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纳豆激酶基因重组表达载体的构建及其稳定性 总被引:8,自引:1,他引:7
利用PCR方法从分泌纳豆激酶的纳豆杆菌基因组DN中扩增纳豆激酶基因,将该基因克隆到表达载体PBV220上,筛选重组子,通过限制性内切酶和PCR技术分析,初步确定该重组子所携外源基因为纳豆激酶基因,用凝块溶解时间法(CLT)测出表达产物具有溶解血栓活性,证明该基因可在大肠杆菌中表达,对重组菌中重组质粒的稳定性进行研究,结果表明质粒的插入对宿主菌的生长没有太大影响,该质粒在宿主菌中具有良好的分离稳定性,但结构稳定性较差,SDS-PAGE分析结果表明基因产物为分泌型,蛋白表达量占菌体蛋白的12%左右。 相似文献
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双歧联菌株微胶囊的制备条件 总被引:4,自引:0,他引:4
研究了双歧杆菌微胶囊的制备条件,以ESMⅡ为囊材,以95%的乙醇为囊材溶剂,提高了微胶囊的安全性。确定了ESMⅡ的最佳浓度为8%,并进一步确定了复合囊材中所添加辅料的浓度和操作条件。在此条件下制备的双歧联菌株微胶囊具有良好的耐酸性和肠溶性。 相似文献
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低频超声波对大豆胰蛋白酶抑制素的处理效果 总被引:3,自引:0,他引:3
采用20kHz的低频超声波对大豆胰蛋白酶抑制素(STI)进行了处理。结果表明,超声波对经纯化了的鲍曼-贝尔克抑制素(BBI)几乎不起钝化作用,对生豆奶中天然存在的STI的钝化效果要比对从大豆中提取纯化的STI好得多,说明纯化了的STI似对超声处理较稳定;豆奶中大分子蛋白组分11S和7S的存在有助地STI的纯化;低频超声波对生豆奶中的BBI似乎有轻微的激活作用;在生豆奶中添加半胱氨酸、亚硫酸钠的胃液 相似文献
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PCR扩增纳豆激酶基因的程序优化 总被引:5,自引:1,他引:4
研究了利用PCR从纳豆菌基因组DNA中扩增纳豆激酶基因的最优化条件,得到PCR反应在本研究中的最重要的三个参数值为:模板量10ng;Mg^2+浓度1.5mmol/L;退火温度60℃。在这种优化程序下进行PCR反应,获得了特异、高效和忠实的纳豆激酶基因产物。 相似文献
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构建了编码乙肝表面抗原中蛋白的卡那霉素抗性真核表达质粒pVAX-CpGS2S,其中通过PCR克隆了若干CpG motifs到质粒载体中。经酶切鉴定和测序正确后将重组质粒体外转染COS7细胞,ELISA法检测上清液中的HBsAg呈阳性,说明重组质粒pVAX-CpGS2S在体外能够有效表达HBsAg,为探讨CpG motifs克隆入DNA疫苗载体后对体内免疫反应的影响打下基础。 相似文献
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克隆hCbfa1的cDNA基因,构建其重组腺病毒载体,以用于研究hCbfa1腺病毒载体在人造骨移植中的作用.将hCbfa1的cDNA目的片段插入腺病毒柯氏质粒PAxCAwt中,再将此质粒与腺病毒DNA末端蛋白复合物共转染293个细胞,通过同源重组构建hCbfa1重组腺病毒载体.重组得到的阳性克隆经酶切、测序鉴定正确,包装纯化后,检测得病毒滴度为2×109PFU/mL,从而成功地构建了hCbfa1重组腺病毒载体,为下一步应用到人造骨移植的转基因治疗打下了基础. 相似文献
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纳豆激酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 总被引:8,自引:3,他引:8
构建pPICZαA-NK重组质粒,并转化入E.coli TOP-10中,得到转纳豆激酶基因工程菌,提取重组质粒经单酶切,双酶切,PCR分析及序列测定,证明克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为纳豆激酶基因,将重组质粒pPICZαA-NK线性化后,分别转化毕赤酵母GS115与KM71,在含Zeocin^TM的选择性YEPD平板筛选到重组酵母,经检测重组酵母发酵上清液中具纳豆激酶溶纤活性,SDS-PAGE电泳结果表明外源蛋白的表达量占菌体蛋白的10%左右。 相似文献
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超声钝化大豆胰蛋白酶抑制素的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用低频超声波处理大豆提取液(豆奶)中的大豆胰蛋白酶抑制素(STI),并探讨了温度,pH,处理时间,超声波振幅(Ampl.),豆奶浓度和离子强度诸因素对STI超声钝化的影响,正交优化试验的结果表明温度是最主要的影响因素,其次是处理时间、Ampl.和pH。超声钝化STI活性的最适条件是:浓度ω=3%的豆奶,采用振幅为75%的低频超声波,在80℃和pH7.0的条件下处理5min(脉冲3s:2s).在此条件下,豆奶中约70%73%的STI活性可被钝化由于STI中有一部分是稳定性很高的鲍曼-贝尔克(Bowman-Birk)抑制素,故经低频超声处理后仍有约30%的STI活性残留若采用较高频率的超声处理,钝化效果可能会进一步提高 相似文献