克隆抗－体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析介质。尿激酶粗品经单抗－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化后,所得尿激酶制品比活为９×１０－４～１．７×１０－３ｍｏｌ／ｓ·ｍｇ－１,纯化倍数为１５～３０倍,酶活性回收率在５０％以上。     

异硫氰酸萤光素的合成

我们采用Stansilav Smolik报导的用二硫化碳处理氨基萤光素的途径,合成了异硫氰酸萤光素,在合成方法上作了某些改进,使产品的质量和产量都有较显著的提高。产品经萤光抗体技术检验,效果良好。     

GHRP—scu—PA—32K突变体的构建,表达及纯化产物的部分性 …

在ｓｃｕ－ＰＡ３２Ｋ的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变,在Ｎ端紧接Ｌｅｕ＾１以前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ）,构建了ＧＨＲＰ－ｓｃｕ－ＰＡ－３２Ｋ的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ＾－细胞。筛选到的稳定表达株在无 清培养基的表达量为５８０ＩＲ／（１０＾６细胞．２４ｈ）。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为一蛋     

猪凝血酶的分离纯化与鉴定

本文报导以猪血为材料，制备凝血酶，血浆在低离子强度下经等电沉淀得优球蛋白，从该沉淀中采用稀盐溶液提取，氢氧化镁吸附和二氧化碳解吸等步骤获得凝血酶原粗品。后者经脑提取液激活，再经乙醇分级、ＤＥＡＥ－纤维素与磷酸纤维素离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤，得凝血酶制品，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，制品呈单一条带，分子量约为３９ｋＤ，比活达１６１０ＮＩＨＵ／ｍｇ蛋白，以活化的粗品活性为１００％，活性回收率为４８％，纯化倍数约为１０。     

溶栓剂蛋白质工程的新进展

介绍了国内外溶栓剂蛋白质工程方面的新进展,主要涉及了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)、链激酶(SK)、葡萄球菌激酶(SAK)、DSPA及TSV-PA的研究进展。一些PA突变体及新型溶栓剂,如K2P、TNK-PA和STAR等的临床实验结果表明它们在延长体内半寿期、增强对血纤维蛋白选择性和溶栓效率等方面有较大的改进。但溶栓治疗造成的颅内出血等局部性出血问题仍是目前的难题之一,说明新型溶栓剂的研制有很大潜力。