促根霉(Rhizopus ferrugineus)产葡萄糖淀粉酶的活性肽研究

用Sephadex G—25分子筛层析、DEAE—Sephadex A—25 离子交换层析和高效液相色谱方法,从胰化酪蛋白胨中分离出对根霉(Rhizopus ferrugineus)产葡萄糖淀粉酶(Glucoamylase)有促进作用的活性肽。该活性肽为电泳纯物质,其理化性质为:最大紫外吸收波长200nm;N—末端氨基酸是丙氨酸;分子量1760 道尔顿;氨基酸残基数16;等电点PH约3.6;肽分子内不含芳香族氨基酸和含硫氨基酸,富合酸性氨基酸。该活性肽能使根霉葡萄糖淀粉酶的产量增长400％,但对细胞增殖和生长无影响。若将此肽水解为单个氨基酸,促产酶活性丧失。活性肽促产酶作用的最有效浓度为0.1mg/ml:肽浓度与促产酶活性呈饱和曲线关系。活性肽对根霉、曲霉一些菌株产葡萄糖淀粉酶都有较明显的促进作用。     

利用枯草芽孢杆菌发酵生产糖化酶的上游工艺研究

糖化酶-α-1,4-葡萄糖水解酶(α-1,4-Glucan glucohydrolace),又称葡萄糖淀粉酶[Glucoamylase,(EC.3.2.1.3.)],此酶作用于淀粉分子的非还原性末端,以葡萄糖为单位,依次作用于淀粉分子中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖。此酶作用于支链淀粉后的产物有葡萄糖和带有α-1,6-糖苷键的寡糖;作用于直链淀粉后的产物几乎全部是葡萄糖。本产品广泛用于生产白酒、黄酒、酒精、啤酒;用于以葡萄糖作发酵培养基的各种抗生素、有机酸、氨基酸、维生素的发酵;本品还大量用于生产各种规格的葡萄糖。总之,凡对淀粉、糊精必需进行酶水解的工业上,都可适用。糖化酶产生菌主要是黑曲霉(左美曲霉、泡盛曲霉)、根霉(雪白根酶、德氏根霉)、拟内孢霉、红曲霉等经深层发酵提炼而成,本文介绍的是利用枯草芽孢菌杆发酵来生产糖化酶的基本上游工艺过程。     

汾酒大曲根霉糖化酶的研究——Ⅰ、菌种选育与产酶条件的初探

糖化酶[葡萄糖淀粉酶(Glucoamylase)或淀粉葡萄糖苷酶(Amyloglucosidase)EC 3.2.1.3]可水解多糖类(淀粉、糖元和其他低聚糖类)中的α—1.4—葡萄糖苷键,同时亦可作用于α—1.6—葡萄糖苷键。有关曲霉(Aspergillus sp.)、红曲霉(Monascus sp.)和根霉(Rhizopus sp.)产生的糖化酶用于葡萄糖生产和酒精发酵已有详尽的评述。有关根霉糖化酶的研究报导也陆续出现,但目前国内则偏     

淀粉酶高产菌株筛选及发酵条件优化研究

从济源市麦田的土壤中筛选工业生产上有潜在应用价值的高产淀粉酶菌株,通过平板初筛和摇瓶复筛,得到高产淀粉酶细菌菌株P11 (2).对其产酶条件进行优化,最终得到最适碳源为可溶性淀粉,最适氮源为酵母粉和蛋白胨组合,加入MgSO4可以促进产酶,加入CaCl2或FeSO4抑制产酶.经正交试验确定培养基的最优组成,优化后的培养基...     

几株微生物胞外水解酶间的相互作用

分离纯化了在发酵生产中常见菌株的α－淀粉酶及中性蛋白酶,并对其相互作用进行了研究。结果发现,解淀粉芽孢杆菌ＢＦ所产的中性蛋白酶,对α－淀粉酶的失活作用强于其它菌株,黑曲霉ｕｖ－１１所产α－淀粉酶对中性蛋白酶较其它菌株敏感,细菌中性蛋白酶对霉菌胞外酶的水解作用强于细菌之间的相互作用。     

K123菌株普鲁兰酶（Pullulanase）的合成及其酶性质的研究

研究了一株从白酒发酵现场分离得到的Ｋ１２３菌株普鲁兰酶的合成及其部分酶性质,结果是Ｋ１２３菌株的异淀粉酶在培养液中的大量积累发生在稳定期后期,菌的最知生长温度为３５℃,产酶的最适温度则为３０℃;菌的最适生长ｐＨ和产酶的最适ｐＨ均在７．０－７．５;产酶的最佳碳源为可溶性淀粉,有效碳源是糯米淀粉,糊精,支链淀粉,玉米面,茁霉多糖,麦芽糖,而葡萄糖则抑制产酶;     

K_(123)菌株普鲁兰酶(Pullulanase)的合成及其酶性质的研究

研究了一株从白酒发酵现场分离得到的Ｋ１２３菌株普鲁兰酶的合成及其部分酶性质．结果是Ｋ１２３菌株的异淀粉酶在培养液中的大量积累发生在稳定期后期,菌的最适生长温度为３５℃,产酶的最适温度则为３０℃;菌的最适生长ｐＨ和产酶的最适ｐＨ均在７．０～７．５;产酶的最佳碳源为可溶性淀粉,有效碳源是糯米淀粉、糊精、支链淀粉、玉米面、茁霉多糖、麦芽糖,而葡萄糖则抑制产酶;产酶的最佳氮源是蛋白胨、酪素水解物,无机氮源则使得Ｋ１２３菌株的产酶量略低于有机氮源．通气量对菌体的生长影响较大,但菌体的生长达稳定期后,通气量的改变对菌的产酶影响不大．Ｋ１２３菌株所产的异淀粉酶水解茁霉多糖的产物为麦芽三糖,不水解动物淀粉,是普鲁兰酶（ｐｕｌｕｌａｎａｓｅ）．该酶反应的最适温度为５０℃,最适ｐＨ５．８,受Ｃａ２＋,Ｍｎ２＋等离子激活,受Ｃｕ２＋,Ｚｎ２＋等离子抑制;该酶的热稳定性较差,５０℃以上迅速失活;ｐＨ稳定性较好,中性,微酸性条件下,冰箱中可长期保存．该酶应用于固态白酒发酵可提高出酒率平均４％以上．     

氮离子注入选育耐酸性α-淀粉酶产生菌诱变效应的研究

利用低能(30keV)氮离子注入中温中性α-淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌BF7658,研究对其产耐酸性α-淀粉酶的诱变效应.结果表明,BF7658菌株存活率曲线是典型的"马鞍型"剂量-效应曲线,在"马鞍型"区域对应注入剂量50×1014～100×1014 ions/cm2下具有较高的突变率.通过诱变筛选到一株最适作用pH为5.0,较出发菌株的最适作用pH偏低一个单位的突变株,编号TUST743.该突变株产酸性α-淀粉酶的酶活为343U/mL.该酶在pH4.5和4.0条件下的相对酶活为61%和38%,说明此突变株所产酸性α-淀粉酶对低pH有较好的耐受性.经连续传代实验,表明该菌株遗传性质稳定.     

真菌α-淀粉酶固态发酵工艺及酶学性质研究

通过对米曲霉ZLF13固态发酵生产真菌α-淀粉酶的培养基要求及发酵工艺条件进行研究,结果表明,以麸皮和适量淀粉为主要原料,添加1号复合无机盐,保持培养基水体积分数为60%～65%,控制培养温度30～34℃,发酵周期65～70 h.中试平均酶活力1 283 U/g.通过对其酶学性质的研究发现,米曲霉ZLF13所产真菌α-淀粉酶最适作用温度为55℃,最适作用pH值为4.8～5.4;65℃以上迅速失活.     

一株产α-淀粉酶芽孢杆菌的分离及产酶条件的优化

以筛选与鉴定尉犁县黑湖产淀粉酶细菌,并对筛选出的细菌进行产酶条件优化为研究目的,从43株细菌中筛选出淀粉酶高产菌株HM-22,并对其进行了菌株形态学鉴定、16S r DNA分子鉴定以及产酶条件优化。从尉犁县黑湖采样的30个水、土和泥样样品中分离筛选43株细菌,从中筛选出14株产淀粉酶的菌株,采用Yoo改良法对产透明圈较大的菌株进行酶活力测定,从中筛选出了一株产酶活性较高的菌株HM-22。经革兰氏染色、菌落形态观察、生理生化检测和16S r DNA序列比对鉴定该菌与Bacillus tequilensis的相似性为99.8%,属于芽孢杆菌属。对菌株HM-22产酶条件进行初步优化确定其产酶的最佳条件是:该菌产淀粉酶最适温度为40℃,最适碳源为可溶性淀粉,最适氮源为牛肉膏,最适反应pH为6.0,最适产酶培养时间为24 h。优化后菌株HM-22的酶活力从最初的的酶活力122.45 U/m L达到147.53 U/m L,酶活力提高了17%。该研究为从新疆盐湖细菌中筛选淀粉酶活力较高的菌种资源及应用提供了理论依据和参考。     

嗜热脂肪芽孢杆菌中一株对分解代谢物不敏感突变型的α-半乳糖苷酶的纯化及其性质

棉子糖广泛存在于植物界,在甜菜储藏过程中含量逐渐增加。在以甜菜为原料的制糖工业中棉子糖的存在妨碍蔗糖结晶。文献报导用微生物来源的α-半乳糖苷酶处理甜菜糖蜜水解棉子糖,可以提高蔗糖得率和结晶的质量。不少真菌和细菌能产生α-半乳糖苷酶,例如赤色被包霉、红曲霉、杜邦青霉菌、泡盛酒曲霉、大肠杆菌、脂肪嗜热芽孢杆菌、卡尔斯伯酵母菌以及我国黑龙江应用微生物研     

氮离子注入选育耐酸性α-淀粉酶产生茵诱变效应的研究

利用低能（30keV）氮离子注入中温中性α-淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌BF7658，研究对其产耐酸性α-淀粉酶的诱变效应结果表明，BF7658菌株存活率曲线是典型的“马鞍型”剂量-效应曲线，在“马鞍型”区域对应注入剂量50×10^14-100×10^14ions／cm^2下具有较高的突变率．通过诱变筛选到一株最适作用pH为5．0，较出发菌株的最适作用pH偏低一个单位的突变株，编号TUST743．该突变株产酸性α-淀粉酶的酶活为343U／mL．该酶在DH4．5和4．0条件下的相对酶活为61％和38％，说明此突变株所产酸性α-淀粉酶对低pH有较好的耐受性．经连续传代实验，表明该菌株遗传性质稳定、     

氮输入和盐渍化对天津滨海湿地土壤可培养细菌和真菌群落组成及土壤酶活性的影响

为了探究滨海湿地土壤微生物和土壤酶活性对氮输入和盐渍化的生态响应,在天津滨海湿地采集土壤,进行不同氮输入水平和盐度的交互实验.氮输入水平分别为0、20和40 g/(m~2·a),盐度分别为0.1%和1.0%,研究不同处理下土壤可培养细菌和真菌的群落组成、数量、群落多样性和土壤酶活性.从天津滨海湿地土壤中分离到可培养细菌和真菌各10个属:在不同氮输入水平和盐度处理组合中均有分布的细菌有农杆菌属、微杆菌属、溶杆菌属和芽孢杆菌属,真菌有曲霉属、拟青霉属、镰刀菌属、青霉属和多环孢霉属.总体上,随着氮输入水平的增加,土壤细菌数量增加,而真菌数量降低,且细菌与真菌群落的多样性均呈降低趋势.随土壤盐度的增加,土壤细菌和真菌数量及多样性均有所降低.氮输入的增加显著促进了土壤蔗糖酶、β-葡萄糖苷酶和脲酶的活性,而土壤蛋白酶活性随氮输入增加先升高再降低;盐度增加对土壤酶活性没有显著影响.     

土壤中产a-淀粉酶菌株的分离和筛选

目的：从土壤中筛选产a-淀粉酶活力较强的菌株并对其酶学性质进行初步研究。方法：结合选择性分离培养,碘液检测法,酶活力测定和形态学检测等方法从土壤中分离出产酶活力较强的菌株,并对其所产仅一淀粉酶的最适反应温度和pH值进行研究。结果：共分离到4株能产a-淀粉酶的菌株,其中菌株4产酶活力最高。该菌株所产仅一淀粉酶最适反应温度为50～60℃,最适pH值为6．2。结论：分离到1株产a-淀粉酶酶活力较强的芽孢杆菌,所产仪一淀粉酶属于中温淀粉酶,最适pH值为6．2。     

贮存时间对春小麦种子某些生化性质的影响

本文对贮存二年和十四年的八个春小麦品种进行了蛋白质和丙二醛含量、α—淀粉酶、过氧化物酶、酯酶同工酶及其酶活性的分析比较,分析结果表明:贮存十四年的种子其蛋白质含量,α—淀粉酶与过氧化物酶的活性都有明显的降低。过氧化物酶、同工酶酶谱差异较明显。α—淀粉酶有4—5条同工酶带,且均为阴极酶带。贮存时间长的种子丙二醛的含量较高。酯酶同工酶酶谱的差异则主要在慢带区表现出来。     

松材线虫病死木中真菌和细菌的分离

从来自江苏省和浙江省几个疫区的松材线虫(PWN)病病死木的木质部中分离出111个真菌菌株，经鉴定种类为木霉(Trichoderma spp．)、轮枝霉(Verticillium spp．)、青霉(Penicillium spp．)、镰孢霉(Fusarium spp．)、曲霉(Aspergillus spp.)、毛壳菌(Chaetomium spp．)、茎点菌(Phoma spp．)、短梗单孢霉(Dicoccum sp．)、头孢霉(Cephalosporium sp．)、交链孢霉(Alternaria sp．)，这些真菌约占分离真菌总数的60％；在43％的未鉴定菌中，除3个菌株为有孢菌外，其余均是无孢菌。可以分离出真菌的病死木占56．42％，从病死木中可分离出细菌的比例达86％，可同时分离到真菌和细菌的比例为43．6％。     

产酶苦豆子内生细菌筛选及其活性菌株鉴定

对苦豆子健康植株和种子内的内生细菌进行分离,共分离获得41株内生细菌.对41株菌株进行了分泌胞外淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶特性的研究.结果表明,有80.5%的菌株具有蛋白酶活性;有78.0%和61.0%的菌株具有淀粉酶和纤维素酶活性;具有几丁质酶和葡聚糖酶活性的菌株则较少.经16SrRNA基因序列分析鉴定,6株高活性产酶菌株与枯草芽孢杆菌属(Bacillus subtilis)、韩国丛毛假单胞菌(Pseudomonas koreensis)、固氮阴沟肠细菌(Enterobacter cloacae)、苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)和嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)亲缘关系较近,核苷酸序列一致性在98%以上.     

一株α-淀粉酶生产菌的分离鉴定及其产酶条件优化

平板水解圈法从土壤中分离产淀粉酶菌株。通过碘比色法测定产淀粉酶分离菌株的酶活,筛选出一株产酶量较高的菌株,鉴定其种类,并对其产酶条件优化及酶学性质进行研究。通过革兰氏染色、生化鉴定和16SrDNA序列比对鉴定该菌的种类;从pH、温度、碳源、氮源等方面进行产酶条件优化。菌种经16S rDNA PCR序列分析比对,为枯草芽孢杆菌,因此将分离到的菌株命名为Bacillus subtislis-Y9;菌株最佳培养基配方为：淀粉6g,酵母膏13g,氯化钠5g,添加1.0%的吐温于1000mL蒸馏水中;最佳培养条件为：初始pH值为7.5;培养温度为37℃,培养时间36h。在上述培养基和优化培养条件下菌株发酵液的α-淀粉酶酶活达到7.1U/mL,约为出发菌种的5.5倍。酶学研究显示,α-淀粉酶的最适反应温度为40～60℃,反应体系pH值为6.6,并需添加0.5%CaCl2。     

PEG胁迫对甘薯不同器官的愈伤组织淀粉酶活性的影响

淀粉酶是水解淀粉的酶类，根据其分解淀粉的不同，可以分为α-淀粉酶和β-淀粉酶，α-淀粉酶可将淀粉水解为葡萄糖，而β-淀粉酶则只能从淀粉的非还原末端将淀粉水解为麦芽糖和限制型糊精，又称淀粉-1，4-麦芽糖苷酶，被广泛应用于饴糖、啤酒和高麦芽糖的生产，大麦、小麦、大豆和甘薯等植物中的β-淀粉酶含量高，中国主要以大麦芽作为β-淀粉酶源，每年需消耗大量粮食来生产β-淀粉酶制剂。     

生物技术在酱油生产中的应用

酱油酿造中起主要作用的是各种酶。淀粉酶是时酿造酱油生产中淀粉质原料进行作用,形成酱油中还原糖,糊精等成分,增强酱油固型物以及提供酒精发酵、有机酸发酵的原料成分。蛋白酶是将大豆蛋白质水解成低分子蛋白胨、朊、多肽及氨基酸,使酱油含有多肽和氨基酸,成为营养丰富含有鲜味的调味品。纤维素酶是水解纤维素使之变成葡萄糖,同时纤维素酶具有对植物细胞壁的溶解破坏作用,使植物细胞中内含物得到充分利用。通过添加这几种酶,明显提高了原料利用率,改善了酱油风味。生物技术在酿造酱油生产中将得到大力的发展。