宁夏灵武白芨滩国家级自然保护区苦豆子内生放线菌区系分析

从宁夏灵武白芨滩国家级自然保护区不同土壤类型、不同优势植被的6个样区,采集苦豆子种子及健康植株60份,分离出内生放线菌288株．鉴定表明,同一植株不同组织中,内生放线菌数量以根部最多,其次为种子,叶部最少;淡灰钙土中苦豆子内生放线菌数量比风沙土中多;旱中生杂类草沙生植被草原苦豆子内生放线菌数量最多．各样区苦豆子共分离出11个属的内生放线菌,以链霉菌属和诺卡氏菌属为优势属,其中链霉菌属以白孢类群和灰褐类群为主．     

枸杞根系内生真菌的染色方法

为更好地观察枸杞(Lycium barbarum)根系内生丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhiza fungi,AMF)和深色有隔内生真菌(dark seprate endophytes,DSE)侵染定殖特征,建立了一种枸杞根系内生真菌适宜的染色方法.将健康枸杞根样置于100 g/L的KOH溶液中90 ℃水浴90 min,接着加入质量分数30%的H₂O₂漂白5 min,室温下乳酸酸化5 min后,用5种染色剂(醋酸墨水、台盼蓝、酸性品红、苏丹红Ⅳ和苯胺蓝)于室温染色3~5 min,脱色剂浸泡脱色后镜检.结果表明: 醋酸Quink牌墨水和台盼蓝的染色效果较好,根系皮层细胞内AMF菌丝、泡囊和DSE菌丝、微菌核等结构清晰可见,能准确分辨出AMF、DSE和其他真菌.综合考虑操作难易程度和安全性, 醋酸Quink牌墨水因操作简单、安全无毒、染色效果好,更适用于枸杞根系内生真菌的染色和制片观察.     

产酶苦豆子内生细菌筛选及其活性菌株鉴定

对苦豆子健康植株和种子内的内生细菌进行分离,共分离获得41株内生细菌.对41株菌株进行了分泌胞外淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶特性的研究.结果表明,有80.5%的菌株具有蛋白酶活性;有78.0%和61.0%的菌株具有淀粉酶和纤维素酶活性;具有几丁质酶和葡聚糖酶活性的菌株则较少.经16SrRNA基因序列分析鉴定,6株高活性产酶菌株与枯草芽孢杆菌属(Bacillus subtilis)、韩国丛毛假单胞菌(Pseudomonas koreensis)、固氮阴沟肠细菌(Enterobacter cloacae)、苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)和嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)亲缘关系较近,核苷酸序列一致性在98%以上.     

葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ宁夏分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析

用酶联免疫吸附法对宁夏贺兰山东麓地区不同葡萄品种进行卷叶伴随病毒Ⅲ(GLRaVⅢ)的测定,检测率为37.1%,与田间自然发病率调查结果基本一致.设计GLRaVⅢ外壳蛋白(CP)基因序列引物对,进行RT-PCR扩增,获得1.1 kb的特异片段.其中,CP基因长942 bp,推导的编码蛋白含有313个氨基酸.通过对GLRaVⅢCP基因同源性比较,结果表明,GLRaVⅢ宁夏分离物的CP基因与四川分离物SL-10 CP基因的亲缘关系最近,核苷酸和所编码的氨基酸序列同源性分别为98.8%和98.1%;与巴西分离物PET-4和智利分离物C1-817 CP基因亲缘关系较远,核苷酸序列同源性低于95.0%,所编码的氨基酸序列同源性低于97.0%,认为GLRaVⅢ株系间的CP基因存在差异.