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111.
人类抗砷相关基因hARRG全长cDNA的克隆和在E.coli中表达 总被引:2,自引:0,他引:2
通过对构建的人胎脑cDNA文库进行大规模测序,发现一条人类新基因,序列与仓鼠asr2序列高度同源,达88%,命名为人类抗砷相关基因(human arsenic resistance related gene.hARRG),hARRG与抗砷基因相关序列ARS2(AF082871)几乎完全全同源,仅比它短253bp,hARRG并不是全长基因而仅是一个cDNA片段,为了获得hARRG全长cDNA,运用Northern blot电子RACE和5-SMART-RACE的方法克隆了一条2999bp 的hARRG全长cDNA,通过Unigene染色体定位于7q21.3,经过生物信息学分析发现,该cDNA有完整的读码框,编码一个788个氨基酸的蛋白,预计分子质量为89.2ku,并在大肠杆菌中获得了成功表达。 相似文献
112.
分子生物学技术及其在环境样品微生物分析中的应用 总被引:4,自引:0,他引:4
综述了荧光原位杂交(FISH)、多聚酶链式反应(PCR)、DNA克隆及DNA测序等分子生物学技术,并将这些分子生物学技术应用到淡水水体底泥厌氧氨氧化茵(anammox菌)和好氧氨氧化菌的原位检测中,从底泥样品中鉴别出这两种细菌,其中好氧氨氧化菌属于亚硝酸单胞菌属,厌氧氨氧化菌属于anammox菌的Brocadia分支,为进一步研究淡水环境中氮的微生物循环过程提供了一定的依据. 相似文献
113.
人组氨酰-tRNA合成酶基因的克隆与表达 总被引:3,自引:0,他引:3
用RT-PCR方法从人胎盘总RNA中获得编码人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)基因的全序列,选用IMPACT-CN系统中的pTYB11,构建克隆与表达载体,转化大肠杆菌ER2566.经筛选与鉴定,得到3个阳性重组子,对其进行诱导表达获得Jo-1融合蛋白,western-blotting检验结果显示,该融合蛋白具有Jo-1免疫原性和免疫特异性. 相似文献
114.
hedgehog家族基因在动物胚胎多种发育过程的信号传导中起着关键作用.采用简并引物、套式PCR和RT-PCR方法获得青岛文昌鱼hedgehog基因片段,并对其所推测的氨基酸序列与hh基因家族成员小鼠Shh、Ihh、Dhh,鸡、爪蟾和斑马鱼Shh及果蝇hh等的相应片段进行同源性分析.它们的同源性分别为56%,53%,50%,53%,53%,53%和45%.研究结果支持文昌鱼具有1个,可能也仅有1个hedgehog家族基因. 相似文献
115.
纳豆激酶基因重组表达载体的构建及其稳定性 总被引:8,自引:1,他引:7
利用PCR方法从分泌纳豆激酶的纳豆杆菌基因组DN中扩增纳豆激酶基因,将该基因克隆到表达载体PBV220上,筛选重组子,通过限制性内切酶和PCR技术分析,初步确定该重组子所携外源基因为纳豆激酶基因,用凝块溶解时间法(CLT)测出表达产物具有溶解血栓活性,证明该基因可在大肠杆菌中表达,对重组菌中重组质粒的稳定性进行研究,结果表明质粒的插入对宿主菌的生长没有太大影响,该质粒在宿主菌中具有良好的分离稳定性,但结构稳定性较差,SDS-PAGE分析结果表明基因产物为分泌型,蛋白表达量占菌体蛋白的12%左右。 相似文献
116.
应用RT-PCR技术,从两株分泌具有中和活性的抗A型产气荚膜酸菌α毒素单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株2E3和1A8中,分别扩增出抗体VH和VL基因,用Linker(Gly4Ser)3基因,将VH和VL基因连接成ScFv基因2E3-ScFv和1A8-ScFv,并将其克隆至pGEM-T载体中,经核苷酸序列分析证实,VH和VL基因以及Linker基因拼接正确,2E3-ScFv基因全长为729bp,经计算机分析,VH和VL基因均为新发现的基因序列,符合功能性重排的鼠抗体可燮区基因特征,2E3-ScFv的VH和VL基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ(B)和轻链kⅢ家簇;而1A8-ScFv的VH和VL基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ(A)和轻链кⅥ家簇。 相似文献
117.
植物基因的克隆与转化研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
朱玉贤 《河北科技大学学报》1999,20(2):5-9,28
综述了近20a来植物基因工程、特别是DNA重组技术和基因遗传转化技术的发展历程,比较了各种分子克隆和转化方法的优劣,将有助于广大青年学者了解并掌握现代分子生物学的最新动态 相似文献
118.
A DNA fragment about 1.5 kb has been isolated from spleen of adult Chinese swine by RT-PCR. The DNA fragment encodes immunoglobulin IgG H chain gene. Sequencing analysis showed that the DNA fragment is 1 425 bp long, complete CDS. The C region of the gene has been classified as Subclass Ig γ3, and is the same as reported by Sun et al., but V region of the present gene is 42 bp less by comparison. The gene has been ligated into expression vector pET-3b (NSEB)( - ). A protein about 52 ku has been expressed in E. coli with an expression level of about 21 % . 相似文献
119.
利用人胚胎肝组织提取总RNA,从总RNA 中分离纯化出m RNA,经逆转录得到cDNA 第一条链,并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物,进行PCR 合成人锰超氧化物歧化酶cDNA 基因,将所得cDNA 克隆到质粒pBluescriptSK 上,转化大肠杆菌DH5α细胞,进行诱导表达筛选,将筛选的克隆进行cDNA 全序列测定 相似文献
120.
2株黄瓜花叶病毒卫星RNA的cDNA克隆及序列分析 总被引:1,自引:1,他引:0
在辣椒上获得2株黄瓜花叶病毒卫星RNA(CS1和CS2),通过cDNA克隆和测序并将其与35个已知的卫星RNA序列进行同源比较.结果表明,CS1和CS2的全长序列分别为336,382nt;与CS2、Rs和Yns比较,CS1从第80位起有连续30多个核苷酸的缺失.由此推测,卫星RNA的二级结构也随这些核苷酸的缺失而发生了改变.将CMV卫星RNA分为4个组,卫星RNA CS1属于中小卫星组小卫星亚组Ⅱ,CS2属于长卫星组,CS1与其他来源的卫星RNA的同源性为80.4%~93.7%,CS2与其他来源的卫星RNA的同源性则为75%~94.8%;两之间的序列同源性为86%.CMV卫星RNA的序列同源性和分组与卫星RNA分布的地区和寄主来源并无直接联系. 相似文献