朊圆酵母Y0401尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0～12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时活性保持90%,在60℃处理30min时活性仍保持80%.在最适条件下,该酶催化尿酸的米氏常数(Km)为3.34×10-5mol/L.一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

产朊假丝酵母(Candida utilis)尿酸酶的基本特性

产朊假丝酵母尿酸酶通过由DEAE-sepharose和Xanthine-agarose等层析纯化.纯化酶经SDS-PAGE显示单一蛋白带,HPLC显示纯度为97.5%.其相对分子质量为127 kDa,变性SDS-PAGE表明该酶的表观分子质量为33 kDa.该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,最适pH为8.5,最适温度为40.0℃.在最适条件下测得其Km为35.0 μmol/L.某些金属离子对酶活性的研究结果表明,Co3 ,Pb2 ,Mn2 及EDTA,NEMI对尿酸酶活性有抑制作用,Mg2 ,Triton X-100对尿酸酶活性略有激活作用.     

产朊圆酵母尿酸酶的分离纯化及其部分性质研究

产朊圆酵母Y0401经尿酸诱导培养,菌体采用超声波处理,依次经过DEAE-Sepharose离子交换层析、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析,尿酸酶比活力达到18U/mg,纯化倍数为409倍,回收率为19.2%.纯化后的酶经还原、非还原SDS-PAGE分析为单一蛋白染色带,HPLC显示纯度为98%以上.用HPLC和Superdex 200分子筛层析两种方法测得该酶的相对分子质量为127kDa,在还原条件下进行SDS-PAGE,测得表观分子质量为33kDa,综上结果推测该酶是由分子量相同的4个亚基组成的四聚体蛋白.等电聚焦显示其等电点在6.8~7.5之间.该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性.最适pH为8.5,最适温度为40.0℃.在最适pH和温度条件下测得该酶Km值为3.34×10-5mol/L.对某些金属离子和有机物对酶活性的影响也进行了研究.     

醋酸纤维素/聚丙烯复合膜固定化脂肪酶的研究

以醋酸纤维素/聚丙烯复合膜为载体对脂肪酶进行吸附固定,研究了不同条件对固定化脂肪酶活性的影响,得到了最佳固定化条件:酶浓度0.020 g/mL,温度20℃,pH8.0,振荡速度100 r/min,吸附时间2 h,膜酶活力最高为4.5 U/cm2;膜酶转化反应最佳条件:最适温度35℃,比游离酶降低了5℃;最适pH 8.5,与游离酶相比pH向碱性偏移,固定化脂肪酶间歇水解橄榄油132 h酶活力为原酶活力的56.7%.     

凝血酶活力影响因素的初步研究

为探讨凝血酶的最佳作用条件,提高其止血效果,以标准凝血酶为原料,在不同温度、pH值、Ca2 浓度、底物浓度和酶浓度下研究其酶活性的变化.结果显示:凝血酶的最佳作用温度为37℃,最适pH值为7到9,最适Ca2 浓度为0.01mol/L,纤维蛋白原浓度为0.1%,凝血酶浓度为1u/mL.     

磁性复合微球固定化脂肪酶的研究

用壳聚糖和二氧化硅共同包裹Fe3O4纳米粒子制得磁性高分子微球,并以此为载体,以戊二醛为交联剂固定化脂肪酶,探讨了固定化过程中戊二醛浓度、固定化时间、固定化pH对固定化酶活力的影响.结果表明,固定化脂肪酶的最佳条件:时间为10h,pH为7.5,戊二醛的浓度为8％.同时还对固定化酶与游离酶的最适温度和最适pH作了测定,固定化酶的最适温度为50℃,比游离酶的最适温度为40℃,提高了10℃;固定化酶的最适pH为7.0,与游离酶的最适pH7.5相比,向酸性偏移了0.5.     

酶法制备鸡骨HAP的研究

采用不同蛋白酶对鸡骨进行水解制备动物水解蛋白(HAP).结果表明,胰酶、AS.1398中性蛋白酶和Alcalase具有较好的水解效果.通过正交试验,以水解度为指标确定胰酶的优化水解条件为:温度50℃,pH值8.5,酶和底物的比值(E/S)为0.75%,底物浓度5%,水解时间为60 min;AS.1398中性蛋白酶最适水解条件为:温度55℃,pH值7.5,E/S为3%,底物浓度5%,水解时间为60 min;Alcalase酶解的最适水解条件为:温度60℃,pH值8.5,E/S为1%,底物浓度5%,水解时间为60 min.     

膜酶结合制备玉米多肽的工艺研究

玉米黄粉是玉米提取淀粉的副产物,常被当作废物处理。以此为原料制备玉米肽以提高其附加值。研究运用酶法制备玉米多肽,确定了添加半胱氨酸对其预处理。用碱性蛋白酶对其酶解,并用膜技术对玉米多肽液进行浓缩和纯化的工艺流程。碱性蛋白酶的最佳水解条件为:底物浓度2.0%,酶与底物浓度比为3.0%,温度50℃,pH为8.5。经过膜处理后,玉米多肽液可浓缩4.9倍,脱盐率达90.52%。     

凝血酶活力影响因素的初步研究

为探讨凝血酶的最佳作用条件,提高其止血效果,以标准凝血酶为原料,在不同温度、pH值、Ca2+浓度、底物浓度和酶浓度下研究其酶活性的变化。结果显示:凝血酶的最佳作用温度为37℃,最适pH值为7到9,最适Ca2+浓度为0.01mol/L,纤维蛋白原浓度为0.1%,凝血酶浓度为1u/mL。     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的制备及性质

以壳聚糖为载体 ,戊二醛为交联剂制备固定化木瓜蛋白酶 .研究了固定化时间、温度、pH值、给酶量和戊二醛浓度对固定化木瓜蛋白酶活力的影响 ,结果表明 :木瓜蛋白酶最佳固定化条件是给酶量为每克载体 10mg ,戊二醛浓度0 .5 % ,pH7.5 ,室温下 (2 5℃ )反应 10h .所制备的固定化木瓜蛋白酶的最适pH8.0 ,最适温度 70℃ ,与溶液酶相比 ,固定化酶的热稳定性显著提高     

疏水层析在分离纯化里氏木霉重组t-PA中的应用

疏水层析是一种有效的分离纯化手段，本文采用Octyl Sepharose和Butyl Sepharose两种疏水层析填料对里氏木霉表达的t-PA的提纯操作条件进行了初步研究。结果表明，选用Butyl Sepharose FF填料，上样量10mL（蛋白含量4．1mg／mL)，用15％(NH4)2SO4的PBS以2mL／min的流速进行洗脱时，回收的酶的比活性较大，为2959．54U／mg，纯化倍数为5．16，回收率为7．12％。     

红豆越橘总三萜的纯化及体外抗炎活性

【目的】为了综合开发利用红豆越橘果实,通过大孔吸附树脂-Sephadex LH-20纯化工艺获得纯度较高的红豆越橘总三萜化合物,并分析此三萜化合物的体外抗炎活性。【方法】以野生矮丛红豆越橘为原料,首先采用静态吸附-解析实验和动态吸附-解析实验筛选大孔吸附树脂,优化最佳工艺,确定最佳上样质量浓度、pH、上样体积、上样流速以及洗脱液浓度; 然后采用Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶二次纯化,获得高纯度的红豆越橘总三萜; 采用对透明质酸酶和牛血清白蛋白的变性抑制率为抗炎评价指标,分析红豆越橘总三萜的抗炎活性。【结果】比较7种大孔树脂对红豆越橘总三萜的纯化效果,结果显示,X-5树脂最适合初级纯化,最佳纯化工艺优化结果为上样质量浓度1.5 mg/mL、样液pH 6、上样量为4/3 BV、上样流速1 BV/h、80%(体积分数)的乙醇进行洗脱,红豆越橘总三萜的纯度由原来的5.13%提高到29.46%。进一步采用Sephadex LH-20二次纯化获得纯度为(43.25±0.31)%的红豆越橘总三萜,抗炎活性结果显示,对透明质酸酶和牛血清白蛋白变性抑制率分别可达(81.5±1.37)%、(72.59 ±1.84)%。【结论】红豆越橘是一种营养丰富的浆果,通过二次纯化技术获得纯度较高的三萜类化合物,并初步证实红豆越橘总三萜具有一定的抗炎活性。     

中温α-淀粉酶基因的克隆及在枯草芽孢杆菌中的高效表达

利用高效表达栽体pWB980,实现了Bacillus subtilis BF7658中温α-淀粉酶基因amy在B.subtilis DB403中的高效表达,活力达到770 U/mL.经多步纯化,重组酶AMY的比活达到35.8 U/mg,纯化倍数为1.7,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测,重组酶AM...     

球等鞭金藻生长抑制物的分离提取与抑制活性

以含有生长抑制物的球等鞭金藻的微藻滤液为研究对象,考察pH、时间、料液体积比和溶剂等因素对生长抑制物提取效果的影响,确定了球等鞭金藻的微藻滤液中生长抑制物的适合提取工艺;通过比较两种型号的葡聚糖凝胶对生长抑制物粗提物的分离效果,确定了适合的凝胶类型;同时研究温度对生长抑制物抑制活性的影响以及生长抑制物对其他微藻生长的抑制作用。结果表明:生长抑制物的适宜提取工艺为pH 2~4、提取时间3 h、料液体积比10∶1、溶剂为乙酸乙酯;Sephadex G-15凝胶对生长抑制物的分离效果好于Sephadex G-25;生长抑制物的抑制活性具有很强的热稳定性,其对角毛藻和小球藻有明显的抑制作用。     

百日咳毒素的等电点测定及层析分离

百日咳毒素是百日咳杆菌(Bordetellapertussis)产生的一种主要毒力因子,也是百日咳菌苗的主要成分之一.用等电聚焦法测得其等电点为pH6 8.将百日咳杆菌液体培养液在等电点盐析后,通过DEAE-Sephadex-A50阴离子交换剂进一步分离纯化了百日咳毒素.ELISA测定其比活力表明,3批样品的提纯倍数分别为1 47,1 37和1 36.     

TiO2吸附及超滤法部分纯化果菠萝蛋白酶的研究

果汁量4％的TiO2作为吸附剂,能够吸附菠萝榨汁中96％的果菠萝蛋白酶力,然后以0．4MpH6.6的柠檬酸缓冲液可有效地进行洗脱,洗脱洗先用截留值2万的超滤膜超滤,流出液再用截留值为5万的超滤膜超滤,最后所得截留液中果菠萝蛋白酶比活力达911单位／毫克蛋白,活力回收率为54％,纯化倍数7．9,蛋白质溶液浓缩10倍。     

微生物谷氨酰胺转胺酶的乳糖诱导表达与纯化

对已构建的工程菌株pET22b-MTG/E.coli BL21（DE3）进行质粒酶切和PCR鉴定,优化诱导温度、时间、pH和乳糖浓度等反应条件,采用乳糖自诱导培养基培养重组菌.并将重组菌上清液经凝胶过滤,离子交换及镍柱亲和层析后,对谷氨酰胺转胺酶纯化和SDS-PAGE电泳分析.结果表明：谷氨酰胺转胺酶在28℃,添加乳糖为1.2g/L诱导18 h,pH为7.0,培养11.5 h时升温至50℃诱导1 h,再放至28℃培养,表达效果较好,超过IPTG诱导效果.纯化后酶活为7.5 U/mL,比活力为10.9 U/mg.     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.     

微生物絮凝剂产生菌的筛选及其絮凝影响因素

采用常规的细菌分离纯化方法，从活性污泥和农田土壤中筛选到12株微生物絮凝剂产生茵，经复筛得到一株高效絮凝剂产生茵MBFP-7．以高岭土悬浮液为絮凝对象，研究了温度、pH、微生物絮凝剂的投加量和Ca^2 对絮凝活性的影响；探讨了微生物絮凝剂的絮凝机理．     

豆豉中β-甘露聚糖酶高产菌的分离、鉴定及其酶学性质

通过对传统曲霉型豆豉菌群分离纯化,结合刚果红显色及DNS筛选法,共得到高产β-甘露聚糖酶且形态学差异较大的细菌4株、真菌1株,其中真菌的酶活力为2 016 U?mL^-1.经过序列鉴定与比对,细菌鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus)不同种,真菌为黑曲霉(Aspergillus niger).酶学性质研究表明:黑曲霉的最适温度和pH值分别为60 ℃和5.0; 4株芽孢杆菌最适作用温度和pH值范围为40～55 ℃和6.0～7.0,其中1株芽孢杆菌在65 ℃时保温240 min或在pH值为9.0时保留30 min,残留相对酶活仍可达61.4%或84.3%.