非洲猪瘟病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种快速、准确、特异的非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）定量检测方法，根据TaqMan探针荧光定量分析原理，对ASFV核酸进行了实时荧光定量PCR分析．借助计算机软件辅助，对ASFV基因序列及检测引物和探针进行了优化筛选，利用pET-ASFVP72质粒作为参比模板对PCR反应的Mg^2-、引物、探针浓度等参数进行了优化，其最佳浓度分别为4．5mmol／L，400nmol／L和500nmol／L．同时，对灵敏度、特异性、定量线性关系、精确度等进行了评估，最低检出量为10^2个拷贝数的质粒，特异性为100％，CT（Cycle Threshold）值的变异系数CV小于5％．对送检的15份（是否感染ASFV不确定）猪肉样品进行检测，结果全为阴性．试验表明，所建立的实时荧光定量PCR检测方法能够快速、准确、特异、灵敏地对ASFV核酸进行定量分析，从而为非洲猪瘟的检测提供了一个新的、可靠的方法．     

两种抗α毒素单链抗体基因的序列分析

应用RT－PCR技术,从两株分泌具有中和活性的抗A型产气荚膜酸菌α毒素单克隆抗体（McAb)的杂交瘤细胞株2E3和1A8中,分别扩增出抗体VH和VL基因,用Linker(Gly4Ser）3基因,将VH和VL基因连接成ScFv基因2E3－ScFv和1A8－ScFv,并将其克隆至pGEM-T载体中,经核苷酸序列分析证实,VH和VL基因以及Linker基因拼接正确,2E3－ScFv基因全长为729bp,经计算机分析,VH和VL基因均为新发现的基因序列,符合功能性重排的鼠抗体可燮区基因特征,2E3－ScFv的VH和VL基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ（B）和轻链kⅢ家簇;而1A8－ScFv的VH和VL基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ（A）和轻链кⅥ家簇。     

加强教材建设与评价保证教学质量

现阶段教材建设是高等学校最基本的教学建设之一,对于提高教育教学质量,保证人才培养规格,造就更多的适应新世纪社会需求的高素质人才,具有长期性、基础性的重要作用。我们从制订教材选用原则、编写材料推荐目录、履行教材征订审核手续以及教材质量评价等进行了初步探索,取得了较好的成效。     

一种可作为抗金黄色葡萄球菌感染的新型广谱疫苗--PNSG

金黄色葡萄球菌是医院感染中最常见的病原菌，也是社会上大范围感染的主要病原菌．金黄色葡萄球菌感染可引起心内膜炎、骨髓炎、脓毒性关节炎、肺炎和脓肿等疾病．金黄色葡萄球菌也是重要经济动物的主要病原菌．金黄色葡萄球菌对青霉素这样的首选药物产生抗药性后引起的主要问题是，用甲氧西林治疗甲氧西林抗性的金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓ．Ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）引起的感染无效，这就使金黄色葡萄球菌引起的疾病越来越流行，尤其是在住院的病人中．人们更为忧虑的是，最近在几个国家中，ＭＲＳＡ…     

大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒PY-α的构建

利用分子生物学方法，以含人结核杆菌热休克蛋白（HSP）70基因全长序列的质粒pMT-70为模板，扩增出hsp70启动子，将其定向克隆于pUC-19，构建成重组质粒pY6013；然后以重组质粒pIJK-1为模板，扩增出分枝杆菌α信号肽基因并将其克隆到pY6013闰中hsp70启动子的下游，得到了大肠杆菌－分枝杆菌表达质粒pY-α。     

大肠杆菌菌毛抗原K99基因的亚克隆及核苷酸序列测定

利用PCR技术 ,从含有大肠杆菌菌毛抗原K99基因的质粒pX5K中扩增出 0 .4kb的K99菌毛抗原基因 ,然后将其亚克隆到pGEM T easy载体上 ,并转化至受体菌JM10 9中 ,采用碱性裂解法提取质粒DNA后 ,经NcoI和EcoRⅠ双酶切分析和核苷酸序列分析 ,证明插入的K99基因片段具有正确的核苷酸序列     

大肠杆菌K88ac,ST1,LTB基因融合

利用PCR技术,从大肠杆菌C83902质粒中扩增出K88ac基因,再从含ST1-LTB融合基因的重组质粒pXSLT1中扩增出ST1-LTB融合基因,构建了含K88ac-ST1-LTB融合基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pET-28KSL).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pET-28KSL含有K88ac-ST1-LTB融合基因,且基因序列和阅读框架正确.经ELISA检测,重组菌株表达的K88ac-ST1-LTB融合蛋白能够被ST1,LTB单抗和K88ac抗体识别,表明已成功构建了K88ac-ST1-LTB融合基因,并实现了在重组大肠杆菌中的表达.     

基因工程开放实验中的几点体会

基因工程开放实验能够培养学生的实践动手能力,增强学生学习专业知识的兴趣,提高实验室资源的利用率,密切师生关系,增强教师的责任感。基因工程开放实验最终有利于该课程教学质量的提高和培养学生的创新能力。     

pMAL-p2X系统表达SLA-Ⅰ复合体蛋白

SLA-Ⅰ/pMAL-p2X为人工构建的原核表达体系.为获取最佳表达的SLA-Ⅰ复合体蛋白及其可溶性表达含量,设计实验对其进行表达优化(pH值、温度、菌体密度、IPTG浓度、诱导时间),SDS-PAGE检查目的蛋白的表达.另外检查目的蛋白的可溶性表达含量.结果显示,SLA-Ⅰ在pMAL-p2X的最佳表达条件为pH=8.0、T(温度)=37 ℃、OD600=1.0、IPTG=0.4 mmol/L和t(诱导时间)=5 h;证明目的蛋白可溶性表达含量占总表达蛋白的70%左右.研究表明pMAL-p2X系统适合于生产可溶性的SLA-Ⅰ复合体蛋白,便于今后进一步研究SLA-Ⅰ类分子结构和功能.     

基因工程实践教学改革的探索

基因工程是生物工程专业的主干课程,重点培养学生的创新精神、实践能力和综合素质。该文根据生物工程专业的特点和人才培养要求,构建了基础综合实验-校内专业实习-研究创新实验“三层次”实践教学体系,介绍了实践教学的设计原则、实践教学的环节与内容、实践教学的组织与实施、实践教学的考核与收获。通过实践教学的改革,培养了学生分析问题、解决问题和实验操作能力,从而达到培养学生创新精神和实践能力的目的。