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利用二硫键法制作寡核苷酸DNA Microarray,并将该技术应用到HCV检测中,建立了一种快速、灵敏、安全的寡核苷酸DNA Microarray丙肝病毒检测体系。该体系还可同时对占中国丙肝病毒75%左右的HCV1b亚型进行分型。另外,在丙肝病毒基因组RNA反转录的过程中采用随机引物,从而为进一步的多种肝炎病毒的寡核苷酸DNA Microarray混合检测奠定了基础。 相似文献
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FD-TRT耐热逆转录酶的特性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
殷长传!遗传工程国家重点实验室 颜学恒!遗传工程国家重点实验室 郑佐华!遗传工程国家重点实验室 黄啸宇!遗传工程国家重点实验室 毛裕民!遗传工程国家重点实验室 《复旦学报(自然科学版)》1998,37(2):225-228
从嗜热细菌FD3009中克隆并分离纯化得到的耐热逆转录酶(FD-TRT),逆转录反应在65℃高温下进行,可克服常温逆转录酶的许多缺点,以酵母核糖体rRNA为模板,以与255和18S rRNA匹配的寡聚脱氧核苷酸为引物,探明了FD-TRT的最适反应条件: 25mmol/L Tris-HCl(pH 8.5,25℃),25 mmol/L(NH4)2SO4,2 mmol/L MnCl2,100 μg/ml明胶.5 unit RNasin,250 mmol/L 4种 dNTP, 1μCi3 H-dCTP, 12ug RNA,25 pmol引物,并在此条件下测得 FD-TRT和 Taq DNA 聚合酶逆转录活力与聚合酶活力的相对比值分别为0.056,0.0045. 相似文献
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鸭血烯酸是由鸭血清中提取的不饱和脂肪酸.在体外实验中具有使艾氏腹水癌细胞膨胀失活的作用.用于治疗艾氏癌患鼠,可抑制其腹水癌和实体瘤的生长.与环磷酰胺(CPA)或氟脲嘧啶(SFU)相比,鸭血烯酸的毒性较低,疗效较高,约20%~40%被治愈的患鼠,可长期存活. 相似文献
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α—珠蛋白基因的PCR检测 总被引:2,自引:1,他引:1
用多对引物的复合PCR技术,分别扩增α-珠蛋白基因族中α1和α2基因片段;参照β-珠蛋白基因PCR扩增产物量,判断α1和α2基因是否正常,是否为缺失的纯合子或杂合子,对α-地中海贫血症先征者家系基因型进行PCR分型诊断。 相似文献
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应用PCR技术检测α—地中海贫血SEA型携带者 总被引:1,自引:0,他引:1
SEA型α-地中海贫血症在东南亚的地区很普遍,在我国广西壮族自治区,发病率也很高。应用跨SEA型5端和3端缺失断裂点的三引物进行PCR扩增,在有该缺失的染色体上扩增一条194bp的特异条带,在无该缺失的染色体上扩增一条287bp的特异条带,可以清楚地区分SEA型缺失杂合子,纯合子和正常个体。检测40例α-地中海贫血症患者的结果表明:SEA型缺失杂合子28例(70%),SEA缺失的高发区,此法在临床 相似文献
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耐热碱性磷酸酯酶(TAPND27)的表达、纯化和性质测定 总被引:5,自引:0,他引:5
通过分离纯化和酶学性质测定,确定耐热碱性磷酸酯酶(TAPND27)为八聚体,最适反应温度为65℃,在99℃保温30min仍保留49.4%的活性,在质量分数为5%的Tween20体系中依然有70%以上的酶活性,并且有很宽的pH稳定范围。这表明TAPND27适合在高温条件和高浓度去污剂的体系中应用。 相似文献
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甲硒氨酸多波长反常散射法是国际上90年代发展的蛋白质晶体结构测定的新方法,该法得以实施的首要一步是获得硒取代(硫)的高纯蛋白质。通过亚克隆将编码耐热邻苯二酚2,3双加氧酶(简称TCTD)的基因PHEB克隆至表达载体pRSET,得到了高表达质粒pRSET-PHEB,转入Met缺陷的菌株B834DE3。通过诱导表达和分离纯化得到了甲硒氨酸参入的TCTD。经质谱测定发现TCTD的所有7个甲硫氨酸都被甲硒 相似文献
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脑表达的X连锁基因的克隆、染色体定位和初步功能研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过筛选人18周胎脑cDNA文库,得到一条与Bexl和Bex2在高度同源性的基因,经HUGO/GDB人类基因命名委员会的同意命名为BEX1,Northern杂交发现该基因在脑和胰腺中高表达,在心脏,胎盘,肝脏和肾脏中有较低表达,而在脑和骨骼肌中没有表达,用斯坦福大学G3辐射杂交系将BEX1定位于Xq22上的Marker DXS990和DXS 1059之间,以BEX1作为杂交探针小对小鼠的原位杂交中发现BEX1的小鼠同源基因在小鼠的生精小管中有表达,而在间质组织中没有表达,在成年小鼠(出生10周)中BEX1同源基因在生精小管的外周细胞中表达,在中层细胞(包括次级精母细胞和精子细胞)和内层细胞(主要由精子组成)中没有表达,而在6周的处于青春期的小鼠中,BEX1的同源基因在整个生精小管中都有表达,但外层细胞的表达比中层和内层细胞的表达要高得多,而在3周的幼年小鼠中,BEX1的同源基因仅有微量表达,所以BEX1在小鼠中的同源基因在青春期表达上升,生精小管成熟后表达维持在一定的水平,这提示BEX1基因可能参与精子发生及生精小管发育的过程。 相似文献