胆酸钠多克隆抗体的制备及其快速检测方法研究

目的:探索用胶体金免疫层析法快速检测胆酸钠含量。方法:用碳二亚胺法合成的免疫抗原胆酸钠-BSA,免疫新西兰白兔,制备抗胆酸钠多克隆抗体。用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定特异性抗体效价。制备胆酸钠—OVA抗原—胶体金复合物,组装检测试纸。结果:胆酸钠抗体的效价为1∶80 000,建立的胶体金快速测定法对胆酸钠的检测限为12μg/mL。结论:试纸条法是快速检测胆汁酸含量的有效方式,在临床检测方面具有广阔的运用前景。     

应用单克隆抗体建立快速狂犬病毒抗原检测方法及其应用的研究

该项目运用单克隆抗体技术快速检测狂犬病毒抗原，采用狂犬疫苗作为标准抗原，免疫动物，制备出抗狂犬病毒的单克隆抗体，再将获得的多株单抗混合，增加单抗的亲合力，捕捉狂犬病毒抗原，做成酶免疫双抗体夹心法试剂。用该试剂对不同来源的狂犬病毒株和不同来源的狂犬疫苗进行检测，结果与法国巴斯德研究所生产的试剂测试结果相同，     

左氧氟沙星人工抗原的制备及其抗体鉴定

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星与载体蛋白牛血清白蛋白偶联制备免疫抗原,用氯甲酸异丁酯法将左氧氟沙星与鸡卵清蛋白偶联,制备包被检测抗原,采用紫外扫描法对合成的抗原进行鉴定.用免疫抗原免疫大白兔获得抗左氧氟沙星多克隆抗体血清,经间接ELISA试验检测特异性抗体效价,测得效价达1:212以上.通过紫外扫描及间接ELISA试验,结果表明,制备的抗原和抗体获得成功.     

SPE-GC-MS/MS-SRM法快速检测尿液中12种常见毒品成分及代谢物

目的建立了固相萃取-气相色谱-三重四极杆串联质谱法（SPE-GC-MS/MS-SRM）快速检测尿液中苯丙胺、甲基苯丙胺、去甲基氯胺酮、氯胺酮、吗啡、O6-单乙酰吗啡等12种常见毒品及代谢物的方法。方法尿样经SPE提取,利用气相色谱-三重四极杆串联质谱的选择反应检测扫描模式（SRM）检测,外标法定量。结果 12种常见游离毒品及代谢物分别在一定浓度范围呈良好的线性关系,线性相关系数r2〉0.996 4,平均加标回收率75.9%～102.6%,相对标准偏差（RSD）为3.13%～12.59%,最低检出限为0.1～24.0pg/mL。结论本方法简单、快速,灵敏度高,定性准确,适用于吸毒尿样的日常实验室检测和确证工作。     

梅毒螺旋体重组抗原在血清学诊断中的应用

对有关人群进行梅毒筛检是控制和预防梅毒传播的重要措施之一.目前,检测梅毒螺旋体特异抗体通常使用TPHA法和FTA-ABS法,近年来则逐步采用ELISA检测梅毒螺旋体IgM和IgG抗体,用于大量标本检测和献血者的筛查.由于梅毒螺旋体体外培养尚未成功,要获得性质均一、稳定、充足的抗原很困难,因此,抗原的来源成为制约这些诊断方法应用的关键问题.基因工程重组抗原不仅为抗原来源提供了一条主要途径,而且还能克服制备天然抗原时不可避免的兔蛋白污染.近年来,被逐渐应用于多种血清学诊断方法的研究和相关试剂盒的开发.     

抗大肠癌组织差异表达蛋白(SCAP47)抗体的制备及初步应用

制备一种新的大肠癌组织差异表达蛋白质抗体(抗SCAP47)，用于检测大肠癌相关肿瘤抗原SCAP47。采用本室制备的大肠癌组织差异表达蛋白质(SCAP47)免疫新西兰纯种兔，制备兔抗SCAP47抗体，用双向免疫扩散法和ELISA法测定抗体效价；并用ELISA法检测129例患者的胃肠道肿瘤和疾病及正常对照组织的可溶性SCAP47抗原。用SCAP47抗原免疫新西兰纯种兔，获得抗SCAP47抗体，经检测其最高效价：双向免疫扩散法为1：32；ELISA法为1：6400。129例患者的胃肠道肿瘤和疾病及正常对照组织可溶性SCAP47抗原ELISA法检测结果显示：诊断大肠癌的敏感性52．4％，特异性95．4％，阳性预示值84．6％，阴性预示值80．6％，似然比11．4，约登指数0．47。本实验制备的抗SCAP47抗体是一种新的大肠癌相关抗原SCAP47抗体。由于SCAP47不同于CEA、P^27、CCA等大肠癌肿瘤标志物，且在大肠癌中呈现高度表达，推测其可能是一种新的大肠癌相关抗原。因此，制备抗SCAP47抗体为用于多种指标联合检测早期大肠肿瘤提供了一种新的检测工具。     

RH株弓形虫抗原及高效价多克隆抗体的制备

通过制备和分析弓形虫抗原蛋白，并以此抗原制备高效价的兔抗弓形虫多克隆抗体，为弓形虫的免疫检测和诊断提供有效的方法和途径，同时也为基因工程产物的鉴定提供方便有效的检测手段．速殖子主要来源于感染后72～74h获得的腹水，通过常规方法制备和提纯弓形虫可溶性抗原，采用SDS-AGE方法分析抗原蛋白的分子量．以抗原和福氏佐剂制备成完全和不完全福氏佐剂通过脊柱两旁皮下多点免疫的途径免疫新西兰大白兔，制备兔抗弓形体多克隆抗体，间接ELISA法检测血清中抗体的效价．经过观察所获得的虫体阶段主要处在宿主细胞巨噬细胞内而尚未逸出阶段，通过对结果的分析，所制备的弓形体抗原的分子量主要集中在17～156ku之间，与文献报道有差异，兔抗弓形体抗体效价在60000以上．该研究结果将为弓形体的蛋白质研究，免疫诊断、预防及有效治疗奠定基础．     

氯霉素多克隆抗体的制备及特性分析

为了建立快速检测氯霉素(CAP)的免疫学方法,采用重氮法、混合酸酐法与碳二亚胺法(EDC)法分别合成氯霉素完全抗原,并通过稳定性比较实验确定采用混合酸酐法合成的氯霉素卵清蛋白(CAP-OVA)免疫BMb/C小鼠,制备抗血清,采用EDC法制备的氯霉素牛血清白蛋白(CAP-BSA)作为检测抗原,用ELISA方法进行鉴定与特性分析.结果显示该多抗与常见抗生素的交叉反应率均小于0.01%,IC50为18.53 ng/mL,灵敏度达到0.53ng/mL,该抗体可用于氯霉素的快速检测.     

唾液中HIV抗体快速检测诊断胶体金免疫层析试纸条的研制

制备一种适于早期HIV的大范围筛查使用的检测人唾液中抗HIV-1抗体的胶体金免疫层析试纸条.采用柠檬酸三钠还原法制备直径为19nm的胶体金颗粒,标记HIV-1gp41抗原,制备胶体金免疫复合物,按常规组装成免疫层析检测试纸条.结果表明:阳性HIV患者唾液中的抗HIV抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的红色圆点.胶体金颗粒粒径均一,胶体金免疫复合物性能稳定,特异性强,试纸条检测时间只需10～20min.制备的胶体金免疫层析试纸条检测唾液中HIV抗体,使用安全,简便快速,结果准确,适用于基层医疗单位使用和对大量人群的规模筛查等.     

用离子色谱法测定人尿中的草酸

本文叙述了一种使用离子色谱技术测定人尿中的草酸的新方法。该方法只需要简单的样品制备:尿样用盐酸酸化,用去离子水按需要稀释,最后通过0.2μm孔径的微孔滤膜过滤就能直接注入离子色谱仪分析。本方法每分析一个尿样仅需10min,在稀释后的尿样中草酸的低检测限为0.1ppm(1.1μmol/l),用标准加入法获得的草酸平均回收率为100.28%。我们使用本方法测定了300多个尿样中的草酸,其线性范围为1～1000ppm,相对标准偏差为4%。本方法可以用于人尿中草酸的直接测定。     

甲基苯丙胺毒品的微波加热衍生化气相色谱分析

甲基苯丙胺为含有氨基的有机化合物,由于氨基为一极性基团,易与固定相形成氢键,直接进行气相色谱分析,会导致峰形拖尾,使检测灵敏度降低。为了提高灵敏度,通常采用衍生化的方法。由于传统烘箱加热衍生化法比较费时,因此采用微波加热进行甲基苯丙胺毒品的衍生化。在考查了影响衍生化的各种因素后,建立了甲基苯丙胺的最佳衍生化条件,经衍生化后,得到甲基苯丙胺衍生化产物的线性相关系数R2=0·9984。用FID检测时最小检测限(S/N=3)由衍生化前的40ng提高到了4ng,5次测定的RSD为3·38%。该方法简便、快速,可广泛用于低含量苯丙胺类毒品的分析。     

日本血吸虫天然抗病分子疫苗的结构与功能分析 Ⅰ.未成熟卵28kDa分子的快速分离纯化与鉴定

为了进一步研究日本血吸虫天然抗病分子(SIEA 28 kDa)的结构与功能,采用SDS-PAGE制备电泳和电洗脱法从日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)中快速分离纯化了SIEA 28 kDa抗原分子,纯化后抗原分子经梯度凝胶电泳分离,重复测定其分子量。同时,采用Western blot和ELISA检测SIEA 28 kDa分子的免疫活性及其生化纯度。证实获得的提取物SIEA 28 kDa抗原分子的纯度高、活性好;用该抗原分子免疫家兔获得的单特异性抗血清可同时识别日本血吸虫未成熟虫卵、雌虫和雄虫的28 kDa抗原组分。说明该分子与日本血吸虫成虫(AWA)28 kDa组分具有部分交叉抗原性。     

神经元特异性烯醇化酶的快速检测方法研究

拟以双抗体夹心法制备快速检测试条，检测脑中风疑似患者体液中的NSE水平，从而达到快速诊断目的。本研究通过DEAE-Sephadex A-50柱层析法完成了牛脑NSE的提取纯化，并建立了具有抗ANSE活性的Anti-NSE MoAb AA10和AB3单克隆抗体细胞株，完成了单克隆抗体的筛选、制备、工作单抗配对等方面的工作。     

日本血吸虫天然抗病分子疫苗的结构与功能分析I.未成熟卵28KDa分子的快速分离纯化与鉴定

为了进一步研究日本血吸虫天然抗病分子（SIEA28KDa）的结构与功能,采用SDS-PAGE制备电泳和电洗脱法从日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（SIEA）中快速分离纯化了SIEA28KDa抗原分子,纯化后抗原分子经梯度凝胶电泳分离,重复测定其分子量,同时,采用Western blot和ELISA检测SIEA28KDa分子的免疫活性及其生化纯度。证实获得的提取物SIEA28KDa抗原分子的纯度高、活性好;用该抗原分子免疫家兔获得的单特异性抗血清可同时识别日本血吸虫未成熟虫卵、雌虫和雄虫的28KDa抗原组分,说明该分子与日本血吸虫成虫（AWA）28KDa组分具有部分交叉抗原性。     

吗啡人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

利用化学法合成吗啡人工抗原,将此抗原免疫新西兰大白兔制备抗吗啡多克隆抗体.利用混合酸酐法将吗啡人工抗原分别与蛋白质载体BSA及OVA偶联,经蛋白质电泳以及紫外扫描检测,证明吗啡人工抗原合成成功.用间酶联免疫检测法检测,证明制备得到了高效价的吗啡多克隆抗体血清,且与吗啡人工抗原具有高特异性反应,可用于吗啡免疫学检测方法的研究.     

重金属免疫掣检测研究进展

重金属免疫学检测技术和传统检测方法相比不但检测速度快、费用低廉、操作简便而且具有灵敏度高和选择性强等优点.进行重金属免疫学检测首先选择或合成双功能鳌合剂鳌合重金属离子并与载体蛋白偶联制备出完全抗原,进一步制备出金属特异性单抗.重金属免疫学检测方法主要有竞争性ELISA检测、KinExA免疫检测、荧光偏振重金属免疫检测法和免疫胶体金快速层析法等.     

负载野生型p53抗原肽HLA-A~*2402四聚体的制备和鉴定

目的:制备负载野生型p53抗原肽的HLA-A*2402四聚体,用于检测卵巢肿瘤患者p53特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。方法:在p53125-134抗原肽TYS和轻链β2微球蛋白存在时,利用稀释法复性获得负载p53125-134抗原肽(TYSPALNKMF,TYS)的可溶性单体,经生物素酰化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成HLA-A*2402/TYS四聚体,以流式细胞仪检测特异性CTL的频率。结果:流式细胞术分析显示,卵巢癌患者外周血中可检测减低频率的p53125-134TYS抗原肽特异性CTL。结论:成功制备HLA-A*2402/TYS四聚体。     

四环素人工抗原的制备与鉴定

根据四环素的化学结构特点,四环素与对氨基苯甲酸通过重氮法合成半抗原.经过酸化,乙酸乙酯萃取提纯,半抗原通过质谱鉴定.通过活化酯法,半抗原分别与BSA和OVA连接制备人工免疫原和包被原,抗血清的效价分别为1﹕70.000和1﹕32.000,为制备四环素人工抗原提供一种更为有效的途径,进而建立酶联免疫快速检测方法,为最终实现四环素检测试剂盒的研发奠定基础.     

辣椒、花椒中罗丹明B免疫层析分析

为建立以胶体金标记抗体为基础的罗丹明B(RB)快速检测技术,利用戊二醛法将RB的衍生物罗丹明123(R123)与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)分别合成完全抗原(R123-BSA)和包被抗原(R123-OVA),对雌性大耳白兔皮下注射R123-BSA获得多克隆抗体.胶体金作为示踪标记物标记到硝酸纤维素膜(NC膜)上,涂覆R123-OVA作为检测线,用羊抗兔IgG作为质控线,通过优化实验条件,开发了渗滤式胶体金免疫快速检测试纸条,研制出RB标准品浓度比色卡.以比色卡作为判定依据,以辣椒、花椒为研究对象,消除基质影响,进行试纸条检测.结果表明:RB线性为0.01~20 ng/mL,其最低检出限为0.5 ng/mL,试纸条显色结果明显.该试纸条实验成功,无需特殊设备即可实现现场快速检测,适用于快速定性检测香料中RB.     

环丙沙星人工完全抗原的制备与鉴定

分别采用碳二亚胺法和氯甲酸异丁酯法制备环丙沙星的牛血清白蛋白与卵清白蛋白载体的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA.人工完全抗原经SDS-PAGE凝胶电泳初步鉴定后,考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量分别为1.24和0.58 mg.mL-1,将偶联抗原稀释至一定浓度,紫外分光光度法测其波形,根据偶联前后波形及吸收峰的变化鉴定偶联物分子量大于载体蛋白,证实CPFX与BSA和OVA偶联成功,根据游离半抗原、载体蛋白和完全抗原偶联物各自的紫外吸光度、摩尔吸光系数,初步定量计算出偶联结合比分别为7.2∶1和6.4∶1.质谱法测定CPFX-BSA和CPFX-OVA分子量分别为6.895×104和4.586×104,推算偶联比分别为5.6∶1和4.2∶1,进一步证实了偶联比和人工抗原制备成功.制备的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA可分别作为免疫抗原和包被抗原,为环丙沙星单克隆抗体的制备以及环丙沙星快速检测试剂盒的研制奠定基础.