染料脱色酶特性研究

从脱色优势菌ＮＤ１ 提取脱色酶,对酶特性进行研究．结果表明酶的最适作用条件为ｐＨ ７,３７℃,无氧环境,反应需ＮＡＤＨ 的参与;纯化结果表明经ＤＥＡＥ柱层析及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００ 凝胶层析后脱色速率分别提高１０ 倍和５０倍,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００ 凝胶层析中２～４ 管蛋白具有偶氮和蒽醌染料脱色酶活性,６～１２ 管具有蒽醌染料脱色酶活性．     

蜂房芽孢杆菌B－91几丁质酶的合成条件

从厦门地区牡养殖场分离筛选到一株产几丁质酶活力较高的蜂房芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌ－ｌｕｓａｌｖｅｉ）Ｂ－９１，研究了该菌几丁质酶的合成条件。结果表明：该菌在以几丁质为碳氮源的培养基中生长，能合成多量的几丁质酶。酶的合成受各种几丁质诱导。在产酶培养基中添加不同的有机或无机氮源，均能促进酶的合成，而葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖对酶合成有阻遏作用。该菌几丁质酶合成的最适培养基初始ｐＨ为６．８，最适温度为２８℃。在２５０ｍｌ三角瓶装５０ｍｌ培养基，接种量为２％，振荡培养６０ｈ时，培养液中几丁质酶活力可达２２１２ｕ／ｍＬ．     

黑曲霉胞外葡萄糖淀粉酶的纯化及特性

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ７２８）的粗酶液，经硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤脱盐，ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换柱层析和ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－１００凝胶层析纯化，经ＰＡＧＥ鉴定为一条带ＳＤＳ凝胶电泳测定分子量为７００００．金属离子Ｆｅ３＋对该酶有一定的抑制作用，该酶的等电点为３．７，最适ｐＨ为４，最适温度为６０℃．Ｅ２８０１％为１５．７２，Ｋｍ值为０．１１２×１０－３ｍ．     

嗜盐菌碱性淀粉酶特性研究

碱性嗜盐菌ＨａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐＨ－３７１产生的淀粉酶经超滤、硫酸铵沉淀和ＤＥＡＥ－纤维素纯化后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳为一条带，分子量为２７０００，等电点３．７，最适反应ｐＨ９．０，最适反应温度６５℃．ＮａＣｌ是维持酶活性的必需因子，酶解产物为麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖和麦芽五糖     

用酶联免疫印渍技术分析绵羊东毕血吸虫成虫抗原

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、电泳转印技术和固相免疫标记技术结合的酶联免疫印渍技术（ＥＴＩＢ），首次分析东毕血吸虫成虫抗原。抗原蛋白组分显示：ＳＤ－ＰＡＧＥ共将绵羊东毕血吸虫成虫抗原分离出４２条带；经ＥＴＩＢ分析，与阳性血清反应有１２条带，其中主带有４条，分子量分别为３５、８０、９２和９４ｋＤ，试验表明，这四个分子量的蛋白质具有较强的反应原性，可做为东毕血吸虫的诊断抗原。     

鼠脑己糖激酶的纯化及铝离子对该酶的影响

应用蔗糖溶液提取,葡萄糖－６－磷酸溶解,ＤＥＡＥ－纤维素离子交换柱层析,可从鼠脑中纯化出己糖激酶（ＨＫ）,纯化的ＨＫ在ＰＡＧＥ中,呈现单一的蛋白质染色带,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其分子量为９７７２３。该ＨＫ受Ａｌ＾３＋的抑制,Ａｌ＾３＋对该ＨＫ的抑制作用表现为所谓的“负协同作用”现象,即在低底物（ＡＴＰ）浓度下表现为非竞争性抑制,在高底物浓度下表现为竞争性竞争性抑制。柠檬酸钠、ＥＤＴＡ和邻苯二酚可拮     

扩展青霉（Penicilliumexpansum）PF868脂肪酶的纯化 …

扩展青霉（Ｐ．ｅｘｐａｎｓｕｍ）ＰＦ８６８所脂肪酶通过硫酸铵沉淀纤维素柱层析以及Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ２００柱层析等步骤被纯化了７４倍。最终比活力为６９．７ｕ／ｍｇ。纯化后的脂肪酶经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯和微内径高效液相色谱纯。分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ确定为２８．４４ＫＤ。脂肪酶Ｎ－端氨基酸序列测定的结果是：ＡＴＡＤＡＡＡＡＦＰＤ－这与其他一些真菌产的脂肪酶的序列具有国闫的同源性。     

麦洼牦牛和犏牛乳中上皮粘蛋白PAS—Ⅰ的研究

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了麦洼牦牛和犏牛乳中上皮粘蛋白ＰＡＳ－Ｉ，结果凝胶经银染后ＰＡＳ－Ｉ仅显示出一条区带，其分子量与中国荷斯坦牛乳中ＰＡＳ－Ｉ相近。实验还观察到乳中ＰＡＳ－Ｉ的含量及在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上的迁移率存在个体差异。     

小麦巯基蛋白酶抑制剂的纯化和性质研究

将小麦麦胚和麸皮的浸取液，经加热和利用ｐＨ沉淀，获得疏基蛋白酶抑制剂粗品；再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ柱上得到均为单一蛋白带的小麦ＣＰＩ纯品。其纯化度为原料浸液的４２倍。由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＣＰＩ分子为单一肽链     

激光复合诱变黑曲霉原生质体选育热稳定菊粉酶高产菌

以菊粉酶产生菌黑曲霉ＡＳ－４原生质体为对象,经激光和亚硝基胍复合诱变,从大量突变株中最终选育出高产热稳定的菊粉酶产生菌ＡＬ－１５４．在以菊芋提取液为碳源、玉米浆加０．３％酵母膏为氮源的基本培养基中,菊粉酶活力达１４６．３ｕ／ｍＬ,比出发株提高近３倍．其产酶最适营养条件为：起始ｐＨ４．５～５．０,２８～３０℃,３６ｈ时产酶量达最高．酶作用最适条件为ｐＨ５．０,６０℃;该酶遗传性能稳定,热稳定性强,６０℃保温处理２ｈ,其酶活性不变,６５℃保温３０ｍｉｎ,仍保留９８％的初始酶活     

10种蔬菜内生细菌的分离筛选

以抑制植物主要病害病原菌和内生防病相关酶活性为评价标准,从蔬菜作物体内分离筛选植物内生细菌资源。从苦瓜、丝瓜、空心菜、大豆等10种蔬菜体内分离到101株细菌,发现内生细菌在不同种类的蔬菜中出现的频率不同,其中丝瓜叶上的内生细菌数量最多,洋葱体内分离到的内生细菌数量最少。运用平板对峙法从中筛选出了对黄瓜枯萎病菌、番茄青枯病菌、水稻细条病菌、荔枝霜疫霉病菌等有较强拮抗作用的菌株,获得对以上4种病菌均有拮抗作用的内生细菌有41株,占总株数的40．6％。对101株细菌进行纤维素酶、蛋白酶和几丁质酶活性测定表明,同时具有3种酶活性的菌株有32株,占总菌数的31．7％。从中选出13株拮抗效果较好的内生细菌。经初步鉴定均属于芽孢杆菌属（Bacillus sp）。进一步对筛选获得的同时对以上4种病原菌均有拮抗作用,且具有纤维素酶、蛋白酶和几丁质酶活性的13号、14号、59号和82号菌株进行16SrDNA序列分析,表明4个菌株均为枯草芽孢杆菌（B．subtilis）或其近缘种。     

产酶苦豆子内生细菌筛选及其活性菌株鉴定

对苦豆子健康植株和种子内的内生细菌进行分离,共分离获得41株内生细菌.对41株菌株进行了分泌胞外淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶特性的研究.结果表明,有80.5%的菌株具有蛋白酶活性;有78.0%和61.0%的菌株具有淀粉酶和纤维素酶活性;具有几丁质酶和葡聚糖酶活性的菌株则较少.经16SrRNA基因序列分析鉴定,6株高活性产酶菌株与枯草芽孢杆菌属(Bacillus subtilis)、韩国丛毛假单胞菌(Pseudomonas koreensis)、固氮阴沟肠细菌(Enterobacter cloacae)、苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)和嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)亲缘关系较近,核苷酸序列一致性在98%以上.     

胶体几丁质诱导红曲霉产几丁质酶的研究

本文采用胶体几丁质为底物,研究了红曲霉液态发酵产几丁质酶.研究结果表明:胶体几丁质的添加能有效诱导红曲霉合成几丁质酶.在培养基中添加0.8%(W/V)胶体几丁质的同时,添加0.4%(W/V)葡萄糖,有利于红曲霉的生长以及几丁质酶的合成,发酵48h几丁质酶活力达到最高的0.3504U/mL.     

绿豆几丁质酶的纯化和酶学性质分析

利用亲和色谱Affi-gel和离子交换色谱SP-Toyopearl从绿豆种子中分离纯化出几丁质酶.纯化的蛋白通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯,分子质量为30.8kDa.还原和非还原状态下的几丁质酶蛋白均显示单一区带,说明该几丁质酶为单倍体蛋白.通过等点聚焦法测得pI为6.3.该酶的最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.     

昆虫几丁质酶的进化与保守性质的比较基因组学研究

昆虫几丁质酶家族属于第18家族糖苷键水解酶,主要参与昆虫蜕皮、细胞增殖和免疫等生理过程。在7个物种基因组数据中通过BLASTP和PSI-BLAST的方法获得131条chitinase和chitinase-like的同源蛋白质,利用隐马尔科夫算法,找到了几丁质蛋白的保守模体区域。通过进化树分析,将所选的蛋白分为9组,与糖苷水解酶18催化结构域和几丁质结合结构域的特性一致。通过PAML软件计算出几丁质酶的正向选择位点,发现了豌豆蚜虫中的A.pisum xp003243674.1为一条新的几丁质酶蛋白。对深入研究昆虫几丁质酶结构与功能很有帮助。     

病原芽胞杆菌几丁质酶产生菌的筛选与活性鉴定

通过特异引物PCR方法和水解圈活性法对62株苏云金芽胞杆菌菌株、26株蜡状芽胞杆菌菌株及18株球形芽胞杆菌菌株进行了几丁质酶产生菌的筛选.所测苏云金芽胞杆菌中除4株野生型菌株外均为阳性结果,蜡状芽胞杆菌仅1株为阴性结果,球形芽胞杆菌全为阴性结果,且水解圈法观察结果与PCR检测结果一致.在此基础上,通过DNS比色法对几丁质酶产生菌株的几丁质酶比活力也进行了测定.对这些具有致病性的病原芽胞杆菌几丁质酶的研究对于研究其致病机理及对其进行遗传改良具有重要的理论和实际应用价值.     

扁豆几丁质酶基因的克隆及表达

以扁豆总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增到长度为885 bp的扁豆几丁质酶基因cDNA,其编码294个氨基酸,目的蛋白的分子量为28.429 kDa.以该基因构建pET-21a-chi表达载体并在E.coli BL21(DE3)中表达.30℃下,用0.1 mmol.L-1IPTG,诱导5 h,表达产物的酶活力为36.25 U.mL-1.通过常压Sephadex G-50凝胶过滤色谱,DEAE-650C常压与高效离子交换色谱对表达产物进行纯化.目标蛋白达到电泳纯(SDS电泳一条带),几丁质酶的比活力108.42 U.mg-1.表达的蛋白质产物主要以可溶性形式存在.     

采用易错PCR对粘质沙雷氏菌几丁质酶C进行定向进化

以重组E.coliBL21(DE3)pLysS/pET22b-Chi C为亲本,采用易错聚合酶链反应(PCR)技术,对粘质沙雷氏菌几丁质酶C基因(Chi C)进行定向进化研究.经过两轮易错PCR后,建立突变体文库,进行平板初筛、包涵体复性及酶活检测复筛,获得一酶活较高的突变酶(Mut-Chi C),其催化活性为亲本重组酶的1.9倍,比活力为出发菌酶活的3.3倍.对突变酶的酶学性质进行初步研究,其最适pH值为5.0,最适温度为60℃,而出发菌该酶的最适温度为40℃.进化酶基因经DNA测序并通过软件与亲本型酶基因进行分析比对,表明突变酶Mut-Chi C基因发生点突变,使4处氨基酸被取代,且均为有义突变.     

球孢白僵菌几丁质酶的定位研究

采用酶解球孢白僵菌菌丝细胞壁以获得原生质体,用超声破碎器破碎细胞,并用差速离心等方法,对此丝状病原真菌细胞中几丁质酶的定位进行了研究.采用球孢白僵菌 Eu-120株,分别用几丁质酶、蜗牛酶和纤维素酶,以不同比例混合进行脱壁处理.通过测定培养物上清液及原生质体溶解物的几丁质酶活性,发现此培养物上清液中的酶活性占其总酶活性的81.46%,而原生质体溶解物中酶活性极少.研究表明,球孢白僵菌几丁质酶主要存在于细胞的周质空间,并在菌生长过程中通过细胞壁分泌至细胞外.     

微生物发酵法降解山黧豆毒素的研究

为了寻找具有降解山黧豆神经毒素（ODAP）的菌株，本实验选择30种菌株，以含有已知量的ODAP的山黧豆粉提取液为培养基，采用邻苯二甲醛法检测培养前后培养基中ODAP的消耗量，筛选具有能够明显利用和消耗ODAP的菌株.实验结果表明，有2种菌株对ODAP有明显的降解和消耗作用.还探讨了这两种菌株在山黧豆培养基中的生长情况与ODAP降解情况的相关性以及酶促反应的基本动力学,从所获得的试验结果可断定被筛选出的2株菌种经发酵可产生ODAP降解酶.