脑表达的X连锁基因的克隆、染色体定位和初步功能研究

通过筛选人18周胎脑cDNA文库,得到一条与Bexl和Bex2在高度同源性的基因,经HUGO／GDB人类基因命名委员会的同意命名为BEX1,Northern杂交发现该基因在脑和胰腺中高表达,在心脏,胎盘,肝脏和肾脏中有较低表达,而在脑和骨骼肌中没有表达,用斯坦福大学G3辐射杂交系将BEX1定位于Xq22上的Marker DXS990和DXS 1059之间,以BEX1作为杂交探针小对小鼠的原位杂交中发现BEX1的小鼠同源基因在小鼠的生精小管中有表达,而在间质组织中没有表达,在成年小鼠（出生10周）中BEX1同源基因在生精小管的外周细胞中表达,在中层细胞（包括次级精母细胞和精子细胞）和内层细胞（主要由精子组成）中没有表达,而在6周的处于青春期的小鼠中,BEX1的同源基因在整个生精小管中都有表达,但外层细胞的表达比中层和内层细胞的表达要高得多,而在3周的幼年小鼠中,BEX1的同源基因仅有微量表达,所以BEX1在小鼠中的同源基因在青春期表达上升,生精小管成熟后表达维持在一定的水平,这提示BEX1基因可能参与精子发生及生精小管发育的过程。     

肥厚性疤痕成纤维细胞的基因芯片分析

用基因芯片分析肥厚性疤痕与正常皮肤成纤维细胞在静息及TGF－beta3刺激下的表达谱的改变,正常成纤维细胞在TGF－beta3刺激前后的表达谱与肥厚性疤痕成纤维细胞在TGF－beta3刺激前的表达谱正相关（r=0.76037),刺激后2种成纤维细胞的表达差异与肥厚性疤痕成纤维细胞TGF－beta3刺激前后的表达谱差异正相关（r=0.826 762),构成以上差异的基因有620条,涉及细胞骨架蛋白,细胞周期蛋白,细胞因子,受体,转录因子及糖,蛋白质和酸代谢的酶类,未发现胶原蛋白I,III的表达水平的改变,结果提示：1,肥厚性疤痕成纤维细胞在静息状态下表现出与正常细胞受TGF－beta3刺激后相似的反应,其可能处于一种应激状态;2．TGF－beta3刺激后2种细胞的反应差异与肥厚性疤痕细胞的异常反应相关,TGF－beta3的作用背景可能是肥厚性疤痕的分子病理学基因之一,3．基因表达变化涉及细胞因子,细胞周期调控,凋亡等,其具备疾病遗传异质性的分子基础。4．胶原表达无明显上升,提示在肥厚性疤痕发病中,胶原纤维及细胞外基质堆积有复杂的分子生物学基础。     

一条新的人类组氨酰tRNA合成酶类似物全长cDNA的克隆及表达谱分析

从人胎脑文库中克隆到一条长为 12 19bp的cDNA ,它编码 2 3.4ku的肽链 .该肽链与葡萄球菌组氨酰tRNA合成酶N端同源 5 8% .利用humangenomicblast可将其定位于 2 0p11.Northern杂交显示胎脑中有一约1.5kb的单一条带 .基因芯片杂交分析表明 ,其在肺癌和前列腺癌组织中表达较高 .绿荧光蛋白亚细胞定位技术显示该蛋白存在于COS7细胞的细胞质中     

一条在人睾丸中高表达的新的环指蛋白(RNF20)

从人胎脑构建的cDNA文库中,通过大规模测序筛选的方法获得一条新基因,该基因蛋白序列含有1个环指（RING finger)基序及2个进核信号（nuclear localization signal NLS)序列,钭此基因命名为RNF20（RING Finger 20),用放射杂交细胞系（Radial hybrid RH)方法定位此基因在人染色体的9q22上,Northern杂交表明,其mRNA在睾丸组织中高表达,用小鼠睾丸做原位杂交表明,小鼠的同源基因在精原细胞及初级精母细胞中高表达,未成年小鼠睾丸中的精原细胞没有发达,提示RNF20可能参与精子发生的调控作用。     

人Rab蛋白cDNA的克隆和表达

从人胎脑cDNA文库中克隆到一种新的Rab cDNA,全长920bp,以编码213个氨基酸残基,该蛋白预测的分子质量为24567u,等电点7．34,经同源比较,该cDNA与GenBank数据库中登录号为X14964的Rab蛋白有83％的相似性和76％的相同性,将该cDNA克隆到经改造的PBV220表达质粒,转化DH5a菌株诱导表达出该蛋白,取24种不同组织的总cDNA各100ng,用该基因序列设计引物作PCR,结果在胎肝组织中检测到有明显条带,表明该Rab基因相对在胎肝有高表达。     

锌指结构基因ZNF302序列的克隆与表达谱分析

从人脑脑cDNA文库中克隆到1条1685nt的锌指蛋白新基因cDNAycb gq ,命名为ZNF302,生物信息学分析表明,ZNF302的C末端含有13个保守的C2H2锌指结构;Northern-blot结果提示这一基因可能存在3．0kb和4.2kb的2种转录本。Unigene软件包分析,该基因定位于19号染色体19q13.2-13.3;cDNA基因芯片检测显示疤痕成纤维细胞经TGFβ1刺激和ECV304细胞经PMA,LPS刺激后,ZNF302基因表达明显升高,提示其与细胞增殖的正调控有关。     

半乳糖凝集素PPL13的表达纯化及免疫组织化学研究

在E．coli M15中表达纯化半乳糖凝集素PPL13(placenta protein lectin13)，制备兔抗人PPL13多克隆抗体。以免疫组织化学法检测PPL13在人胎盘及脐静脉的表达情况．结果显示PPL13分布在胎盘及脐静脉的内皮细胞中．提示PPL13可能与胎盘及脐静脉内皮细胞的功能相关．