用新洁尔灭测定核酸的共振瑞利散射方法研究

在酸性BR缓冲溶液 ，新洁尔灭（溴化十二烷基二甲基苄铵，BB）与小牛胸腺DNA（ctDNA)鲱鱼精DNA（hsDNA)、鲑鱼精DNA（sDNA)和酵母RNA（yRNA)反应，产生强烈的共振瑞利散射（RRS）增强，其最大散射峰位于470nm处。由此建立测定微量核酸的新分析方法。ctDNA,hsDNA,sDNA和yRNA的测定范围分别为0－4.2μg/mL，0-4.0μg/mL,0-4.6μg/mL,0-12.0μg/mL；检出限（3σ）分别为8.6ng/mL,9.2ng/mL,9.9ng/mL和27.9ng/mL。研究发现RRS强度变化与核酸构象转变有密切联系，因此RRS法有望成为研究核酸构象的有用手段。     

基于UPLC方法同时测定准噶尔柳花中的芦丁、木犀草苷、绿原酸、槲皮素含量

利用UPLC法测定准噶尔柳花中的芦丁、木犀草苷、绿原酸、槲皮素含量。采用色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 100 mm×2.1 mm,1.7 μm;流动相：乙腈（A） 0.2%乙酸水溶液（B）,梯度洗脱,流速：0.29 mL/min;检测波长：360 nm;柱温：30 ℃。实验结果表明,芦丁线性范围0.05~3.12 μg/mL（r=0.999 8）,平均回收率为99.9%,相对标准偏差为1.6%;木犀草苷线性范围0.03~9.00 μg/mL（r=0.999 5）,平均回收率为98.8%,相对标准偏差为0.8%;绿原酸线性范围0.01~5.00 μg/mL（r=0.999 7）,平均回收率为97.6%,相对标准偏差为1.7%;槲皮素线性范围0.001~0.050 μg/mL（r=0.999 8）,平均回收率为99.0%,相对标准偏差为2.0%。该方法准确可靠,重复性好,可以作为准噶尔柳花的质量控制依据。     

偶氮氯膦-Ⅲ分光光度法测定蛋白质

基于酸性介质中OP 100存在条件下蛋白质与偶氮氯膦 Ⅲ（CPA-Ⅲ）可迅速反应生成复合物(CPA-Ⅲ) BSA, 并产生特征吸收峰的特征, 结合分光光度法精确检测蛋白质的质量浓度. 结果表明: （CPA-Ⅲ） BSA最大吸收波长为674 nm; 蛋白质质量浓度在0~300 μg/mL内与吸光度差值（Δ A）呈良好的线性关系, 其线性回归方程为Δ A=0.003 1ρ+0.003 9 （ρ： μg/mL), 相关系数r=0.996 4; 检出限为1.55 μg/mL. 利用该方法测定人血清和鸡蛋清样品中蛋白质的质量浓度, 相对标准偏差为2.43%~4.35%, 加标回收率为97.97%~103.07%.     

基于核酸适配体的荧光分析法定量检测MUC1粘蛋白

MUC1粘蛋白是一种高糖化、高分子量的糖蛋白,其在乳腺癌细胞中高度异常表达,其特异性高于组织多肽抗原,敏感性高于癌胚抗原,因此MUC1在乳腺癌诊断中具有很高的临床应用价值,而建立高灵敏的MUC1蛋白定量检测方法对临床诊断具有重要的意义.该研究建立了基于核酸适配体-滚环扩增（RCA）和氧化石墨烯-荧光共振能量转移（GO-FRET）技术的MUC1黏蛋白定量检测技术,实现了MUC1粘蛋白准确、灵敏的定量检测.结果表明,该方法定量检测线性范围为50~1 000 pg/mL,检测限为28.05 pg/mL,定量限为45.57 pg/mL,在人血样品中的回收率为96%~104%.     

单细胞微米炭球的制备及其对盐酸四环素的吸附性能研究

以酵母菌为原料,通过预处理-炭化-活化工艺制备了单细胞微米炭球,并利用X射线衍射仪（XRD）、扫描电子显微镜（SEM）、傅里叶红外光谱（FT-IR）和氮气吸附脱附（BET）等手段对单细胞微米炭球的结构演变进行探究。结果表明：所制得的单细胞微米炭球为黑色粉末,系无定形炭结构;单细胞微米炭球保持了酵母细胞椭圆形的形貌,分散均匀且形貌一致,平均尺寸约为1.81 μm×1.03 μm,比表面积达到1.61×10⁴ cm²/g,孔径集中在0.9、29和36 nm附近,具有丰富的孔结构。通过进一步考察单细胞微米炭球对盐酸四环素的吸附行为,证实所获得的单细胞微米炭球对四环素具有较好的吸附去除效果,吸附容量可达23.73 mg/g,符合Freundlich等温吸附模型。     

利用柔红霉素—Cu（Ⅱ）荧光光度法测定核酸

研究了在Cu(Ⅱ）的存在下柔红霉素与DNA或RNA的荧光猝灭反应，发现单、双链DNA及RNA均能大幅猝灭柔红霉素-Cu（Ⅱ）二元体系的荧光，最佳PH值范围为5.4-7.1，最大激发和发射波长分别在505和555nm。在最佳条件下，测定双链DNA线性范围为0-0.6μg/mL,检测限为0.008μg/mL,相对标准偏差在3.0%以内。温度的影响和吸收光谱证实了DNA对此二元体系的荧光猝灭机理为静态猝灭机理。     

RP-HPLC-DAD法测定陈皮中3种多甲氧基黄酮的质量分数

利用高效液相色谱法（RP-HPLC-DAD）, 建立同时测定陈皮中3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、 8-羟基 3,5,6,7,3′,4′-六甲氧基黄酮和5-羟-3,6,7,8,3′,4′-六甲氧基黄酮质量分数的定量分析法, 并采用Cosmosil C18-Ar-Ⅱ（4.6 mm×250 mm, 5 μm）色谱柱, V（乙腈）∶V（ρ（醋酸）=0.2%）为流动相进行梯度洗脱, 流速为1.0 mL/min, 检测波长为258 nm, 柱温25 ℃. 结果表明： 3,5,6,7,8,3′,4′ 七甲氧基黄酮的线性范围为0.01~10.0 μg（r²=0.999 2）, 平均回收率为99.7%, 相对标准偏差（RSD）为0.50%; 8-羟基-3,5,6,7,3′,4′-六甲氧基黄酮的线性范围为0.05~10.0 μg（r²=0.999 4）, 平均回收率为1018%, RSD为2.0%; 5-羟基-3,6,7,8,3′,4′-六甲氧基黄酮的线性范围为0.025~5.0 μg（r²=0.999 8）, 平均回收率为100.2%, RSD为1.7%.     

毛细管区带电泳技术研究龙血竭有效单体与核酸适配体及凝血酶之间的相互作用

利用毛细管区带电泳技术（CZE）研究5个龙血竭有效单体与牛凝血酶（B-Thr）、29碱基凝血酶核酸适配体（Apt29）之间的相互作用.电泳条件为有效长度是40 cm的非涂层石英毛细管,气压进样3.45 kPa,进样时间5 s,分离电压+15 kV,分离温度15℃,检测波长分别为214 nm（牛凝血酶体系）和330 nm（核酸适配体体系）.结果表明,龙血素A和B-Thr之间的结合常数K_b为4.73×104 L/mol,白藜芦醇、龙血素B、7,4'-二羟基黄酮、龙血素C与B-Thr没有显著结合;龙血素B和7,4'-二羟基黄酮与核酸适配体的结合常数K_b分别为1.98×104,1.83×104 L/mol,白藜芦醇、龙血素A、龙血素C与核酸适配体之间没有表现出明显的结合现象.本文结果对进一步研究龙血竭在凝血酶上的潜在结合位点,以及核酸适配体能否向凝血酶靶向转运龙血竭,提供了科学数据支持.      

生物素-链霉亲和素系统压电传感实时响应特性研究

生物素与链霉亲和素之间具有高度亲合力和高度特异性,将其用于压电传感研究,反映出了生物素-链霉亲和素系统的压电传感实时响应特性.分别讨论了体系pH对生物素与链霉亲和素吸附行为的影响,链霉亲和素包被浓度、包被时间、结合反应时间等因素对生物素-链霉亲和素结合实验的影响以及结合反应的特征.结果表明,pH=7.4时以100 μg/mL链霉亲和素包被8 h后效果最好;结合反应中,生物素的浓度在0.11～1.65μg/mL范围内,传感器的响应频率值与溶液浓度成线性关系.     

桑色素-铝离子-核酸三元体系的研究及其分析应用

用分光光度法研究了桑色素-铝离子-核酸三元体系。在pH 3.25的Britton-Robinson介质中, 桑色素在250,300和350nm处有吸收峰。铝离子的加入使桑色素350nm处的吸收峰下降, 在419nm处出现桑色素-铝络合物的吸收峰。再往桑色素-铝离子二元体系中加入核糖核酸或脱氧核糖核酸, 则进一步引起桑色素350nm吸收峰的降低,419nm处的吸收大大加强, 同时在370nm处有一等色点。419nm处吸光度的增加值与加入的核酸量在一定范围内成正比, 基于此建立了在较宽范围内测定核酸的方法。其线性范围分别为：ρ(ct DNA), 0.71～35.4μg/mL;ρ(fs DNA), 0.64～25.6μg/mL;ρ(y RNA), 0.94～28.4μg/mL。     

Determination of the total concentration of casein and β-lactoglobulin by indirect competitive ELISA in milk and dairy products

The main purpose of this work was to develop an assay as a means of quality control in milk and dairy products. As specific and high abundant proteins in milk and diary products, casein and β-lactoglobulin were chosen as the targets, and an indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was developed for determination of the total concentration of casein and β-lactoglobulin. The detection limit of the assay was 79.07 ng/mL, and a working range of the calibration curve was from 140.6 to 36,000 ng/mL. The intrassay and inter-assay coefficients of variations were 4.7 % and 6.5 %, respectively. The recoveries ranged from 94.1% to 106.6 %. The developed ELISA assay was used to detect the total con- centration of casein and β-lactoglobulin in liquid milk and milk powder. The results indicated that the developed assay was very specific, and the addition of nonprotein nitrogen （such as melamine, cyanuric acid, and urea） and vegetable protein did not affect the detection. The good performance of the assay makes it suitable for use in the quality control of milk and dairy products.     

Novel protein detection method based on proximity-dependent polymerase reaction and aptamers

In recent years, specific detection of proteins is one of the hot issues about aptamers in proteomics. Here we reported a simple, sensitive and specific proximity-dependent protein assay with dual DNA aptamers. Thrombin was used as the model protein, and two aptamer probes with complementary sequence at 3′-end were designed for the two distinct epitopes of the protein. Association of the two aptamers with thrombin resulted in stable hybrids due to the proximity of 3′-end, then polymerase reaction was induced. The amount of obtained dsDNA was indicated using the fluorescence dye Sybr Green I. The results showed that the initial velocity of polymerase reaction had a positive correlation with concentration of thrombin. The advantages of this dual-aptamer-based approach included simple and flexible design of aptamer probes, high selectivity and high sensitivity. The detection limit was 6.9 pmol/L.     

结合适配体技术的磁性粒子表面蛋白分子印迹材料研制

本文将具有高度特异性的生物分子核酸适配体引入分子印迹技术,并结合磁性纳米粒子材料比表面积大、操作简便性和易于修饰性于一体,制备出了新型蛋白分子印迹材料.首先获得性能更好的硅烷化的磁性微球,之后加入功能单体、交联剂和衍生化适配体,以溶菌酶为模板分子,制备出磁性溶菌酶蛋白分子印迹适配体-纳米粒子.实验结果显示,不同材料的蛋白吸附能力顺序由高到低分别为结合适配体的蛋白印迹材料,结合适配体的非蛋白印记材料,蛋白印迹材料和无适配体的非蛋白分子印记材料.初步研究表明,适配体与磁性粒子的结合可以有效提高蛋白质分子印迹材料的印迹效果.     

电堆积毛细管电泳法检测食品中四环素类抗生素残留

建立了一种采用电堆积方式在线富集的毛细管电泳检测牛奶、鸡蛋和蜂蜜中(包括四环素、土霉素、强力霉素在内)3种四环素类抗生素残留的方法.对影响富集倍数和分离的主要因素进行了优化.最佳运行缓冲液为20mmol/L的柠檬酸盐溶液,pH为2.5,分离电压20kV;进样量25kV×30s.在优化条件下,四环素、土霉素和强力霉素的富集倍数分别为86,54和54;检出限为1.7～2.1,1.8～2.2和1.9～2.2μg/kg;定量下限均为20μg/kg,仅为欧盟标准中最大残留限量的1/5(牛奶)和1/10(鸡蛋).方法可应用于鸡蛋、牛奶和蜂蜜中3种四环素类抗生素残留的检测.     

液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中9种青霉素

建立了用液相色谱-串联质谱(LC-MS-MS)测定蜂蜜中9种青霉素残留量的分析方法.3g蜂蜜样品用25mL pH=8.5的0.15mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液溶解,用Oasis HLB固相萃取柱净化,目标物用乙腈-水(体积比1∶1)洗脱,定容收集液至3mL.采用电喷雾电离,正离子扫描,多反应监测(MRM)模式检测.0.5,1.0,2.0,5.0μg/kg 4个添加水平的回收率为76.9%～104.3%;相对标准偏差为3.29%～9.12%;方法定量限是:青霉素G、乙氧萘青霉素为0.5μg/kg,氧哌嗪青霉素、青霉素V、苯唑青霉素为1.0μg/kg,羟氨苄青霉素、氨苄青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素为2.0μg/kg.     

阿司匹林对斑马鱼胃肠道的毒性研究

以斑马鱼作为动物模型,通过胃肠道蠕动功能分析、胃肠道内皮细胞分泌功能检测和肠粘膜组织形态学观察等,对阿司匹林的胃肠道毒性做了初步分析。研究发现,阿司匹林浓度为50 μg/mL时,可以加快斑马鱼胃肠道的蠕动;浓度为50 μg/mL或100 μg/mL时,虽然斑马鱼肠粘膜的组织形态未受损害,但是位于肠粘膜上的杯状细胞的分泌功能会受到影响。     

基于层状二硫化钼-石墨烯构建新型17β-雌二醇电化学生物传感器

合成了层状二硫化钼-石墨烯纳米复合材料.通过将适配体固定在金纳米和二硫化钼-石墨烯共同修饰的电极上构建了一种新型的环境激素17β-雌二醇电化学生物传感器.采用循环伏安、微分脉冲伏安、电化学阻抗等技术对传感器的构筑过程进行表征.对17β-雌二醇与适配体特异性结合的时间及温度进行了优化.结果表明,峰电流与17β-雌二醇浓度在1.0×10-11~1.0×10-8 mol/L范围内呈良好的线性关系.计算得到的检出限为5.0×10-12 mol/L(空白的三倍标准偏差).该生物传感器具有良好的选择性和稳定性.     

柠檬黄的ELISA检测方法的建立

利用免疫学基本原理，获取抗柠檬黄的单克隆抗体，以此建立了从食品中检测柠檬黄的间接竞争ELISA．试验表明：OVA—TE最适包被浓度为1μg／mL；酶标抗体最适工作浓度为1：3000；酶标抗体的作用温度和时间分别为37℃，lh；封闭液为1％明胶；底物显色时间为15min；对柠檬黄的最低检出量为26．34ng／mL；抗体的最适稀释倍数为1：12000倍；对该方法进行交叉性试验和重复性试验，结果表明此法是一种特异、灵敏、快速的检测方法，并适合大批量样品检测．     

轮状病毒间接免疫荧光的检测方法

以兔抗SA11多克隆抗体为一抗、 Alexa 488标记的山羊抗兔抗体为二抗, 通过对反应条件的优化建立轮状病毒（RV）检测的间接免疫荧光法（IFA）. 实验结果表明, IFA最佳工作条件为: MA104细胞密度为每孔2×10⁴个, 胰酶活化轮状病毒质量浓度为1 μg/mL, 培养时间为18 h, 一抗最适稀释度为1∶800, 二抗最适稀释度为1∶500.