朊圆酵母尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0~12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时     

产朊假丝酵母(Candida utilis)尿酸酶的基本特性

产朊假丝酵母尿酸酶通过由DEAE-sepharose和Xanthine-agarose等层析纯化.纯化酶经SDS-PAGE显示单一蛋白带,HPLC显示纯度为97.5%.其相对分子质量为127 kDa,变性SDS-PAGE表明该酶的表观分子质量为33 kDa.该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,最适pH为8.5,最适温度为40.0℃.在最适条件下测得其Km为35.0 μmol/L.某些金属离子对酶活性的研究结果表明,Co3 ,Pb2 ,Mn2 及EDTA,NEMI对尿酸酶活性有抑制作用,Mg2 ,Triton X-100对尿酸酶活性略有激活作用.     

朊圆酵母Y0401尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0～12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时活性保持90%,在60℃处理30min时活性仍保持80%.在最适条件下,该酶催化尿酸的米氏常数(Km)为3.34×10-5mol/L.一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

Debaryomyces sp.甘油激酶基本动力学性质研究

通过平板初筛和摇瓶复筛,从105株菌中筛得一株甘油激酶的高产菌株,并研究了其所产甘油激酶的动力学性质.研究结果表明:在MES系统中,甘油激酶有较好的酸碱稳定性,pH稳定范围为5.5～10.5;最适pH和最适温度分别为pH 8.0和50℃,该酶催化甘油的米氏常数(Km)为3.5×10-5mol/L,催化ATP的Km为4.46×10-4mol/L.同时对一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

重组肠激酶在甲醇酵母中高效表达的培养条件研究

对重组肠激酶在甲醇酵母中高效表达的发酵条件进行了优化，并在BiofloⅢ发酵罐中实现了高密度培养和高效表达。结果表明；温度30C，培养基pH6．0，当酵母密度达到200A600mm以上时，加入无水甲醇，控制甲醇的流加体积，使其终体积分数为1．0％～3．O％，继续诱导培养72h左右，酵母菌密度可达到150g／L，重组肠激酶总活性可达58kIU／L发酵液。     

红毛五加多糖的分离纯化和表观分子质量测定

红毛五加经热水浸提，用Sevag法脱蛋白，经DEAE—cellulose 32离子交换层析和Sephacryl S-200HR凝胶层析纯化得到3个主要多糖组分：AHP-Ⅰ、AHP-Ⅱ、AHP-Ⅲ，经HPLC和Sephacryl S-300HR凝胶层析鉴定，3种多糖均为均一组分，HPLC测定AHP-Ⅰ、AHP-Ⅱ、AHP-Ⅲ的表观分子质量分别为：7．0kD、59．5kD和12．9kD，Sephacryl S-300HR凝胶层析进行验证，得到相似结果．     

半枝莲多糖的研究 分离纯化及其基本性质

半枝莲经乙醚脱脂,热水提取,Sevage 法脱蛋白质,乙醇沉淀后得半枝莲多糖粗品.经 DEAE-纤维素(DE-52)柱层析和 Sephadex G-200凝胶过滤得半枝莲多糖精品.紫外光谱分析表明不含有核酸和蛋白质.经乙酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳和 Sephadex G-200凝胶过滤法柱层析结果表明均为单一条带或者单一峰,证明此多糖精品是均一的.分析表明此多糖精品的总糖含量以半乳糖为标准为115%,以葡萄糖为标准为56%,以糖原为标准是58%.用 SephadexG-200分子筛法测得平均分子量为1×10~4道尔顿.体外实验表明半枝莲多糖对移植肉瘤 S-180细胞和腹水癌细胞均有一定的抑制作用.