新的人羧肽酶A抑制物cDNA的克隆、定位和表达谱分析

从人的胎脑cDNA文库中,克隆到一条全新的人类羧肽酶A抑制物基因,此cDNA序列全长1049bp,包括翻译起始位点附近的Kozak序列,669bp 的开放读框以及3端的加尾信号,共编码222个氨基酸,它编码的蛋白与小鼠Latexin蛋白和大鼠Latexin蛋白分别有高达85％和84％的同源性,因此命名为人类LATEXIN基因,应用辐射杂交方法,将该基因伫位在人3号染色体3q24区段,位于分子标记D3S1605和D3S1553之间,采用基因芯片杂交的方法研究其在某些组织或细胞中的表达情况,发现在前列腺癌中表达量较高。     

一个新的人类精子发生相关蛋白激酶cDNA的克隆

蛋白磷酸化被认为在精子发生过程中起重要作用,从人类胎脑cDNA文库中得到2个克隆,分别长1840bp和1571bp,后者仅比前者在3非翻译区少了约300个核苷酸,二者拟编码322个氨基酸残基,基序分析发现其中含有1段明显的蛋白激酶其序,Northern杂交显示其在睾丸中有显著表达,暂命名为精了发生相关蛋白激酶,原位杂交表明精子发生相关蛋白激酶基因在性成熟小鼠睾丸中主要表达在生精小管的外层细胞中,而这一层细胞主要包含分裂的精原细胞的初级精母细胞,提示精子发生相关蛋白激酶可能在精子发生过程中起着比较重要的作用。     

人Rab蛋白cDNA的克隆和表达

从人胎脑cDNA文库中克隆到一种新的Rab cDNA,全长920bp,以编码213个氨基酸残基,该蛋白预测的分子质量为24567u,等电点7．34,经同源比较,该cDNA与GenBank数据库中登录号为X14964的Rab蛋白有83％的相似性和76％的相同性,将该cDNA克隆到经改造的PBV220表达质粒,转化DH5a菌株诱导表达出该蛋白,取24种不同组织的总cDNA各100ng,用该基因序列设计引物作PCR,结果在胎肝组织中检测到有明显条带,表明该Rab基因相对在胎肝有高表达。     

锌指结构基因HKR1在脑胶质瘤中的表达分析

从人胎脑cDNA文库中筛选到2612nt的锌指蛋白HKR1克隆,C端含有10个C2H2锌指结构,N端含有2个KRAB区域,基因芯片的原位杂交检测显示,HKR1基因表达在脑胶质瘤中明显升高,提示该基因可能是一条潜在的肿瘤相关基因。     

用基因芯片的方法对人酪蛋白激酶CK1γ1基因进行表达谱和聚类分析

将人酪蛋白激酶基因CK1γ1的cDNA与4096个胎脑cDNA一起点在玻璃介质的基因芯片上,用16种不同组织或细胞系的mRNA分别杂交该基因芯片,以正常人混合组织mRNA作共同对照,检测CK1γ1基因的表达谱变化,结果显示人CK1γ1基因在15种组织表达没有变化,但在肝癌组织中的表达却显著下调.采集的7例肝癌标本的cDNA与正常肝组织的cDNA重复7次芯片杂交,结果肯定了CK1γ1基因在肝癌组织中表达下调.同时,对芯片杂交结果通过聚类分析,按基因表达谱特征将CK1γ1基因与其他7种基因聚类在一起,提示CK1γ1基因可能在生物学作用方面与这7种基因有某种相关性.     

耐热碱性磷酸酯酶基因的DNA序列分析

从栖热菌中克隆到产耐热碱性磷酸酯酶（FD－TAP）基因并进行了DNA序列分析,结果表明此2．0kb的片段含有一个1056bp的开放阅读框,编码501个氨基酸的蛋白质,其N端有一26个氨基酸的信号肽．在起始密码子的上游5bp处有一个5＇－GGAGGT－3＇的SD序列．基因编码区的（G＋C）％为68．7％,第3位密码子（G＋C）％为92．7％．FD－TAP的氨基酸序列与大肠杆菌等生物的碱性磷酸酯酶氨基酸序列比较,相同性为27％,相似性为38％．中央β－折叠区及与活性中心相关的氨基酸残基高度保守．表明FD－TAP具有与大肠杆菌碱性磷酸酯酶相似的结构和作用机制．在相当于大肠杆菌碱性磷酸酯酶的His370至His412两个金属离子结合部位之间,FD－TAP有一72个氨基酸的插入片段,提示该插入片段与FD－TAP的高耐热性相关．     

人酪蛋白激酶CK1γ1 cDNA的克隆、染色体定位和组织表达谱分析

从人胎脑cDNA文库中克隆到一种新的酪蛋白激酶的cDNA，全长1754dp，拟编码438个氨基酸残基，该蛋白预测的分子质量为50272u，等电点9．37，经同源分析，该基因在大鼠的CK1γ1蛋白有94％的相似性，为人1型酪蛋白激酶－γ1亚型基因，人CK1γ1基因同时与15号与17号染色体的基因组部分序列完全一致，但RH法却将基因定位于15q22区段的D15S159－D15S125 Marker之间，多组织Northern膜（MTN）杂交分析显示，人CK1γ1基因在肝，结肠，肾和骨骼肌特别在肝组织中有高表达。     

α－球蛋白基因缺失的DNA扩增指纹图谱法分析

应用计算机辅助设计，选择α－珠蛋白基因簇中断裂好发部位或其外侧一致ＤＮＡ序列设计引物，在包含低温退火的条件下，扩增并分析α－珠蛋白基因缺失的ＤＮＡ指纹图谱，并据此对６１例α－地中海贫血病人进行了基因分型诊断．该方法稳定、可靠，可望用于临床诊断．