鱼中高温激活蛋白酶的提取纯化

以市售鱼为原料，进行其高温激活蛋白酶（ＨＴＡＰ）的提取纯化通过抽提、高速离心分离、ＤＥＡＥ－ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ６５０Ｍ离子交换色谱、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬＳ２００凝胶过滤等方法，把ＨＴＡＰ从鱼中分离提取出来运用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法对分离提纯的ＨＴＡＰ纯度进行鉴定，并通过此法测出了该ＨＴＡＰ的分子量为３９０００     

POLYCYCLE－COMPOUNDING STRUCTURES AND REGIONAL LAYERSLIP－DIPSLIP SYSTEMS：IMPLICATIONS FOR THE TARIM BASIN，XINJIAN

ＰＯＬＹＣＹＣＬＥ－ＣＯＭＰＯＵＮＤＩＮＧＳＴＲＵＣＴＵＲＥＳＡＮＤＲＥＧＩＯＮＡＬＬＡＹＥＲＳＬＩＰ－ＤＩＰＳＬＩＰＳＹＳＴＥＭＳ：ＩＭＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳＦＯＲＴＨＥＴＡＲＩＭＢＡＳＩＮ，ＸＩＮＪＩＡＮ￥ＳｕｎＹａｎ；ＪｉａＣｈｅｎｇｚａｏ（Ｄｅ...     

LARGE PIEZORESISTANCE AND PRESSURE－INDUCED METAL－SEMICONDUCTOR TRANSISTION IN THE PEROVSKITE－LIKE La－Ar－Mn－O

ＬＡＲＧＥＰＩＥＺＯＲＥＳＩＳＴＡＮＣＥＡＮＤＰＲＥＳＳＵＲＥ┐ＩＮＤＵＣＥＤＭＥＴＡＬ┐ＳＥＭＩＣＯＮＤＵＣＴＯＲＴＲＡＮＳＩＳＴＩＯＮＩＮＴＨＥＰＥＲＯＶＳＫＩＴＥ┐ＬＩＫＥＬａ┐Ａｒ┐Ｍｎ┐ＯＺｈａｎｇＮｉｎｇ１），２）ＤｉｎｇＷｅｉｐｉｎｇ...     

浅析MFC消息映射机制

Ｗｉｎｄｏｗｓ操作系统是一个基于消息的操作系统 ,其程序总要同消息打交道 ,这正是Ｗｉｎｄｏｗｓ程序同Ｄｏｓ程序不同的地方。实际上 ,Ｗｉｎｄｏｗｓ系统通过Ｗｉｎｄｏｗｓ消息告诉所有应用程序发生了什么事件 ,例如用户点击了鼠标、用户点击了键盘的哪个键等 ,每个应用程序都有消息处理函数或一组消息响应函数 ,用于对消息进行响应。使用ＷｉｎｄｏｗｓＡＰＩ函数编程时 ,你将不得不使用许多复杂的代码去处理Ｗｉｎｄｏｗｓ消息。ＭＦＣ合理的封装了ＷＩＮ3 2ＡＰＩ函数 ,并设计了一套方便的消息映射机制。但这套机制本身比较庞大和复杂 ,对它的分析和了解无疑有助于我们写出更为合理的高效的程序。1　消息映射的声明 :ＤＥＣＬＡＲＥ＿ＭＥＳＳＡＧＥ＿ＭＡＰ宏在ＭＦＣ的框架结构下 ,进行消息处理的类的头文件里一般都含有这样的结构 :ｃｌａｓｓＣＤｅｒｉｖｅｄＣｌａｓｓ :ＰｕｂｌｉｃＣＢａｓｅＣｌａｓｓ{　 ...　ＤＥＣＬＡＲＥ＿ＭＥＳＳＡＧＥ＿ＭＰＡ()};在这里ＤＥＣＬＡＲＥ＿ＭＥＳＳＡＧＥ＿ＭＡＰ宏相当于为类声明了如下的一种数据类型 :#ｄｅｆｉｎｅＤＥＣＬＡＲＥ＿ＭＥＳＳＡＧＥ＿ＭＡＰ()ｐｒｉｖａｔｅ :　ｓｔａｔｉｃｃ...     

生姜蛋白酶的分离纯化及其糖肽键型的初步研究

本文报导以生姜为材料，冷丙酮脱脂脱色后，用０．１ｍｏｌ／ＬＰＨ６的磷酸缓冲液提取、硫酸铝盐析，经ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ－５２和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５纯化，得生姜蛋白酶两个组份ＺＥ１和ＺＥ２。它们经凝胶等电聚焦电泳，均为单一的蛋白带，ＰＩ值别为７．０和８．０。苯酚－硫酸法鉴定，其均为糖蛋白。β－消去反应表明：ＺＥ１和ＺＥ２中的糖肽键型均为非０－型糖肽键。     

大豆胰蛋白酶抑制剂SBTi—A2新类型Ti^d突变位点的初步研究

纯化的大豆胰蛋白酶抑制下Ｔｉ＾ａ和Ｔｉ＾ｄ分别经烷基化，ＣＮＢｒ裂解，痛ＰＡＧＥ电泳，Ｔｒｉｃｉｎｅ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析，初步证明了Ｔｉ＾ｄ的突变位点发生在蛋白Ｎ端１－８４氨基酸残基上。     

大豆（G.max）胰蛋白酶抑制剂SBTi—A2新类型Ti^x的纯化及其…

用丙酮脱脂、稀酸处理、硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析等方法从大豆中分离纯化得一种新类型胰蛋白酶抑制剂Ｔｉ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉ＾ｘ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉ＾ｘ与已知的大豆蛋白酶抑制剂Ｔｉ＾ａ的相分对分子质量均为２１０００，且Ｎ－末端均为Ａｓｐ；亲和电泳分析显示Ｔｉ＾ｘ与Ｔｉ＾ａ；两者经ＣＮＢｒ裂解后电泳分析得到相同带型；纯化样品的氨基酸组成分析显示Ｔｉ＾ｘ比Ｔｉ＾ａ多了两个碱     

重视泛读课课堂上的听说教学

重视泛读课课堂上的听说教学ＡＴＴＡＣＨＩＭＰＯＲＴＡＮＣＥＴＯＬＩＳＴＥＮＩＮＧ－ＡＮＤ－ＳＰＥＡＫＩＮＧＩＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＩＮＥＸＴＥＮＳＩＶＥＲＥＡＤＩＮＧＬＥＣＴＵＲＥ刘雅儿ＬｉｕＹａ＇ｅｒ（浙江水产学院基础课部，舟山３１６１０１）（Ｚｈｅ...     

MAGNETIC RELAXATION AT EARLY TIMES AND FLUX DIFFUSION BARRIER V（J，B，T） FOR Ti－1223 DOPED WITH Pb AND Ba BY COMPLEX AC SUSCEPTIBILITY MEASUREMENTS

ＭＡＧＮＥＴＩＣＲＥＬＡＸＡＴＩＯＮＡＴＥＡＲＬＹＴＩＭＥＳＡＮＤＦＬＵＸＤＩＦＦＵＳＩＯＮＢＡＲＲＩＥＲＶ（Ｊ，Ｂ，Ｔ）ＦＯＲＴｉ－１２２３ＤＯＰＥＤＷＩＴＨＰｂＡＮＤＢａＢＹＣＯＭＰＬＥＸＡＣＳＵＳＣＥＰＴＩＢＩＬＩＴＹＭＥＡＳＵＲＥＭＥＮＴＳＤ...     

猪凝血酶的分离纯化与鉴定

本文报导以猪血为材料，制备凝血酶，血浆在低离子强度下经等电沉淀得优球蛋白，从该沉淀中采用稀盐溶液提取，氢氧化镁吸附和二氧化碳解吸等步骤获得凝血酶原粗品。后者经脑提取液激活，再经乙醇分级、ＤＥＡＥ－纤维素与磷酸纤维素离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤，得凝血酶制品，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，制品呈单一条带，分子量约为３９ｋＤ，比活达１６１０ＮＩＨＵ／ｍｇ蛋白，以活化的粗品活性为１００％，活性回收率为４８％，纯化倍数约为１０。     

马铃薯蛋白酶抑制因子特性的研究

本文研究了马铃薯蛋白酶抑制因子的稳定性及其对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的抑制能力,结果表明：该抑制因子对胰蛋白酶活性的抑制作用较弱,最大抑制程度为６５％;对胰凝乳蛋白酶活性的抑制作用较强,抑制程度最高可达９５％以上,并且,它对ｐＨ及温度的变化均具有较强的稳定性．     

玉米巯基蛋白酶抑制剂的纯化及部分性质

从玉米种子纯化的两种巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ－Ｉ和ＣＰＩ－Ⅱ）分子量分别为９５００和１３０００,经们都只抑制巯基蛋白酶的水解活性,而对丝氨酸蛋白酶则无抑制作用,属于巯基蛋白酶水解抑制剂,它们在ｐＨ３．０～１１．０或１００℃温度范围内保有１００％的抑制木瓜蛋白的抑制活性,表明在这些外界条件下其分子非常稳定。     

水稻巯基蛋白酶抑制剂的圆二色谱研究

水稻巯基蛋白酶抑制剂(CPI)圆二色性谱(CD)显示206nm和222nm处的双负峰,CPI分子以α 螺旋构象为主;当CPI与木瓜蛋白酶等摩尔结合后,CPI完全丧失抑制活性,复合物CD谱发生显著变化,α 螺旋含量降低.CPI具有较高的结构稳定性,但在100℃处理时间延长以及pH向酸碱两极变化时,其CD谱发生较大改变,α 螺旋含量减少;而抑制活性仅在pH>9时逐渐下降,在酸性条件下保持不变.用不同试剂修饰CPI分子中的巯基和二硫键,CPI的活性不受影响;DTT、PCMB修饰CPI,其CD谱发生显著变化,NEM修饰CPI,其CD谱变化甚微.4mol/L的脲中,CD谱仅显示206nm负峰、214nm和225～235nm处新的负肩,并在240～250nm之间出现新的负峰,分子中无规卷曲增加,CPI活性未受影响;经NBS修饰,CPI分子中α 螺旋减少,无规卷曲增加较多,CPI完全丧失抑制活性.     

Transgenic tobacco plants harboring tomato proteinase inhibitor II gene and their insect resistance

The plant expression vectors pBCT2 and pBT2 were constructed with the cDNA sequence (tin2) and genomic DNA sequence (tin2i) of tomato proteinase inhibitor II gene respectively. Then the two expression vectors were transferred into tobacco via the Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404, and transgenic tobacco plants were generated. Molecular analysis and trypsin activity assay showed that both cDNA and genomic DNA were expressed properly in the transgenic plants. Insecticidal activities in these transgenic plants indicated that transgenic tobacco plants carrying tin2i sequence were more resistant to 2-instar larvae of Heliothis armigera Hubner than those carrying tin2 sequence. Therefore the intron of tin2i sequence might be a contributor to insecticidal activity of the transgenic tobacco.     

Isolation of tomato proteinase inhibitor II gene and the function of its intron

The genomic DNA sequence of tomato proteinase inhibitor II gene (named tin2i, whose accession number in GenBank is AF007240) was isolated by PCR techniques. The intron sequence (TPI), with a length of 109 bp, owns typical structures of GT/AG dinucleotides at both ends and high content of AT base pairs which accounts for 80.7% of the total nucleotides. As shown by recombination experiment, the TPI sequence could efficiently promote the expression of the reporter gene gusA and this effect was independent of the position and orientation of the intron, thus showing its role as an enhancer. Such experiments as gel retardation assays, GUS histochemical staining and GUS fluorometric assays further demonstrated that TPI sequence maybe has promoter-like activity.     

马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆和结构分析

以马铃薯基因组ＤＮＡ为模板并基于天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因的ｃＤＮＡ序列所设计的两个引物，通过ＰＣＲ扩增得到６６６ｂｐ的天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因编码区，并将此片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ位点．序列分析结果表明该基因除去末端一终止密码子外其可译框架编码２２１个氨基酸残基，前导肽包括３２个氨基酸残基，故该抑制剂的成熟蛋白由１８９个氨基酸组成，第６７位的精氨酸为抑制胰蛋白酶的活性中心．与ｃＤＮＡ相比核苷酸的同源性为９４．３％，氨基酸的同源性为９０％．基因ＤＮＡ无内含子．     

冠状病毒主蛋白酶及其化学抑制剂研究进展

一个新的冠状病毒已经被鉴定为急性呼吸道综合症(SARS)的病原体,控制该病毒复制复合体活性的主蛋白酶(Mpro或3CLpro)将很可能成为开发针对SARS特效治疗药物的靶位点.综述了人冠状病毒株229E(HCoV 229E)和一种在猪体内引发传染性胃肠炎的病毒(TGEV)的Mpro的晶体结构以及以此为基础构建的SARS冠状病毒(SARS-CoV)同源蛋白酶的空间结构模型.通过对这些同源蛋白酶的结构及其与已知的蛋白酶化学抑制剂的结合特征进行分析后发现Mpro的底物结合位点具有惊人的保守性,这种保守性也被重组SARS-CoV Mpro能介导的TGEV Mpro的底物剪切实验所进一步证实.分子模型表明已有的鼻病毒3Cpro抑制剂经过改进后或许能用于SARS的治疗.     

Establishment of Genetic Transformation System for Miscanthus sacchariflorus and Obtaining of Its Transgenic Plants

The initiation and regeneration system for embryogenic callus of Miscanthus sacchariflrus is established at very high frequency. Potato proteinase Ⅱ (pin Ⅱ ) genes are introduced into the callus of Miscanthus sacchariflorus and some transgenic plants are obtained by the particle bombardment transformation system. PCR and Southern analysis show that target genes are integrated into the genome of these transgenic plants.     

Construction of a new plant expression vector containing two insect resistant genes and its expression in transgenic tobacco plants

A new plant expression vector (pBS29K-BA) containing two insect resistant genes, a synthetic chimeric gene BtS29K encoding the activated insecticidal protein Cry1Ac and a gene API-BA encoding the arrowhead (Sagittaria sagittifolia L.) proteinase inhibitor (API) A and B, is constructed. Transgenic tobacco plants expressing these two genes are obtained through Agrobacterium-mediated transformation of tobacco leaf discs. The average expression levels of Cry1Ac and API-BA proteins in transgenic plants are of 3.2 μg and 4.9 μg per gram fresh leaf respectively. The results of insecticidal assay of transgenic plants indicate that the pBS29K-BA transformed plants are more resistant to insect damage than the plants expressing the Cry1Ac gene or API-BA gene alone.