利用木糖母液生产碱性蛋白酶发酵工艺的初步研究

研究了以木糖工业化生产的副产物木糖母液为碳源,利用地衣芽孢杆菌工程菌(Bacillus licheniformis)TCCC11843发酵生产碱性蛋白酶的工艺.对摇瓶发酵工艺进行优化,确定了接种种龄为12,h,接种量为8%,培养基初始p H为6.5,发酵温度为34,℃,在24,h一次补加4.0,m L质量分数为50%木糖母液,此时的发酵液酶活力峰值为7,838,U/m L;在此基础上,又在7,L发酵罐上实现了木糖母液的反馈补料,酶活力在80,h时达峰值,为14,912,U/m L.该结果为工业化生产碱性蛋白酶的发酵工艺优化提供了新的思路.     

微生物发酵生产纤溶酶的研究

以一株具有高产纤溶酶能力的菌株中国根霉１２＃为出发菌株，以麸皮、胰蛋白胨为培养基，采用液体发酵法生产一种高效血栓溶解酶。用人工血纤维蛋白平板检测其活性。对培养基中的碳源、氮源、浓度及配比进行了研究，通过正交试验设计了最佳培养基配方和培养条件，并进行了扩大培养实验     

低温碱性脂肪酶产生菌的筛选及产酶培养基的优化

以橄榄油为唯一碳源,从渤海湾盐碱地被油污染的土样中分离筛选出1株产低温碱性脂肪酶菌株34.5,初步酶学性质研究表明,该菌所产脂肪酶的最适温度为25℃,最适pH为9.6.该菌的16S rDNA基因序列与伯克霍尔德氏菌(Burkholderia)的同源性为99%.摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为(g/L):淀粉10,黄豆饼粉20,玉米浆20,K2HPO41,聚乙烯醇大豆油乳化液20.其最高酶活为6.87 U/mL.     

抗生素筛选模型的建立

为节省筛选抗生素的工作量，减少重复筛选率，本实验以常规筛选模型中的指示菌为出发株，经物理化学诱变，筛选出七支突变株，它们对临床上最常用的β内酰胺类、四环素类、氨基糖醇类，大环内酯类和多烯大环内酯类抗生素敏感性显著不同，可构成一抗生素筛选模型。经检验证明通过这一模型能初步判别微生物所产抗生素的类群。     

黄孢原毛平革茵产锰过氧化物酶培养基优化

黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosporium)5.776在限氮高锰培养基中产生较高的锰过氧化物酶。通过对初始发酵培养基的优化条件研究,对原培养基进行优化/g·L-1):葡萄糖,10;酒石酸铵,0.37(2mmol);吐温80,1;Mn2+,9.9×10-6;于34℃静置培养5d;产MnP活力达1200U·L-1,比优化前提高了近17倍。     

阿维拉霉素高产菌株的推理选育

为获得阿维拉霉素高产菌株,在研究菌株Streptomyces viridocbromogenes96(SV-96)葡萄糖及氨盐代谢的基础上,采用“NTG随机诱变 氨基乙酸和2-脱氧-D葡萄糖联合抗性”的试验方案进行阿维拉霉素高产菌株的推理选育,获得了氨基乙酸和2-脱氧-D-葡萄糖联合抗性高产突变株SV-GT-596.该菌株遗传性能良好,阿维拉霉素产量高达56.4mg/L,较出发菌株提高了162.3%.实验表明,氨基乙酸和2-脱氧-D-葡萄糖抗性推理选育可克服随机筛选的盲目性,提高筛选工作效率.     

维生素B12分批与补料分批发酵的研究

首先对维生素B12产生菌Propionibacterium shermanii在7L发酵罐内分批发酵下的菌体生长及产维生素B12的特性进行了研究。分批发酵的结果表明，虽然提高葡萄糖的浓度可以提高产量，但是存在着菌体生长受抑制，耗糖缓慢，发酵周期长的缺陷。继而进行了间歇补料分批发酵工艺的研究，确定了初糖浓度及补糖策略。发酵最终菌体干重达16．96g／L，较分批发酵提高50％；维生素B12的产量达38．55mg／L，较分批发酵提高16％；有效缩短了发酵周期，较分批发酵缩短24h。     

甾体11β-羟基生物转化新工艺的研究

通过分析 11β-羟基转化体系中反应介质和发酵液的影响 ,设计了一种将化合物 RS- 2 1醋酸酯转化为氢化可的松的新工艺。确定工艺条件为 :孢子接种浓度 1× 10 6/ m L ,2 8℃ ,摇床转速 (150～ 170 ) r/ min,培养 (17～ 2 1) h,培养液 p H值降至 3.8、菌体处于稳定期前期、菌丝干重达 7.2 mg/m L以上时 ,以 1∶ 1稀释比稀释 ,投料转化 2 4 h,β体转化率达 (75～ 76 ) %。初步研究了新工艺的转化过程特性     

枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转氨酶的异源表达

以野生型枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增获得带有SD序列及谷氨酸棒状杆菌信号肽ΔS0949的BTG基因.将其与大肠杆菌-谷氨酸棒状杆菌穿梭表达载体pXMJ19连接,构建重组质粒pXMJ19-Sbtg转化谷氨酸棒状杆菌ATCC13032.经IPTG诱导后该重组菌发酵液具有交联酪蛋白的能力,表明该重组菌能够实现分泌表达.     

潘糖标准品的制备与应用可行性评价

潘糖是低聚异麦芽糖中的关键组分,具有较高的科研利用价值.但是其价格昂贵,且在市场上不易购买,限制了低聚异麦芽糖的相关研究与应用.本研究通过高效液相色谱-蒸发光散射检测法对低聚异麦芽糖产品的全组分进行定性分析,鉴定了其主要功能性成分.采用高效液相色谱-示差折光检测法对关键组分潘糖进行分离纯化.所获得潘糖的平均纯度、平均回收率、精密度实验的相对标准偏差和重复性实验的相对标准偏差分别为(98.43±0.25)%、(96.20±0.73)%、0.25%和0.27%,,并且它可在2~8℃条件下稳定保存至少12个月.因此,该潘糖产品符合2015年版中华人民共和国药典的相关规定,可作为二级标准品使用.这为低聚异麦芽糖的相关研究与应用提供了基础材料.