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1.
哺乳动物和肿瘤组织细胞质膜ATP酶的分布和性质已有报导,而有关两栖纲动物细胞质膜ATP酶的分布、性质还未见报导.本文研究了中华蟾蜍肝细胞质膜ATP酶,并对Mg~(++)-ATP酶的作用机制、胰岛素作用和Mg~(++)-ATP酶的关系作了探索. 中华蟾蜍肝细胞质膜的分离纯化:取中华蟾蜍肝,切成碎片,用缓冲液洗去血,每10克肝组织加入25ml 12mM、pH7.4的Tris-HCl缓冲液,用匀浆器进行匀浆.匀浆液于1500g离心15分钟,沉淀为细胞核和线粒体.上清液经66,000g离心90分钟,沉淀为微粒体.用70%的蔗糖将微粒体混匀,使其最后体积为52%.然后取13ml上述溶液放在硝  相似文献   
2.
质粒pEGFP-1是一种不含启动子序列的哺乳动物细胞表达载体,将系列缺失的TNFα基因启动子5‘UTR(untranslated region)和3‘UTR插入pEGFP-1中,构建了一组重组质粒,转染L929细胞后,发现当报告基因EGFP的上游含有包括5‘UTR在内的TNFα基因启动子序列时,重组质粒在L929细胞中均能表达EGFP,但是,当EGFP基因3‘端同时含有TNFα基因的3‘UTR时,重组质粒转染L929细胞后,均不能表达EGFP,因此,在L929细胞中,TNFα基因的3‘UTR对基因表达具有抑制作用,进一步研究发现,在L929细胞中,TNFα基因的3‘UTR对基因表达的抑制作用需要其5‘UTR的共同参与,而且,RT-PCR实验表明,LPS在其他细胞中对TNFα基因起诱导作用的机制在L929细胞中不存在。  相似文献   
3.
小鼠BRI3基因的克隆及其诱导细胞死亡的作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
林丽珠  喻红  应明耀  唐炯  周炜  赵寿元  李昌本 《科学通报》2001,46(18):1546-1549
为了阐明TNFα作用的分子机制,用抑制消减杂交(SSH)技术和反转录PCR(RT-PCR),从hTNFα处理过的小鼠脑血管内皮细胞(bEnd.3)总RNA中扩增并克隆BRI3的cDNA,构建了BRI3基因与绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合的表达载体pEGFP/I3,转染L929细胞后,发现EGFP/I3融合蛋白位于细胞质里,通过TUNEL法检测或流式细胞仪分析初步表明,该融合蛋白在L929细胞中的表达能够导致细胞死亡,而且这种细胞死亡能被L929细胞中表达的Bcl-2蛋白所抑制,提示BRI3基因的功能可能与TNFα的细胞毒作用有一定的相关性。  相似文献   
4.
将人肿瘤坏死因子受体Ⅰ(hTNFRI)死亡域基因克隆在氯霉素乙酰转移酶(CAT)的后面,构建成重组表达质粒pLT10 CATLDd.该融合蛋白基因转化大肠杆菌后发酵,IPTG诱导2 h,SDS-PAGE测定CATLDd 蛋白质的分子质量为39 ku.Western 印迹实验进一步作了鉴定.表达产物为包涵体.CATLDd 蛋白质经Q-Sepharose 柱层析后纯度大于95% .  相似文献   
5.
用二维核磁共振并结合X-光单晶衍射的方法,对hTNFαDa在溶液中的构象和它的稳定性进行了初步的探讨.结果表明,当尿素浓度为5mol·L-1时,hTNFαDa逐步解聚为单体和无规线团;NMR弛豫实验也证实了在尿素作用下,hTNFαDa的构象发生了变化.  相似文献   
6.
神经干细胞的体外培养和外源基因在其中的表达   总被引:14,自引:1,他引:13  
唐炯  喻红  林丽珠  吴昊泉  赵寿元  李昌本 《科学通报》2000,45(21):2303-2305
神经干细胞(neural stem cells,NSCs)是中枢神经系统中保持分裂和分化潜能的细胞,在研究神经系统的发育,分化以及治疗神经系统疾病中具有重要的作用,神经干细胞的移植已成为人们探索治疗神经系统疾病的新途径,成功地在体外对神经干细胞进行了分离和培养,并对其在胎鼠脑中的分布进行了鉴定,还证明带有GFP(green fluorescence protein)报告基因的腺病毒感染神经干细胞后  相似文献   
7.
人和小鼠神经干细胞的体外培养的分化研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
首次克隆了小鼠神经元标志性微管蛋白βⅢ基因,从核苷酸序列推导出小鼠与人两者之间在其羧基端有相同的EAQGPK六肽,进一步证实用抗人微管蛋白βⅢ单抗可检测小鼠神经干细胞分化成的神经元细胞,免疫组化鉴定显示小鼠神经干细胞在体积分数为1%胎牛血清(FBS)诱导下,可分化成神经元,星形胶质细胞,少突胶质细胞,同时培养了13周龄胎儿脑来源的人类神经干细胞,用特异性的抗人nestin抗体鉴定,全部为阳性细胞,但它们经诱导分化产生较不同寻常的细胞分化细胞和分化程度,在生长因子减半和1%FBS诱导条件下可分化为神经元和星形胶质细胞,而无少突胶质细胞分化,NF单抗检测证实为早期分化的神经元。  相似文献   
8.
血管内皮抑素不仅能特异性地抑制血管内皮生长,而且对血管形成和肿瘤生长也具有强烈的抑制作用。利用PCR法从人胎肝cDNA文库中克隆了人血管内皮抑素的编码序列,构建了重组质粒pRSendo,并在E.coli中表达,SDS-PAGE表明其表达产物为包涵体,此外,还对血管内皮抑素做了初步的纯化。  相似文献   
9.
应用等级聚类与非线性多维标度排序两种多变量统计分析方法研究了深圳湾潮间带底栖动物群落结构的时空变化,结果表明:1)底栖动物群在深圳福田A断面上与香港米博RB和ET断面上有较明显的差异,在A断面高潮区与中、低潮区也有较明显的空间差异。2)RB和ET断面底栖动物群落有明显的季节变化,温度、盐工和潮汐是影响群落结构变化的主要因子。  相似文献   
10.
半合成人肿瘤坏死因子TNF-α在大肠杆菌中高表达.发酵后收集菌体经超声破碎,然后在12000r/min4℃离心10min,上清经60℃热处理30min,离心上清用60%饱和度的硫酸铰沉淀,再依次经过SephadexG—25、DEAE—52纤维素和SephadexG—75柱层析,得到的纯化rhTNF—α比活性为2×107u/mg,回收率为24%.经过SDS—PAGE电泳和HPLC鉴定,纯度达95%左右,分子量为17×103.rhTN—α对热稳定性试验表明,—20℃下贮存一年或者0℃下贮存一个月,rhTNF—α活性仍保留50%.人胃癌和肝癌细胞株的体外抑瘤试验和接种小鼠的活体抑瘤试验表明,本实验取得的rhTNF—α具有明显的抑瘤生长作用.  相似文献   
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