一个新的人类精子发生相关蛋白激酶cDNA的克隆

蛋白磷酸化被认为在精子发生过程中起重要作用,从人类胎脑cDNA文库中得到2个克隆,分别长1840bp和1571bp,后者仅比前者在3非翻译区少了约300个核苷酸,二者拟编码322个氨基酸残基,基序分析发现其中含有1段明显的蛋白激酶其序,Northern杂交显示其在睾丸中有显著表达,暂命名为精了发生相关蛋白激酶,原位杂交表明精子发生相关蛋白激酶基因在性成熟小鼠睾丸中主要表达在生精小管的外层细胞中,而这一层细胞主要包含分裂的精原细胞的初级精母细胞,提示精子发生相关蛋白激酶可能在精子发生过程中起着比较重要的作用。     

人Rab蛋白cDNA的克隆和表达

从人胎脑cDNA文库中克隆到一种新的Rab cDNA,全长920bp,以编码213个氨基酸残基,该蛋白预测的分子质量为24567u,等电点7．34,经同源比较,该cDNA与GenBank数据库中登录号为X14964的Rab蛋白有83％的相似性和76％的相同性,将该cDNA克隆到经改造的PBV220表达质粒,转化DH5a菌株诱导表达出该蛋白,取24种不同组织的总cDNA各100ng,用该基因序列设计引物作PCR,结果在胎肝组织中检测到有明显条带,表明该Rab基因相对在胎肝有高表达。     

锌指结构基因HKR1在脑胶质瘤中的表达分析

从人胎脑cDNA文库中筛选到2612nt的锌指蛋白HKR1克隆,C端含有10个C2H2锌指结构,N端含有2个KRAB区域,基因芯片的原位杂交检测显示,HKR1基因表达在脑胶质瘤中明显升高,提示该基因可能是一条潜在的肿瘤相关基因。     

用基因芯片的方法对人酪蛋白激酶CK1γ1基因进行表达谱和聚类分析

将人酪蛋白激酶基因CK1γ1的cDNA与4096个胎脑cDNA一起点在玻璃介质的基因芯片上,用16种不同组织或细胞系的mRNA分别杂交该基因芯片,以正常人混合组织mRNA作共同对照,检测CK1γ1基因的表达谱变化,结果显示人CK1γ1基因在15种组织表达没有变化,但在肝癌组织中的表达却显著下调.采集的7例肝癌标本的cDNA与正常肝组织的cDNA重复7次芯片杂交,结果肯定了CK1γ1基因在肝癌组织中表达下调.同时,对芯片杂交结果通过聚类分析,按基因表达谱特征将CK1γ1基因与其他7种基因聚类在一起,提示CK1γ1基因可能在生物学作用方面与这7种基因有某种相关性.     

AP－PCR在肿瘤DNA多态性研究中的应用

首次将ＡＰ－ＰＣＲ应用于ＤＮＡ多态性研究．研究ＡＰ－ＰＣＲ的反应程度，找到实现稳定扩增的适宜条件，并发现模板ＤＮＡ浓度的变化在相当范围内不会改变扩增图谱；对肿瘤、瘤周组织以及正常组织进行分析，在１１个引物中发现２个引物的扩增结果是多态的．初步结论：多态现象与癌变相关．     

耐热FD DNA多聚酶在PCR中的应用条件

探索了用于多聚酶链式反应(PCR)的FD DNA多聚酶的最适反应条件在100μl的反应液中含有25 mmol/L的Tris-HCl(pH8.0),25 mmol/L的(NH_4)_2SO_4,1.5 mmol/L的MgCl_2,200 μg/ml的明胶,dNTP各200 μmol/L,模板量为3.3×10～(-2)Pg,引物量各为290 nmol/L,1～2 U的耐热FD DNA多聚酶,30次循环反应的系统为通用PCR最适反应系统。应用这一反应系统,混迹于大量DNA分子中的特定DNA片段可借助于琼脂糖凝胶电泳专一性地、快速而有效地检出。     

Fe65L2基因存在4种剪接形式

Ｆｅ６５Ｌ２是一种与老年痴呆症关蛋白－淀粉样肽前体蛋白相互作用的蛋白。报道了Ｆｅ６５Ｌ２基因的２种新的剪接形式,并证实了该基因存在４种剪接形式。这４种剪接形式是由同一个内含子中分别为６ｎｔ和２１ｎｔ的２段外显子序列按不同组合拼接而成的。     

锌指结构基因ZNF302序列的克隆与表达谱分析

从人脑脑cDNA文库中克隆到1条1685nt的锌指蛋白新基因cDNAycb gq ,命名为ZNF302,生物信息学分析表明,ZNF302的C末端含有13个保守的C2H2锌指结构;Northern-blot结果提示这一基因可能存在3．0kb和4.2kb的2种转录本。Unigene软件包分析,该基因定位于19号染色体19q13.2-13.3;cDNA基因芯片检测显示疤痕成纤维细胞经TGFβ1刺激和ECV304细胞经PMA,LPS刺激后,ZNF302基因表达明显升高,提示其与细胞增殖的正调控有关。     

人cDNA序列中二类甲硫氨酸密码子的区分

在人类cDNA序列确定全长基因的过程中，必须判断第一个ATG密码子是真正的起始密码子还是框内的非起始作用的甲硫氨酸密码子，在总结了这二类密码子上下文共有序列特征，周期性，密码子的碱基偏向性，以及编码的氨基酸的疏水性等方面差异的基础上，从模式识别的角度出发，将这二类密码子视为由此构成的多维特征空间中的二个模式类，应用费歇线性判别法进行分类器的设计，并对分类器的错误率进行估计，表明在这些特征下，这二类密码子可以区分，以此分类器的判断真正的起始密码子和非起始甲硫氨酸密码子，其准确率可达75％。     

对硝基酚磷酸酶pNPPase的基因克隆和序列分析

对硝基酚磷酸酶（p-nitrophenylphosphatase pNPPase)是一种对硝基酚磷酸盐（p-intophenylphosphate)为底物的酶，被广泛地应用于核酸标记，通过菌落原位显色法成功地从脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus)中克隆到了编码耐热pNPPase的基因，序列分析表明它是一个编码255个氨基酸的酶。